Разработка научных основ создания технологии выделения и очистки генно-инженерных белков (1090305)
Текст из файла
На правах рукописиГусаровДмитрий АлексеевичРазработка научных основ создания технологии выделения и очистки генноинженерных белков02.00.10 «Биоорганическая Химия»03.01.06 «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)»ДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степенидоктора химических наукМосква 2014F2ОглавлениеСПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ...................................6ВВЕДЕНИЕ .............................................................................................8ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР....................................................................131. Биофармацевтическая промышленность: базис и надсройка .......................132. Особенности биосинтеза рекомбинантных эукариотических белков в бактериальных клетках ...............................................................................................232.1.
Образование тел включения ..........................................................................232.2. Ренатурация и рефолдинг ..............................................................................343. Особенности биосинтеза рекомбинантных белков в клетках млекопитающих ..........................................................................................................................524. Выделение и очистка генно-инженерных белков ...........................................654.1. Очистка белков от бактериальных эндотоксинов........................................684.2.
Очистка от фрагментов нуклеиновых кислот ..............................................794.3. Очистка от вирусов ........................................................................................804.4. Очистка от родственных белков ....................................................................814.5. Валидация процессов выделения и очистки ................................................835. Примеры выделения и очистки значимых биофармацевтических белков ...865.1. Производные инсулина ..................................................................................875.1.1.
Стадии технологического процесса .......................................................895.1.2. Технология получения рекомбинантного инсулина гларгина .............90F35.2. Интерферон-гамма .........................................................................................925.2.1. Процесс «upstream» .................................................................................935.2.2. Этапы “downstream" процесса ................................................................945.3.
Фоллитропин...................................................................................................955.3.1. Вектор экспрессии рекомбинантного фоллитропина ...........................965.3.2. Очистка рекомбинантного ФСГ..............................................................97РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ .....................................................1021. Создание промышленной технологии выделения и очистки человеческогоинсулина в производстве препарата-биодженерика. ........................................1031.1.
Разработка внутрипроизводственного контроля содержания мономераРП в растворах. .................................................................................................1041.2. Растворение ТВ и денатурация РП. .........................................................1151.3. Рефолдинг РП. ...........................................................................................1171.4. Валидация внутрипроизводственного контроля чистоты мономера РП врастворах методом ПААГЭ. ............................................................................1191.5. Очистка РП.
...............................................................................................1311.6. Ферментативный гидролиз РП. ...............................................................1331.7. Очистка ГИЧ и получение АФС. .............................................................1362. Создание промышленной технологии выделения и очистки инсулина-гларгина в производстве препарата-биодженерика. ................................................1412.1. Растворение ТВ и денатурация РП. .........................................................1422.2.
Рефолдинг РП. ...........................................................................................1442.3. Очистка РП. ...............................................................................................1522.4. Создание метода внутрипроизводственного контроля ИГ. ...................1552.5. Ферментативный гидролиз РП. ...............................................................1562.6.
Очистка ИГ и получение АФС. ................................................................1592.7. Подтверждение эквивалентности. ...........................................................1643. Создание промышленной технологии выделения и очистки N,N-бисметио-F4нилгистона Н1.3 в производстве оригинального препарата «Онкохист». .....1683.1. Валидация методов внутрипроизводственного контроля. ....................1723.2.
Выделение БМГ из клеток. ......................................................................1803.3. Предочистка и концентрирование БМГ. .................................................1823.4. Основная очистка БМГ и получение АФС. ............................................1874. Создание промышленной технологии выделения и очистки интерферонагамма в производстве препарата-биодженерика. .............................................2054.1. Выделение из клеток ТВ, денатурация Инт-Г. .......................................2054.2. Ренатурация Инт-Г. ...................................................................................2084.3.
Очистка Инт-Г и получение АФС. ..........................................................2105. Создание промышленной технологии выделения и очистки фолликулостимулирующего гормона в производстве препарата-биодженерика. .................2155.1. Контроль метаболизма клеточной линии ...............................................2185.2. Внешняя перфузия белковой фракции из культуральной жидкости ....2215.3. Вирусная инактивация и предочистка ФСГ ...........................................2245.4. Основная очистка ФСГ методами аффинной и гидрофобной хроматографии.
..............................................................................................................2285.5. Финишная очистка и получение АФС. ...................................................2315.6. Подтверждение эквивалентности. ...........................................................2346. Алгоритм разработки технологий выделения и очистки генно-инженерныхбелков....................................................................................................................236МАТЕРИАЛЫ, ПРИБОРЫ И МЕТОДЫ ..........................................2401. Материалы........................................................................................................2401.1.
Реактивы ....................................................................................................2401.2. Хроматографические сорбенты и колонны ............................................2412. Приборы ...........................................................................................................2432.1. Хроматографические системы .................................................................2432.2. Оборудование ............................................................................................244F53.
Методы .............................................................................................................2443.1. Контроль производства ГИЧ методом ВЭЖХ ........................................2443.2. Контроль производства ИГ методом UPLC ............................................2453.3. Контроль ГИЧ, ИГ, БМГ и Инт-Г методом SEC ....................................2463.4. Контроль производства БМГ методом ОФ ВЭЖХ ................................2473.5. SDS-PAGE ..................................................................................................2493.6.
Контроль лактатов методом ВЭЖХ .........................................................2493.7. Масс-спектрометрия ИГ ...........................................................................2493.8. Пептидное картирование ИГ....................................................................2493.9. Получение ГИЧ .........................................................................................2513.10.
Характеристики
Тип файла PDF
PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.
Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
