Диссертация (Сравнительная оценка эффективности препаратов для лечения зоонозного кожного лейшманиоза на лабораторной модели)

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М. СЕЧЕНОВА МИНИСТЕРСТВАЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ(СЕЧЕНОВСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ)На правах рукописиКузнецова Юлия КонстантиновнаСРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯЛЕЧЕНИЯ ЗООНОЗНОГО КОЖНОГО ЛЕЙШМАНИОЗА НАЛАБОРАТОРНОЙ МОДЕЛИ03.02.11 – паразитологияДиссертация на соискание учёной степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:доктор медицинских наук, профессорКоваленко Феликс ПавловичМосква – 20182ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………………6ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………...141.1.

Эпидемиология кожного лейшманиоза (заболеваемость, группы риска,пути заражения) ………………………………………………………...…..141.2. Способы лечения кожного лейшманиоза…………………………………….201.2.1. Способы лечения кожного лейшманиоза сквозь века……………….201.2.2. Современное состояние терапии кожного лейшманиоза……………291.3. Новые аспекты этиопатогенеза кожного лейшманиоза (о вирусе,состоянии иммунитета, экспериментальных исследования в данномнаправлении) ……………….………………………………………………………33ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ…………...……362.1.

Выбор лабораторной модели животного………………………….…………362.2. Отбор биологического материала для заражениялабораторных животных…………………………………………………………...372.3. Изучение специфической активности препаратов для лечения кожноголейшманиоза in vitro………………………………………………………………..382.4. Изучение токсичности противолейшманиальных препаратов …..………...382.5. Изучение эффективности препаратов in vivo налабораторной модели ЗКЛ…………………………………………………………392.5.1.Подготовка инфекционного материала для заражения……………..3932.5.2. Выбор адекватной модели животного………………………………402.5.3.Методика введения инфекционного агента………………………….402.5.4.

Критерии отбора хомяков для эксперимента in vivo………………..412.5.5.Визуальная оценка эффективности препаратов по динамике кожногопроцесса……………………………………………………………………………..412.5.6. Микроскопическая оценка эффективности лечения по элиминациивозбудителя из очагов поражения на коже…………………………………...…..412.5.7. Фоторегистрация динамики клинических проявленийна коже животных…………………………………………………………...422.6.

Статистическая обработка материала………………………………………..42ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ…………433.1. Исследование эффективности препаратов для терапиизоонозного кожного лейшманиоза in vitro………………………………………..433.1.1. Результаты исследования эффективностидоксициклина in vitro………………………………………………………………453.1.2.Результатыисследованияэффективностицефотаксима(клафорана) in vitro…………………………………………………………………473.1.3. Результаты исследования эффективностицефтриаксона in vitro…………………………………………………………….…493.1.4. Сравнительный анализ эффективности препаратовдля лечения зоонозного кожного лейшманиоза in vitro…………………………5143.2. Проверка на лабораторной модели токсичности препаратовс противолейшманиальным эффектом, доказанным in vitro……………………543.3. Исследование эффективности препаратов для терапии зоонозногокожного лейшманиоза in vivo………………………………………………..……593.3.1.

Клиническая характеристика особенностей теченияЗКЛ при использовании золотистых хомяков в качествелабораторной модели в эксперименте in vivo…………………………………….613.3.2. Результаты оценки эффективности лечения меглуминаантимонатом (глюкантимом) (контрольная группа)экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков………………………………...653.3.3. Результаты оценки эффективности лечениядоксициклином экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков……………...673.3.4. Результаты оценки эффективности леченияцефтриаксоном экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков……………...693.3.5.

Результаты оценки эффективности лечения цефотаксимом(клафораном) экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков……………….703.3.6. Результаты оценки эффективности лечения интерферономальфа-2b человеческим рекомбинантным (реаферон)экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков………………………………...723.3.7. Результаты оценки эффективности комбинированноголечения меглумина антимонатом (глюкантимом) + интерферональфа-2b человеческий рекомбинантный (реаферон)5экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков………………………………...743.3.8. Результаты эффективности комбинированного лечениядоксициклином + интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный(реаферон) экспериментального ЗКЛ у золотистых хомяков…………………...763.4. Сравнительный анализ эффективности препаратов для лечениязоонозного кожного лейшманиоза у золотистых хомяков………………………79ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………...82ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………..86ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ………………………………………..93СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………………94СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……….………………………………………………956ВВЕДЕНИЕАктуальность проблемы.

Проблема кожного лейшманиоза (КЛ) внастоящее время актуальна для практикующих врачей. Это обусловленоактивной миграцией населения в эндемичные по лейшманиозу регионы(туристические поездки, служебные командировки, работа по контракту и др.),а также приездом в РФ людей из стран, где данное заболевание регистрируетсядостаточно часто. КЛ является эндемичным заболеванием в 98 странах. Более350 млн. человек, составляющих около 10% населения земного шара, находятсяв зоне риска, более 12 млн.

