К. Хаусман - Протозоология (1107653), страница 34
Текст из файла (страница 34)
1И). Распространенный ранее взгляд на кристаллы как на продукты обмена (нэкскреторные зерна»), ко~орые как-то выводятся наружу, сегодня больше не имеет сторонников. В насгоящее время обсуждаются следую- 1'псннаяьпак *чипы, лл1 в. )К1. Еир1озев 1а) с кристаллилш нопюрые гветнпгч в поляризовоннои счете «и) и жжап~ в вокролял (в), е накрали < криьчпиллилш ) Раьсипесьнт на р~ьтралпонком срезез д -для улынраструкьпуры .штоспи, которые дивт в нолчрьпованйам свепш м~шь слабое дьюбпое льчспреломление сер Ли на рис. в), ч ь)кькть'рно Концентрическое наслоение маак риала. 222 Протезоология Ю шие две алыернативы: 1) кристаллы представляют собой места накопления или внутриклеточные запасы ионов, необходимых для процессов метаболизма; 2) с помошью этих включений в клетке повышаются или понижаются концентрации определенных ионов, благодаря чему они удерживаются в физиологических границах. Имеются аргументы в пользу как той, так и другой возможности.
Например, у некоторых амеб всегда находят кристаллы, которые после их экспериментального удаления из клетки относительно быстро образуются снова. С другой стороны, для многих простейших характерно особенно обильное образование кристаллов в субоптимальных условиях культивирования. Опыты к главе «Захват пищи, пищеварение, дефекация» Индукция пино- и фагоцитоза А) Культуральную среду АтоеЬа ргоыш заменяют 0,5; -ным раствором белка куриного яйца в 0,01 М ацстагном буфере.
Клетки округляются и начинают образовывать пиноцитозные каналы )см. рис. 166) Через 1Π— 15 мин пиноцитоз прекрашается. После примерно 4-часового «отдыха» в культуральной среде можно снова индуцировать пинопитоз. Б) К амебам )А. рго!еиз), голодавшим в течение 1 — 2 дней, добавляют клетки Рагатесшт, Со!р!гиит или Бид!ела. Округлившись, амебы начинают фагоцитировать так, как это показано на рис. 166. Выявление токов воды, служащих для захвата пищи Чтобы выявить токи воды, создаваемые активностью жгутиков и ресничек, больше всего подходя~ прикрепленные организмы — например, хоанофлагелляты или сидячие инфузории. Если в среду с этими организмамн добавить мелкодисперсный материал )шарики латекса, частички угля, взвесь кармина или же одноклеточные водоросли, дрожжевые клетки, бактерии), траектория движения частиц показывает направление токов воды.
Если в этих условиях сделать фотографии с выдержкой в несколько секунд, токи воды можно проследить по смазанному изображению частиц (рис. 183), 11~ Ж~о Риа !а2. Формы кристаллов у РаеаЖ теаии (но Виктермануа <'псцнзпьизя чзсш 223 ~ч'вч 'а „'- 4 ч: е.".1:в ° ' .' иь ч е )кис. 183.
Регистровая пьоков воды, кьыываемых Звг1опрсма. с памоьчыо чоппио угля и фотсырифированпч с' давимой выдержкой, вид сверл! (ад и обок! 1од в — мо же скельоспически гфогпо и рис. Г. Чалемера, Болты у. Определение скорости образования пищевых вакуолей в зависимости от температуры В срелу с клетками Ригагпесшт„со1р(с)!ига или тегга)чутепо добавляют разведенную тушь.
Разведение туши: 2 капли рисовальной туши (без консервантов или ускорителей сушки, например «Скрибтол», «Фабер-Кастелл») добавить к 1 мл бидистиллированной воды. К 1 мл культуры инфузорий добавляют 2 — 3 капли этого основного раствора. Следует установить, сколько темноокрашенных пищевых вакуолей (рис 184) образовалось за 5, !О и 20 мин: (а) при компактной температуРе (20'С), (б) при 10"С, (в) при 35-С.
темперпуру регулирукп с помощью водяной бани. Результаты могут быть представлены графически. Следует отметитгч когда в среде появляются первые дефекационные шарики (показатель длительности пищеварения). 224 Г!розозоо:и ~ив Рис !84. Ввивмиие иииЗевых вакуолей лузиел кормлении иаеоивниии уевв изяргзорий Го!Гввйиш Го! и Рагашее!ит Гб!.
Выявление активности кислой фосфатазы Фермент кислая фосфатаза (маркерный фермент лизосом) выявляется следующим образом; 1. Инфузорий кормят в течение !О мин перед фиксацией. 2. Фиксируют раствором Карновского 30 мпн на холоду (на ледяной бане). Раствор Карновского: 2 г параформальдегнда растворить прн 60 Г в 25 мл воды. Растворению способствун т 2.-3 капли 1 н.
ХаОН. Охладить. Добавить !О мл В'„'-ного глутаральдегила и долить до 50 мв 0.2 М каходилатным бчфером (рн 7.2). 3. Четырехкратно отмывают фиксатор (по 10 мин на холоду) 100 мМ )ча-ацетатным буфером (рн 5,5). При этом клетки медленно переводятся нз области нейтрального рН в область кислых рН. 4. а) Инкубируют в срсле Гомори при 37'С на водяной бане в течение 25 мин. Грела Гомори (готовить в лень нсполь ювания!): 0,06 г нитрата свинца растворить в 45 мл )ча-ацетатного буфера (!00 мМ. рН 5,5).
Затем прн помешивании добавить по каплям 10 мл 3":,';ного раствора (к!а-~3- глицерофосфата (субстрат! и долить водой до 90 мл. Довести рН до 5,5 с помощью 10~';ной уксусной кислотьь Готовый распюр хранят при 37'С (на водяной бане). Перед инкубацией проверяют рН и, если нужно, доводят до 5„5; затем доводят обком до 100 мл водой и фильтруют. б) Контроль: среда Гомори (см.
