Диссертация (Микробная колонизация нижних дыхательных путей и её влияние на развитие нозокомиальных пневмоний у онкохирургических больных в отделениях интенсивной терапии), страница 4

Штамм устойчив к имипенему и меропенему. В зоне диффузии ЭДТАпроисходит ингибиция МБЛ, образуется расширение зоны ингибиции ростакультуры бактерий.21.Рисунок 3. Положительный результат скрининга P. aeruginosa на продукциюМБЛ. Штамм устойчив к имипенему и меропенему. В зоне диффузии ЭДТАпроисходит ингибиция МБЛ, образуется расширение зоны ингибиции ростакультуры бактерий.Рисунок 4. Отрицательный результат скрининга P.

aeruginosa на продукцию МБЛ.Штамм по размеру зон ингибиции устойчив к имипенему и меропенему. В зонедиффузии ЭДТА не происходит ингибиции МБЛ, расширения зоны ингибициироста культуры бактерий не происходит.22Рисунок 5. Отрицательный результат скрининга P. aeruginosa на продукцию МБЛ.Штамм высоко устойчив к имипенему и меропенему.

В зоне диффузии ЭДТА непроисходит ингибиции МБЛ, зоны ингибиции роста культуры бактерий нет.Штамм Klebsiella spp. считали продуцентом БЛРС, если диаметр зоны задержкироста вокруг диска с комбинацией цефалоспорина и клавуланата на 5,0 мм иболее превышал диаметр зоны вокруг диска с цефалоспорином. Параллельно санализом испытуемых культур проводили исследование контрольных штаммов:E. coli АТСС25922 — отрицательный контроль (БЛРС «-»), K. pneumoniae АТСС700603 — положительный контроль (БЛРС «+»).Внутренний контроль качества определения чувствительностиДля обеспечения надлежащего качества определения чувствительности,выделенных клинических изолятов микробов к антибактериальным препаратам, вбактериологической лаборатории проводится внутренний контроль качества [30,79, 80].Внутренний контроль качества представляет собой постоянный мониторингкачества реагентов, работы оборудования, выполнения лабораторных процедур.Для внутреннего контроля качества определения чувствительности влаборатории использовали контрольные штаммы микробов.Контрольные23штаммы представляют собой генетически стабильные микробы, обладающиеопределеннымифенотипамичувствительности.Вданномисследованиииспользовались контрольные штаммы Американской коллекции типовых культур(АТСС).Всеиспользуемыесодержащуюштаммыхарактеристикуимеютштаммов.соответствующуюИспользовалидокументацию,основнойнаборконтрольных штаммов: E.

coli ATCC 25922 — для тестирования бактерий, относящихся к семействуэнтеробактерий и для выявления БЛРС у грамотрицательных бактерий; P. aeruginosa АТСС 27853 — для тестирования Pseudomonas spp. и другихнеферментирующих бактерий; K. pneumoniae АТСС 700603 — для выявления продукции БЛРС уграмотрицательных бактерий; S. aureus АТСС 29213 для тестирования Staphylococcus spp. методом серийныхразведений; S.

aureus АТСС 25923 для тестирования Staphylococcus spp. дискодиффузионным методом; S. aureus АТСС 38591 для тестирования чувствительности Staphylococcus spp. кметициллину; H. influenzae АТСС 49247 для тестирования H. influenzae; S. pneumoniae АТСС 49619 для тестирования S. pneumoniae и Streptococcus spp.Контрольные штаммы тестировали еженедельно параллельно с определениемчувствительности клинических изолятов, а также при получении новых партийагара, дисков и тест-систем с антибиотиками. Если при тестированииконтрольных штаммов диаметры зон подавления роста попадали в допустимыйдиапазон, то результаты определения чувствительности клинических штаммовсчитали корректными и использовались для выбора антибактериальной терапии.В противном случае выясняли причину получения ошибочного результата,повторно определяли чувствительность контрольного и клинического штамма.24Автоматизированное рабочее место микробиологаС 2002 года в бактериологической лаборатории МГОБ № 62 используется«Автоматизированноерабочееместомикробиолога,эпидемиолога»,чтообеспечивается компьютерной системой микробиологического мониторинга«МИКРОБ» (СМММ), микробиологическим полуавтоматическим анализатором«BBL Crystal» (Бектон Диккинсон, США) с 2002 г.

