Диссертация (Репаративные и предраковые процессы при ВПЧ-ассоциированной патологии шейки матки), страница 5

И характеризуется следующимипризнаками: Увеличение ядерно-цитоплазматического соотношения; Ядро занимает до половины диаметра клетки; Неровная ядерная мембрана;32 Умеренная гиперхромия(может отсутствовать при жидкостной цитологии); Легкая степень слияния гранул хроматина; Некоторое нарушение созревания клеток. Цитоплазма,какправило,полигональная,обильная,зрелая,полупрозрачная, как в поверхностных или промежуточных клетках.Плоскоклеточные интраэпителиальные поражения высокой степени (H-SIL)– эпителиальные клетки сохраняют способность к созреванию до наружной частипарабазальных клеток и внутренней части промежуточного слоя. Характеризуетсяследующими признаками: Существенным увеличением ядерно-цитоплазматического соотношения,ядра занимают половину диаметра клетки и более; Более выраженной неровностью ядерной мембраны; Гиперхромией; Выраженной конденсацией хроматина; Разнообразием форм клеток; Недостаточно выраженной цитоплазмой, которая часто отсутствует; Нарушением созревания цитоплазмы.33Гистологические морфологические характеристикиГистологическое исследование шейки матки – это высокоинформативныйспособ диагностики самых различных патологий шейки матки.

Несмотря на то,чтоонможетлабораторныепотребоватьисследованиявременныхтканейзатратзанимают(проведения10-14биопсиидней),иданнаядиагностическая методика отличается рядом существенных преимуществ,позволяющих выявлять патологии уже на ранних стадиях и с высокой точностьюопределять вид новообразований.Выраженностьпатологическихизмененийвинтраэпителиальныхплоскоклеточных поражениях характеризуется уровнем дезорганизации эпителияи цитологическими изменениями.

Многие из этих изменений возникают врезультате инфицирования ВПЧ, следствием которого является гиперхромия иувеличение размера ядер, изменение ядерной мембраны и койлоцитоз.Выраженность патологических изменений определяется глубиной пораженияэпителия, дискариотическими клетками базального и парабазального типа. ЦИН I – дискариотические клетки парабазального типа занимаютнижнюю треть эпителия; ЦИН II – дискариотические клетки парабазального типа занимают до двухтретей эпителия; ЦИН III – дискариотические клетки парабазального типа занимают всютолщину эпителия.34Иммуногистологический методВ настоящее время исследования направлены на изучение рака и предракашейки матки на ультраструктурном и генетическом уровнях.

В литературеописано достаточно большое количество регулирующих генов, участвующих винициации и развитии рака шейки матки. В связи с тем, что данная патологияможетрассматриватьсякакрезультатполомкиреализациинормальнойгенетической информации, многие ученые исследуют рак шейки матки спомощью молекулярных методов.В работах, посвященных раку шейки матки, многие исследователиподробно изучают регулирование механизмов пролиферации и апоптоза приВПЧ-инфекции.

Нарушения в данных программах при РШМ описываетсямногими авторами. Апоптоз является запрограммированной гибелью клеток,которая предполагает наличие специфической программы, осуществляющейконтроль за клеточной смертью, при нарушении которого нарушается и гомеостаз[41]. Целью апоптоза является регуляция численности и функционированияклеток, большую роль играют межклеточные взаимодействия, благодаря которымклетки вступают на разные стадии жизненного цикла (деление, рост,дифференцировка), и путь гибели клетки [6].

Наиболее изученными регуляторамиапоптоза и пролиферации в шейки матки являются p53, p16, с-mус (регуляторклеточного цикла) и другие.Генр53расположенвхромосоме17р13.1иявляетсянаиболеераспространенным участком генетических повреждений в процессе канцерогенеза.35Ген р53 принимает участие в процессах репликации ДНК, пролиферации и гибеликлеток. В то время, когда клетка подвергается действию мутагенных агентов, р53стабилизируется и накапливается в ядре, в результате чего создает препятствиераспространению в ткани генетически поврежденных клеток. Кроме того, вмутантные р53 запускает апоптоз, в то время как накопленный дикий тип р53способен связываться с ДНК и вызывать задержку клеточного цикла в фазе G1,что способствует репарации ДНК в зонах генетических повреждений.Онкобелок р53 локализуется в цитоплазме, митохондриях и ядре, можетсвязываться с генами, активность которых регулируется с помощью процессовфосфорилирования, ацетилирования, метилирования и убиквитирования.Ген р16 (CDKN2A, MTS1, INK4A) влияет на процесс пролиферации идифференцировки клеток и является одним из основных регуляторов активностибелка RB1.

