Диссертация (Механизмы формирования гестационных осложнений у многорожавших женщин (клинико-экспериментальное исследование)), страница 4

Каждоеживотное помещали в отдельные клетки со свободным доступом к корму(специализированным кормом для грызунов «Little Оne») и воде. Дляоплодотворения привлекались самцы крыс аналогичной линии, возраста и веса. Ксамцу подсаживали до двух самок в состоянии диэструса, который определяли порезультатам кольпоцитологии вагинального секрета. Первый день беременностиопределяли по наличию сперматозоидов в вагинальном мазке [121].В 1 блоке эксперимента было проведено исследование на 20 беременныхсамках крыс линии Wistar в возрасте 12–18 месяцев.

Все крысы были разделенына 2 группы: опытную группу составили 10 крыс; контрольную группу – 10 крыс.В опытной группе воспроизводили ПН путем глюкокортикоидной дисрегуляциипо методу Чеботаревой Ю.Ю., Овсянникова В.Г. и соавт., при этом с 3 по 11 деньбеременности в 9 часов утра крыс кормили смесью, содержащей 1,25 мг порошка18синтетического глюкокортикоидного препарата преднизолона и 100 г маннойкрупы [97].

На 20–21 день беременности, предварительно анестезируя животныхпутем внутрибрюшинного введения 0,2 мл нембутала, проводили забой крыс изабор плазмы крови для определения ВИП, изучения фето-плацентарныхкомплексов, почек, надпочечников для выявления морфологических изменений.Органы очищали от жировой клетчатки и помещали в 4% р-р формальдегида,затем получали гистологические препараты с окраской гематоксилин-эозином.Макроскопически оценивали плоды, последы, измеряя количество, длину, вес. Вконтрольной группе никаких воздействий на беременных крыс не производили(Рисунок 3).1блок экпериментабеременные крысы линии Wistar, n=20возраст 12-18 месяцев, масса 250-300граммопытная группа (n = 10)Глюкокортикоидныйпрепарат с 3-го по 11 день гестациивоспроизводили ПНконтрольная группа (n = 10)Наблюдение за течением гестации, контроль протеинурии,лейкоцитурии, на 21-й день гестации забор плазмы (ВИП), фетоплацентарных комплексов, с последующим анализом морфологическихизменений плодов (вес, длина), почек, надпочечников.Рисунок 3 — Первый блок экспериментального исследованияВовторомблокеэкспериментальногоисследованияразрабатывалиэкспериментальную модель ЗРП (гипотрофии плода) на 20 беременных крысахлинии Wistar в возрасте 12–18 месяцев, из них 10 крыс —опытная группа,(воспроизведениеПНпутемглюкокортикоиднойрегуляциипометодуЧеботаревой Ю.Ю., Овсянникова В.Г.

и соавт. [97]) и 10 крыс – контрольнаягруппа (никаких воздействий на крыс не было). Наблюдали за течениембеременности, родов, состоянием новорожденных крысят (вес, рост, аномалииразвития), проводили контроль протеинурии, лейкоцитурии по тест-полоскам,19измеряли калий, кальций, натрий в крови. По методике Л.Х.

Гаркави и соавт.(1998) [27] оценивали адаптационные реакции у новорожденных крысят.Метод Л.Х. Гаркави основан на наличии 5 основных типов адаптационныхреакций (АР), включая стресс, переактивацию и антистрессорные реакциитренировки, спокойной активации и повышенной активации. Тип АР определялипо сигнальным показателям лейкоцитарной формулы (процентное содержаниелимфоцитов).Каждойфункциональноесоотношениеизсостояниелимфоцитовэтихреакцийорганизма,всоответствуетуровеньлейкоцитарнойздоровьяформулеопределенноеикрови.процентноеЭлементынапряженности — отклонение от нормы различных показателей лейкоцитарнойформулы. Увеличение числа моноцитов расценивали как напряженностьретикулоэндотелиальной системы, а уменьшение — как снижение ее активности.Увеличение числа эозинофилов свидетельствует о его глюкокортикоиднойнедостаточности: при развитии реакций тренировки и активации — оботносительной недостаточности, при развитии стресса — об абсолютной.Сочетание эозинофилии с лимфопенией расценивали, как неблагоприятныйпризнак, свидетельствующий о наступающем истощении глюкокортикоиднойфункции коры надпочечников.

