К. Хаусман - Протозоология (1107653), страница 30
Текст из файла (страница 30)
!64), за движушую силу перемещения принимали ундулируюшие движения этих складок, в стенках которых располагаются микрофиламентъь а ниже-выстилка иэ микротрубочек. Эта гипотеза подкреплялась различными конфигурациями складок, видимыми на электронно-микроскопических снимках. В настоящее время научились выявлять эти складки и светомикроскопически. Никаких движений у них при этом пока обнаружить не удалось, поэзому некогорые ашоры снова обсужгтаюг с1арую гипотезу выделения слизи. По их представлениям, складки всего лишь направляют истекаюгцую слизь назад н тем самым способствуют движению клетки вперед.
Пока еще не выяснено, каким образом осуществляются изгибания тела, встречающиеся в особенности у крупных видов грегарин. Предполагаешься, что у спорозоитов кокцидий тип скольжения иной. Такие инфекционные стадии, способные к различным движениям, не обнаруживают никаких явно предназначенных для это~о органелл. По-видимому, для их движения всегда нужен контакт с субстратом.
В настоящее время неясно, сушествуют ли на плазматнческой мембране места связывания, которые вступают в этот контакт. Такие места связывания могли бы перемешаться в мембране спереди назад по определенному спиральному пути с помощью сократимой системы филаментов, вызывая тем самым передвижение клетки.
У многих бактерий н многочисленных одноклеточных водорослей тоже наблюдаются скользяшие движения. В некоторых случаях в основе их лежат направленное выделение слизи и возникающая цри этом отталкивающая сила, которая действует на клетку. Однако в большинстве случаев механика движения неясна. Опыты к главе «Подвижность» Регистрация различных видов движения у протистов Сушествует очень простая возможность документации способов движения протистов. Объекты помешают в маленькую чашку Петри.
Чашка и культуральная среда должны быть, насколько это возможно, свободны от пыли и взвешенны!с частиц. О помощью скользяшего 2)я> Прото>соло~як Рис !65. Характер денпгенип игггдузггрий бг-г> и лпни~пдиинннпй иыеды Ы>>, гнрегигтририеинный п>текг 4опиогри4>гриеинкч с оиэьтои еыдерэкко)г. бокового освещения одним или лучше двумя осветителями с волокщ.- ной оптикой" достигается эффект темного поля.
Объекты вьплядят светящимися на темном фоне. Г помощью лупы с фотопристввкой животные фотографируются при опюсительно слабом увеличенгш с выдержкой окало 1О с (следует использовать высакочувствительную пленку). В результате пути, пройденные объекзамп при плавании, вы. глядят как белые линии на черном фоне (рис. 165.а-г). Различные одноклеточные часто показывак>т разное н пр>жом всегда вилоспецифичнос поведение при плавании. !1о времени экспозиции и алине пройденного пути можно апреле. лить скорость плавания.
Однако. поскольку фото>рафик лвумерны и нс могут документировать вертикальные перемещения. вычислснньк" скорости будут представлять собой лишь ч>инимаг>ьныс величины Другой способ находит применение д>я >ех одноклеточных которые передвигаются относительно ме пенно, например сарколовых. Здесь нужно применять вылержки в 30- 100 с (в зависимости от скорости движения) при весьма слабом освещении в микроскопе. Если через правильные промежутки времени дополнительно давать полсветку лампойвспьппкой.
контуры одноклеточного будут видим как ря,ч поспелова. ~ельных резких изображений (рис. 165. д1. Это> способ особенно цодхо>вп для моноподиальных амеб. Ампутация и регенерация ресничек и жгутиков Реснички и жгу шки повально легко поддаются алшутации. Можно хорошо наблюдать регенерацгпо этих органелл. которая происходит о>- носи тельно быстро.
" Можно я остро сфокусяроваяяммк обычными освспгшгтми лля микро- скопия. Прин, нерее. Специальная часть 201 Теста(чутепа ругуопп(я из культуры на аксенической среде (с. 276); Осадить клетки нз культурачьной среды тремя центрифугированиями по 1 мин, 2 К этому осадку добавить 1 мл среды: 10 мМ ЭДТА и 50 мМ ацетата натрия, рН 6,0; хорошо взболтать. 3, Через 30 с добавить 1 мл бидистиллированной воды, хорошо перемешать. 4, Еше через 60 с добавить 0,1 мл 0,5 мМ раствора СаС1,: хорошо перемешать. 5, Еше через 15 с клетки 4 раза пропустить через шприц с иглой 0,9 х х 38 мм (втянуть и вытолкнуть).