и «OSIRIS» (Био-Рад, США) автоматизированной системой чтения и интерпретации антибиотикограмм,полученных с помощью диско-диффузионного метода с 2003 г. Системамикробиологическогомониторинга«МИКРОБ»(СМММ)—этоавтоматизированная система регистрации, учёта и ведения базы данных с цельюмониторирования микробного пейзажа и уровня антибиотикорезистентностивыделенных микробов в клинических микробиологических лабораториях ЛПУ.Полуавтоматическиймикробиологическийанализатор«BBLCrystal»используется для биохимической идентификации патогенов человека (рисунок 6).Рисунок 6.

Автоматический анализатор «Кристал Авторидер» (Бектон Диккинсон,США)25Анализатор оснащён оригинальной компьютерной программой, цель которой—обеспечениеидентификациинеизвестногомикробавпрочитаннойбиохимической панели BBL Crystal с помощью математической интерпретациибиохимического профиля и результатов дополнительных тестов и сопоставлениеполученного результата с биохимическими профилями микробов, содержащимисяв базе данных. Идентификация микробов в данной программе основана наизучении культуральных, морфологических, биохимической свойств микробов сиспользованием микротест-систем, позволяющих одновременно определить 29различных ферментативных реакций (ферментацию, окисление, дегидратацию игидролиз различных субстратов). Дополнительно в этих тестах используютсяхромогенные и флюрогенные субстраты.

Преимуществом использования данногоанализатора является возможность расширения количества идентифицируемыхвидов микробов, спектра изучаемых признаков (тестов), одномоментная ипрактически мгновенная обработка результатов широкого ряда биохимических идругих тестов, получения стандартных, воспроизводимых и сопоставимыхрезультатов,получениеиспользовалиготовогодополнительно:бланкаанализа.идентификационныеДляидентификацииполоски:«ОКСИтест»,«ИНДОЛтест», «Бацитрацин» 10 ЕД и 1 ЕД, «Оптохин», «Новобиоцин».Результаты идентификации микробов и определения их антибиотикограммвносилисьвкомпьютернуюсистемумикробиологическогомониторинга«МИКРОБ» (СМММ). Преимуществами использования СМММ является то, чтосформированный бланк анализа проходит автоматическую экспертную оценку.Экспертная система, заложенная в эту программу, производит оценку результатовантибиотикограммы, полученных in vitro, исходя из заложенных в неё данных оприродной устойчивости отдельных микробов или их групп, о распространениисреди них приобретённой и ассоциированной резистентности, а также сведений oклиническойэффективностипользователюослучаяхэкспертными.Встроеннаяантибактериальныхрасхожденияпрограммаегопрепаратовсобственныхконтролякачестваисообщаетрезультатовспроводимых26исследований обеспечивает получение достоверных результатов.В 2003 г.

микробиологическая лаборатория МГОБ № 62 приобрела и провелаапробациюавтоматизированнойсистемы—«OSIRIS»уникальнойавтоматизированной системы чтения и интерпретации антибиотикограмм,полученных с помощью диско-диффузионного метода.Для исследований могут быть использованы любые из 400 антибиотиков,представленных в базе данных прибора, к которым указаны критерииинтерпретации результатов чувствительности. Система контроля качестваприбора работает в соответствие со стандартами NCCLS и отечественными МУК4.2.1890-04 [30, 79, 80]. Встроенная программа контроля качества проводимыхисследований обеспечивает получение достоверных результатов. На экранедисплея выводятся комментарии экспертной системы о несовместимостирезультатов, невозможных или необычных фенотипов, что заставляет врачабактериолога перепроверять результаты того или иного анализа.Рисунок7.Автоматизированнаяантибиотикограмм «OSIRIS»системадлячтенияиинтерпретации27Характеристика обследуемых пациентовВ исследование были включены 100 пациентов, находившихся на лечении вхирургических отделениях МГОБ №62, из них 42 мужчины (42%) и 58 женщин(58%).