Уровни реактивности подразделяли на 4 группы.Каждой соответствовали определенные показатели лейкоцитарной формулы крови(присущи определенные элементы напряженности, токсигенная зернистостьнейтрофилов, более 2-х плазматических клеток или появление незрелых форм).Подсчет лейкоцитарной формулы проводили не менее чем на 200 клеток, а причисле лимфоцитов, близком к границе между реакциями — на 300 клеток подсчетформулы производили по классическому способу: 3 поля зрения по краю мазка, 3поля зрения под прямым углом (по направлению в глубь мазка), 3 поля зрения подпрямым углом по направлению к краю, и т. д. до набора половины числаподсчитываемых клеток. Вторую половину подсчитывали также по другому краюмазка.

Взятие крови проводили в одно и тоже время суток, утром (Рисунок4).202 блок экспериментабеременные крысы линии Wistar, n = 20возраст 12 - 18 месяцев, масса 250–300 граммIII (ГК) группа (n = 10)глюкокортикоидный препарат с3-го по 11 день гестацииIV группа (n = 10)контрольНаблюдали за течением гестации, родов, состояниемноворожденных крысят (вес, рост, аномалии развития,состояние адаптации)Рисунок 4 — Второй блок экспериментального исследованияВ третьем блоке экспериментального исследования, проведенного на 25беременных крысах линии Wistar в возрасте 12–18 месяцев, на фонеглюкокортикоиднойдисрегуляциипометодуЧеботаревойЮ.Ю.,Овсянникова В.Г. и соавт.

[97] применяли дидрогестерон: первая опытнаягруппа (n=10) – глюкокортикоидная дисрегуляция с 3 по 11 день гестации повышеописанной методике; вторая опытная группа (n=10) глюкокортикоиднаядисрегуляция с 3 по 11 день гестации на фоне применения дидрогестерона (0,5 мгдидрогестерона 2 раза в день в 8 и 20 часов). Дидрогестерон 10 мг смешивали с 10г манной крупы, делили на 20 частей. 1 часть содержала 0,5 мг на 1 прием пищи втечение всего периода гестации.

Контрольная группа — никаких воздействий накрыс не было (n=5). Наблюдали за течением гестации, родов, состояниемноворожденных крысят (вес, рост, аномалии развития), проводили контрольпротеинурии, лейкоцитурии по тест-полоскам (Рисунок 5).Применявшиесявданномэкспериментеметодыобезболивания,умерщвления крыс соответствовали принципам Хельсинкской декларации огуманномотношениикживотным.Экспериментпроводилисучетоммеждународных стандартов и требований к использованию в неклинических21исследованияхкачественныхживотных,соответствующихПринципамнадлежащей лабораторной практики (Национальный стандарт РоссийскойФедерации ГОСТ Р 53434-2009, март 2010), которые предусматриваютпроведение всех доклинических, внеклинических и экспертных исследований всоответствии с международными стандартами GLP [7].3 блок экспериментабеременные крысы линии Wistar, n = 25возраст 12 – 18 месяцев, масса 250–300 граммI опытная группа(n = 10)применениеглюкокортикоидногопрепарата с 3-го по 11день гестацииII опытная группа(n = 10)глюкокортикоиднаядисрегуляция с 3-го по 11день гестации на фонегестагенов в течение всегопериода гестацииконтрольнаягруппа(n = 5)Наблюдали за течением гестации, родов, состоянием новорожденныхкрысят (вес, рост, аномалии развития)Рисунок 5 — Третий блок экспериментального исследованияПоложения, выносимые на защиту:1.

В Республике Ингушетия в современных условиях доля родов умногорожавших женщин составляет 39,0%, в том числе 7,0% - у женщин позднегорепродуктивного возраста. За период 2012-2017гг. этот показатель у матерей 3845 лет возрос в 1,5 раза (p<0,001). Патогенетически обоснованная профилактикагестационных осложнений у многорожавших женщин позднего репродуктивноговозраста является неиспользованным резервом улучшения перинатальныхисходов у матерей этой когорты и снижения республиканских показателейматеринской и перинатальной заболеваемости и смертности.222.