Он препятствует переходу клетки в S-фазу клеточного цикла.Отсутствие экспрессии белка р16 или его инактивация приводят к нарушениюрегуляции клеточного цикла. Ген р16 является маркером, необходимым дляобнаружения повышенного риска злокачественной трансформации. В настоящеевремя высокая экспрессия онкобелка р16 используется в качестве одного изсамых ранних показателей в диагностике рака шейки матки.Процессы регуляции роста и клеточного метаболизма тесно взаимосвязаны.Онкоген с-Мус является «главным регулятором», который контролирует многиеаспекты обоих процессов.

Изменения обмена веществ, происходящие втрансформированных клетках, многие из которых приводятся в движение36избыточной экспрессией с-Мус, необходимы для поддержания метаболическихпроцессов на фоне повышенной потребности в нуклеиновых кислотах, белках илипидах, необходимых для быстрой клеточной пролиферации. В то же время,суперэкспрессия c-Myc приводит к соответствующим изменениям на уровнеэкспрессии семейств генов, благодаря которым увеличивается интенсивностьпролиферации клеток.

Эта интересная двойственность эффектов с-Myc делает еговедущим фактором трансформационных изменений и придает ему очень важнуюроль в регулировании по принципу «трансформированный фенотип». Эффекты,вызываемые с-Мус, могут выступать либо в качестве «первичного онкогена»,которые активируются путем амплификации или транслокации, либо бытьрезультатом активации с-Мус другими онкогенами. В том и в другом случаеполагают, что именно с-Мус играет центральную роль при трансформации клеток.Несмотря на попытки использовать с-Мус в качестве терапевтической мишени,положительных результатов получено не было, однако есть шанс, что этоизменится в ближайшие несколько лет [80].Гены семейства альдегиддегидрогеназы (ALDH) являются регуляторамибиосинтеза ферментов, которые участвуют в различных метаболическихпроцессах в клетке.

Некоторые ферменты альдегиддегидрогеназы вовлечены впроцессы детоксикации веществ, таких как алкоголь, различные эндогенныетоксины. Конкретная роль ферментов альдегиддегидрогеназы заключается визменении атомов оксидной, углеродной и водородной групп (совместноименуемые альдегидной группой), которые прикреплены к другим молекулам.37Альдегидные группы могут оказывать положительное или отрицательное влияниена клетки и ткани в зависимости от молекулы, к которой они присоединены.Благодаря процессам, приводящим к изменению альдегидных групп, ферментыальдегиддегидрогеназысинтезируютмолекулы,называемыеникотинамидадениндинуклеотидфосфат и никотинамиддинуклеотид, которыенеобходимы для многих процессов, протекающих в клетке.

Ген ALDHрасположен в хромосоме 9q21, содержит 13 экзонов и состоит из 53×103азотистых оснований. ALDH является изоферментом, способным к окислению изацетальдегида уксусной кислоты, присутствующей в тканевых и опухолевыхстволовых клетках, которая необходима для их роста и дифференцировки.Альдегиддегидрогеназа типа 1 (ALDH1) - это детоксифицирующий фермент,отвечающий за окисление ретинола в ретиноевую кислоту, которая играет роль вранней дифференцировке стволовых клеток. Также ALDH1 является маркеромраковых стволовых клеток. Когда Яо и другие оценивали экспрессию ALDH1 вклетках цервикальной карциномы с помощью ИГХ метода и обнаружили, что в23 из 89 образцов, в которых был представлен инвазивный плоскоклеточный рак,и 4 из 20 случаев аденокарциномы выявляется иммунореактивность к ALDH1.Они обнаружили более низкие уровни CD133 в HeLa, SIHA и CaSki цервикальныхклеточных линиях, подобные результаты были получены Лопесом и другие. [74,75], что позволило определить ALDH1 в качестве маркера-идентификатораипредположить, что в РШМ есть небольшая субпопуляция клеток, которая имеетфенотип РСК [136].38В последние годы был идентифицирован Piwil2-подобный (PL2L) белок,который экспрессируется преимущественно при первичном и метастатическомРШМ у человека, связанный с ядерным фактором каппа бета (NF-kβ) –промотором опухолевого роста [137].Другим маркером, связанным с плюрипотентным состоянием стволовыхэмбриональных клеток и участвующий в его поддержании, является POU-доменфактора транскрипции OCT4.

Cantz и другие не удалось обнаружить окрашиванияядер при попытке выявления экспрессии фактора транскрипции OCT4 при РШМклеточной линии HeLa с помощью иммунофлуоресценции с использованием двухразличных моноклональных антител [30].В качестве важнейшего фактора роста и инициатора ангиогенеза выступаетVEGF, относящийся к семейству тромбоцитарного фактора роста и являющийсянеобходимым компонентом эмбрионального развития, нормального роста тканей,регенеративныхирепродуктивныхпроцессов(овуляция,менструация,образование плаценты) [4, 29].