человек уже инфицированы, а ежегодноеколичество новых случаев оценивается в 1,5-2 млн. [83].Данные официальной статистики о заболеваемости КЛ в РФ отсутствуют,т.к. заболевание не входит в перечень обязательных нозологических форм,подлежащихрегистрации.Однакомногочисленныепубликациисвидетельствуют о регистрации, как КЛ [70; 67; 65; 66; 72; 69; 71; 68; 64], так ивисцерального лейшманиоза [62; 82; 79; 63; 80]. Имеются сведения,указывающие, что РФ с 1991 по 2014 год было зарегистрировано 89 случаевлейшманиоза (83 – завозных, 6 – при заражении на территории РФ) [29].

Этосвидетельствует об актуальности КЛ для населения неэндемичных стран,каковой является Россия. У врачей практического здравоохранения возникаютсерьезные проблемы как в плане диагностики [65; 66; 64], так и выбора методалечения [67; 68]. Анализ литературы свидетельствует, что КЛ спорадическизавозится в Россию из стран Африки (Египет, Тунис), Ближнего Востока(Турция, Израиль, Кипр, Иордания, Азербайджан, Армения, Грузия) и СНГ(Узбекистан, Таджикистан).

Основным возбудителем КЛ в этих регионах7является Leishmania major (L. major), вызывающим у человек зоонозныйкожный лейшманиоз (ЗКЛ) [33]. Это определило выбор инфекционного агентадля доклинического исследования.В то же время стандарты по лечению данного заболевания в нашей странеотсутствуют. В национальном руководстве по дерматовенерологии (2013) длялечения КЛ предлагается использовать 12 препаратов, зарегистрированных вГРЛС. Однако в инструкциях фирм производителей показания для леченияданногодерматозазарекомендовавшийимеютсясебятолькодляулечениякетоконазолаЗКЛХорошо[17].антибиотикизгруппыаминогликозидов (мономицин) в настоящее время в России не производится.Препарат 5-валентной сурьмы (солюсурьмин), поступавший в РФ изТуркмении, в ГЛРС РФ не зарегистрирован. В рекомендациях ВОЗ (2010), вЕвропейских рекомендациях по лечению лейшманиоза и в методическихрекомендациях «LeishMan» для лечения КЛ предлагают меглумина антимонат(глюкантим), пентастам (стибоглюконат натрия), милтефозин (импавидо),липосомальныйамфотерицинВ(амбисом),паромомицин,аминохинол,пентамидин [31].

Из перечисленных препаратов в ГРЛС имеется толькоамфотерицин В без указания, что он липосомальный, а в инструкции фирмыпроизводителя нет показаний для лечения КЛ.В связи с этим ценными являются публикации авторов, эмпирическилечивших больных ЗКЛ антибиотиками различных фармакологических групп.Это доксициклин [31; 68] и цефотаксим (клафоран – цефалоспорина 3поколения) [37]. В тоже время данные о доклинических исследования данныхпрепаратов в литературе отсутствуют. Учитывая, что цефотаксим (клафоран) –импортныйпрепарат(Франция),тодляисследованияимпортозамещения актуальным является изучение in vitro исцельюin vivoотечественного антибиотика из той же группы – цефтриаксона.

Универсальнымпрепаратом для лечения лейшманиозов являются препараты 5-валентнойсурьмы. Поэтому меглумина антимонат (глюкантим) может быть использован вкачестве контроля при оценке эффективности других препаратов.8Исследованиязарубежныхспециалистов,свидетельствуют,чтоэтиологическим фактором заболевания могут быть не сами лейшмании, авирус,находящийсявних(LRV–лейшманиальныйРНК-вирус),обнаруженный в 1988 г. у больного, инфицированного L.

guyanensis [75].Позднее его обнаружили в L. braziliensis и указали на связь с более тяжелымтечением КЛ вплоть до развития кожно-слизистого лейшманиоза [76].Установлена корреляция между наличием вируса и иммунным ответомхозяина. Геномные нуклеиновые кислоты LRV экстрагировали из 50культивируемых изолятов, принадлежащих к видам L.

major, L. tropica и L.infantum. Определена частичная последовательность генов их вирусной РНКполимеразы. Эти гены обнаружены в двух изолятах базы данных GenBank [77].Доказано различие геномных последовательностей вирусов в лейшманияхНового и Старого Света. Назначение препаратов сурьмы, разрушающихпаразитов, приводит к распространению инфекции [78]. По сути, мы имеемдело с эндоцитобиозом вируса внутри лейшманий. При заражении хомяковлейшманиями, содержащими LRV, отмечен сильный воспалительный ответ засчет повышения уровня IFN-β, а также продление выживаемости паразитов свирусом [78]. Это послужило основание для изучения в доклиническомисследованииэффективностипротивовирусногопрепаратакомбинированнойтерапии–альфа-2bинтерферонасвключениемчеловеческогорекомбинантного (реаферона).Цель исследования: изучить in vitro и vivo на лабораторной моделиэффективность препаратов для лечения зоонозного кожного лейшманиоза идать им сравнительную оценку.Задачи исследования1.