Возраст составил в среднем 62,0±11,5 лет (от 34 до 83) (Таблица 2).Таблица 2.Демографические данныеГруппаКоличествоПолВозрастмуж.жен.mean ± STDmin+maxОсновная50222865,7±9,736-80Сравнения50203058,3±13,234-83Всего100425862,0±11,534-83Основные диагнозы пациентов включали рак желудка у 55 пациентов (55%) ирак толстой кишки у 45 пациентов (45%) (Таблица 3).Таблица 3.Основные заболеванияГруппаДиагнозРак желудкаРак т. кишкиОсновная2624Сравнения2921Всего5545На тяжесть течения НП большое значение оказывало наличие сопутствующейпатологии. У 70% (70/100) пациентов наблюдалась сопутствующая патология.Патология ССС – 60% (60/100), при этом тяжелая патология, такая как ЗССН 2 АБ встречалась у 15% (15/100) пациентов с сердечной патологией, патологиядыхательной системы – 45% (45/100), сахарный диабет – 17% (17/100).

Патологияболее чем двух систем организма наблюдалась у 27 (27%) пациентов. (Таблица 4).28Таблица 4.Структура сопутствующей патологииСопутствующая патологияКоличество (n)%заболевания ССС7070заболевания ДС4545сахарный диабет1717ожирение3434прочие1515Обработка полученных данных и методы статистического анализаДля фиксирования собранных данных о каждом пациенте, включенном висследование, была создана электронная база данных на основе пакета программMicrosoft Office 2007, которая заполнялись в полном соответствии с данными истории болезни.

В базу данных заносились паспортные данные пациента, возраст,пол, даты и время поступления пациента в стационар, выписки или смерти, сведения о сроках возникновения клинических проявлений заболевания, первичныйи клинический диагноз, сопутствующие заболевания, осложнения, количество,длительность и сроки проведения хирургического вмешательства, данные микробиологических исследований и проводимая антибактериальная терапия.Статистический анализ проводился в системе статистического анализа SAS(программный пакет SAS Institute, США, версия 8.02 для WindowsXP). Описаниеколичественных признаков представлено в виде среднего значения ± стандартноеквадратическое отклонение.Описательная статистика была выполнена для всех анализируемых показателей в зависимости от типа переменной: при анализе качественных показателейопределялась частота и доля % от общего числа случаев, при анализе количественных показателей – среднее арифметическое, стандартное отклонение, минимальное и максимальное значение, медиана.

Расчет проводился для каждой группы пациентов, и для всех в целом.29Достоверность различий средних величин оценивалась с использованием tкритерия Стьюдента. Для выявления степени взаимосвязи между изучаемымипараметрами использовался χ2- критерий. «Нулевая гипотеза» об отсутствииразличий между сравниваемыми выборками отвергалась при уровне значимостиp<0,05.Личный вклад автора в работуЛичное участие соискателя в получении результатов, изложенных вдиссертационной работе, заключалось в следующем:1) на преаналитическом этапе исследования - подбор пациентов, взятиебиоматериала и транспортировка его в микробиологическую лабораторию;2) на аналитическом этапе исследования - выполнение микробиологической частисовместносврачами-бактериологамиМГОБ№62(нативныемазки,культуральный посев);3) напостаналитическомэтапеисследования–проведениеанализаисистематизации полученных результатов.Основные положения, выносимые на защиту1.