Реснички механически удаляются возникающими при этом гидродннамическими силами. 6. Поместить клетки в 25 мл нормальной культуральной среды. Здесь начинается регенерация ресничек. При условии аккуратного светомикроскопического наблюдения можно прослеживать отрастание ресничек в течение нескольких часов. СЫатуе(ля<таз ге(лаан(ц автотрофно растущие на солевой среде (жидкое удобрение, с. 000): 1. Снизить рН культуральной среды до 4,8 — 5,0 с помощью ! н, уксусной кислоты; энергично встряхивать 15 с. 2.
Быстро поднять рН до 7,2 с помощью 1 н. )ч(аОН. Вследствие скачка рН клетки отбрасывают жгутики. Если эффект недостаточен„добавить ! мМ СаС1,. 3. Через 5 — 15 мнн начинаемся регенерация жгутиков, которая длится в обшей сложности около 2 ч. 4. Для лучшего выявления жгутиков можно применить окрашивание следующим реактивом: к раствору Люголя (1 г иода и 1 г иодистого калия в 100 мл биднстиллированной воды) добавить 5.10 ' М антипирнна и 5 10 ' М ГеС),. Антипирин и ГеС1, готовят отдельно друг от прута в виде основных растворов 100-кратной концентрации и добавляют к раствору Люголя непосредственно перед окрашиванием.
Реактивация ресничек С помощью получения клеточных моделей Рагаглесйлл и последующей реактивации ресничек следует показать, что при условии соответствующей предварительной обработки мертвые организмы обнаруживают явления подвижности, подобные тем, которые наблюдаются у живых животных. 1. Концентрировать клетки центрифугированием.
Промыть при комнатной температуре 2 мМ раствором СаС!, в ! мМ трио-НС1-буфере (рН 7,2). 2. Отцентрифугировать клетки, экстрагировать их при 4'С в течение 10 — 30 мин раствором: 001'~ Тритон Х-100, 20 мМ КС1, 1О мМ двунатриевой соли ЭДТА, 10 мМ трио-малеатного буфера (рН 7,0). 202 Цротозоология 3. Отцентрифугировать клетки, затем промыть их при 4" С в ра створе: 50мМ КС1, 2 мМ ЭДТА в 10 мМ трис-малеатном буфере (рН 7,0). 4. Поместить каплю взвеси клеток на предметное стекло и убедиться, что они мертвы и неподвижны, За~ем реактивировать реснички при комнатной температуре с помощью раствора: 4 мМ АТР, 4 мМ М8С1,, 3 мМ ЭДТА в 1О мМ трис-малеатном буфере (рН 7,0).
Эту смесь добавляют с одной стороны покровного стекла и отсасывают фильтровальной бумагой жидкость с другой стороны. Через короткое время реснички снова начинают бить. При благоприятных условиях мертвые клетки даже плавают. Глицеринизирование и активация стебельков Ро!71се11а Чтобы получить достаточное количество особей хогг!се!!а (или Сагсйез!ив), в чашку Петри, содержащую !00 мл свободной от СО, минеральной воды (с. 275), к которой добавлено 3 — 5 прокипяченных зерен пшеницы, помешают разлшающиеся части растений из пруда. Кроме того, туда же кладут несколько отрезков ниток длиной по 2 — 3 см.
Как правило, через несколько дней на нитках появляются хогг!се)!а (или Сагслез!нгл). 1. Клетки на субстрате (отрезках ниток) экстрагируют в растворе, содержащем глицерол (5(Е',', цо объему), КС! (О,! М), трио-малеатный буфер (10 мМ, рН 7,0) и ЭДТА (4 мМ!. Экстракция длится несколько дней в холодильнике. Экстракционную среду несколько раз меняют. В резуль~ате этой обработки большинство составных частей клетки растворяется, однако сократимые элементы стебельков сохраняются. 2. Объекты переводят из раствора глицерола в расслабляющий раствор: 0,1 М КС1, 50 мМ трис-малеатно~о буфера (рН 7,0) и 8 мМ ЭДТА.
3. Через 10 мин изготовляют микроскопический препарат. Затем следует многократная промывка расслабляющим раствором (накапывать с одной стороны покровного стекла, отсасывать с другой). Стебельки гогг!се!!а, которые до этого были спирализованы, теперь распрямлены. 4.
В результате добавления сократительного раствора, который содержит КС! (0,1 М), трио-малеатный буфер (50 мМ, рН 7,0), СаС1, (8 мМ) и ЭДТА (8 мМ), стебельки сокращаются (по крайней мере те, которые еше интактны). Определяющим фактором при этом сокращении, происходящем без расходования АТР, являются ионы Са' '. 5. Процесс может повторяться многократно, если добавлять попеременно то расслабляющий, то сократительный раствор. Специальная часть И)3 Захват пищи, пищеварение, дефекация Протисты способны ассимилировать необходимые для жизни вещетва различными путями.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