и. «ач), содержащая РвмМ Хар, 5. Трехкратно отмывают среду !00 мМ о!а-ацетатным буфером при комнатной температуре (по 1О квин). Гаеиниаьнзл и>с> ь 225 Ри . 1Ю. Ойнарувыение нищеваритель>сык ферментов на лримере вылвленил кислой фосфа>лаки> (верный> осадок) у инфу>ории Рк">а1о>н>сео>1>оеае Основное ко>ииество фер. мента натн>илкл у накала ламткового алоаралю. 6.
Осаждают РЬК с помощью 0,5":;;ного сульфида аммония. Обрабат>а- вать максимум 1 мин. 7. Двукратцо промывают водой. 8. Светомикроскопическн исследун>т опыт и контроль. После каждого этапа клетки центрифугируктг и надосадс>чную жидкость осторожно отсасыванп. Ход реакции: Во время инкубацни при 37"С и рН 5,5 1температурный и рН-оптимумы кислой фосфатазы) от субстрата (1к1а+г4тицерофосфата1 с помощью кислой фосфатазы отщепляется ион РО> который немедленно осаждается ннтратом свинца в виде фосфата свинца Тем самым предотвращается диффузия фосфата из мест ферментной активности. Выпавший белый фосфат свинца виден .только в электронный микроскоп, поэтому для световой микроскопии фосфат свинца нужно перевесп> с помощьн> сульфида аммония в хорошо вндимл>й черно-коричневый сульфнл свинца 1рис.
1851 В контрольной среле Хар блокирует расщепление субстрата, так как ингибирует все активные в кислой среде Ферменты. Морфогенез и размножение Многие протисты могут менять свой облик в ходе жизненного цикла в зависимости от внутренних и внешних >факторов. Если в ходе такого преобразования части организма, пе. органеллы, рассасываются или Формируются заново, процесс в целом называют морфогенезом. Под этим общим понятием объединяют ряд различных явлений, в основе которых, как показывает более точный анализ, лежат опрелеленные общие механизмы. е>налогично дифференцировке клеток многоклеточных >5 — 455 226 Прогоэоологяя в пределах ткани в морфогенезе у протистов можно различить некую временную н пространственную последовательность частных процессов, которые после их индукции протекают координированно и приводят к окончательному формированию организма.
Морфогенетические процессы в жизненном цикле протистов У большинства протистов в большей или меньшей степени выражена способность существовать в виде различных форм. Некоторые трансформации вызываются, по-видимому, главным образом изменениями среды (например, солености, температуры, рН) и наблюдаются в природе лишь изредка. Другие преобразования, очевидно, зависят в основном от внутренних факторов и часто представляют собой обязательные и закономерные стадии в жизненном цикле клетки. Степень участия морфогенетических процессов в этих преобразованиях зависит как от характера трансформации, так и от уровня организации (степенн сложности) организма.
Полиморфизм Ко~да генетически идентичные клетки (клоны) нли особи одного вида встречаются в разных формах, говорят о цолиморфизме. Так, при недостатке пиши у различных инфузорий (например, В1ерЛаг(яиа, Б~у1олус)пп) могут возникать карликовые формы. При этом размерь| уменьшаются иногда до 100 раз, но все пропорции тела сохраняются (рис. 186).
И наоборот, если кормить некоторых бактериеядных инфузорий (например, Еир1огсз) другими инфузориями, онн превращаются в резко увеличенных гигантов. У обеих форм размеры отдельных органелл (например, кннетосом) остаются постоянными, и лишь их число меняется пропорционально размерам клетки (напрнмер, число ресничек в составе мембранелл). Если, предоставляя все более крупную пищу, довести размер роговых структур до такой степени, которая позволяет заглатывать особи своего же вида, возможен переход клеток к каннибализму (рис.
187). С другой стороны, пе все каннибалы должны обязательно быть одновременно н гигантами. Как правило, состояния гигантизма и каннибализма нестабильны. При получении нормальной пиши через некоторое время снова восстанавливается исходная величина особей; это происходит в результате повышения темпа деления. Приспособлением к характеру предлагаемой пищи являются также полиморфные формы Тига)гутепа. Прн одинаковом объеме клетки питающиеся бактериями особи формируют лишь маленькое роговое отверстие (мнкростомная форма), в то время как у особей, которых кормят инфузориями, роговой аппарат сильно расширяется (макростомная форма). Превращение микростомных форм в макросгомные, по-видимому, связано с фазой роста культуры. В стационарной фазе возникают преимущественно макростомные организмы, которые при дальнейшей нехватке пищи могут переходить к каннибализму.
Таким образом, эта !йнчнзбзянвя *точь 227 Рис. !бб. Вари!!из!и рознеров тела В)ербагЬпш в зависимости овз вида гшшевых организмов и степени !ытости Корм.ыние: 1 — изибузорнями Го!р!д!игп; 2-осзз(гчлгз~ своего вида рода В1ербаг!зта (каннибализм); 3 !гз!!бузориямзз Тезгайртепо. 4-жгртиконшцалзи К1~анйзпеаг 5 — бокпзериями! б — голодание (по з изе). Рисе 1бг. Каннибализм: а -гигантский каннибал В!ербагВнпа заглапзывает особи своего ясе вида; б — сравнение нормальной (Н) особи с гигантской (1') (а. по Низысон). 228 Г!ротозоологяя трансформация позволяет отдсльным клеткам выживать за счет других. Очень сильные изменения формы наблюдаются у амебы )чаед!епа (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