Факторами риска (OR = 2,14-29,24; р<0,05) развития гестационныхосложненийуобеспечение;беременныхизучаемойпсихоэмоциональныйпреждевременныеродывявляются:стресс;анамнезе;низкоематериальноеплохиежилищныеусловия;ожирение;варикознаяболезнь;неврологические нарушения у ранее рожденных детей; отсутствие занятийспортом; два и более рубца на матке; неправильное питание; хроническийпиелонефрит; статус домохозяйки; среднее образование.Предикторами формирования гестационных осложнений у женщинизучаемой когорты служат: мультипаритет (более 3 родов в анамнезе), возрастболее 35 лет, ожирение, психоэмоциональный стресс, соматические заболевания,наличие отклонений показателей нейрогормонального профиля от нормы(снижениепрогестерона,повышениеобщегокортизола,адреналина,норадреналина; снижение вазоинтестинального пептида) во время даннойбеременности,нарушениематочно-плодово-плацентарногокровотокапридопплерометрии [увеличение пульсационного индекса в маточных артериях в I, II,и III триместрах беременности (соответственно 2,67±0,03, 1,91±0,01 и 0,96±0,01);и повышение индекса резистентности в артериях пуповины во II и III триместрах( соответственно 0,84±0,02 и 0,77±0,04, р<0,05].3.Гестационныеосложненияумногорожавшихженщинпозднегорепродуктивного возраста формируются при снижении лютеоплацентарногосинтеза прогестерона на фоне увеличения глюкокортикоидной активности ирасстройствмоноаминовойинейромедиаторнойрегуляции(повышениеадреналина и норадреналина, снижение уровня вазоинтестинального пептида).

Надоклинической стадии эти изменения могут быть выявлены с помощьюдинамической допплерометрии.4. Разработанная экспериментальная модель позволяет воспроизвестимеханизмгестационныхосложнений,связанныхснарушениемглюкокортикоидной регуляции, и патогенетически обосновать их коррекцию улабораторныхживотныхпротяжении всей гестации.сприменениемпроизводныхпрегнадиенана235. Профилактика осложнений гестации у многорожавших женщин позднегорепродуктивного возраста должна базироваться на своевременном выделениигрупприска,раннейверификацииплацентарныхнарушений,оценкенейрогормонального профиля и состояния маточно-плодово-плацентарногокровотока в динамике по триместрам беременности.СтепеньдостоверностиСтатистическаяобработкаимассиваапробацииданныхрезультатоввыполненанаработы.персональномкомпьютере с использованием лицензионных пакетов прикладной программы«SPSS Statistics 17,0 for Windows». Определяли среднее значение (М),стандартную ошибку среднего (m), стандартного отклонения (σ), ДИ-95% доверительныйпеременныхинтервалнадлянормальностьМср.ПроверкупроводилисраспределенияисходныхиспользованиемкритерияКолмогорова-Смирнова.

Проверку гипотез о равенстве двух средних принормальном распределении выполняли с помощью t-критерия Стьюдента, дляпеременных с распределением, отличным от нормального — с помощью UкритерияМанна-Уитни. Достоверность различийотносительныхвеличиноценивали с использованием критериев Фишера и χ2.Для оценки силы связи между предиктором и исходом вычислялиотношение шансов (OR) и относительный риск (RR), которые приводили с 95%доверительным интервалом. Результаты считали статистически значимыми при р<0,05.Дляоценкисилывзаимосвязимеждупоказателямиприменяликорреляционный анализ по методу Пирсона, с оценкой коэффициента корреляции(r). Сильная корреляционная взаимосвязь определяли при r в диапазоне от 0,8 до0,95, средняя от 0,6 до 0,8.Для определения предикторов риска развития гестационных осложнений ипостроенияпрогностическоймоделииспользовалимногофакторныйрегрессионнный анализ.Апробацию и внедрение результатов исследования в клиническую практикупроводили на базе ГБУ «Центр охраны материнства и детства» г.Назрани РИ (гл.врач — Кодзоева Э.Б.).