Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 14
Текст из файла (страница 14)
МаОН. Продолжают пропускание СОз до тех пор, пока РН не снизится до 7,0. Затем через среду пропускают азот, очищенный от кислорода, и одновременно разливают ее в пробирки размером 18Х142 мм, через которые предварительно пропускали молекулярный азот (Ве!!со 61азз 1пс., 71пе1апс), И. Л.).
В пробирках уже должны находиться кусочки приготовленного ранее мяса (1 часть мяса на 4 — 5 частей бульона). После удаления газоотводной трубки пробирки закрывают черными резиновыми пробьамн (№ 1), автоклавнруют 30 мнн, используя прижимные устройства (для того чтобы не вылетели пробки) и затем охлаждают. Пробирки, в которых при хранении развивается бледно-розовая окраска, свидетельствующая об окислении среды, выбраковывают.
ЧАСТЬ Ч. СИСТВМАТИКА Агар Кристенсена с мочевиной [25[ 1,0 г Феноловый красный 0,012 г 1,0 г Агар 20,0 г 5,0 г Дистиллированная !000 мл 2,0 г вода Дрожжевой экстракт (ие во всех слуяа- (0,1 г) ях) 20.3.! 2. Пелтон Глюкоза ЫаС! КНзРОг Компоненты смешивают и доводят рН до б,8 — 6,9. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием.
Охлаждают до 80' С. Добавляют с соблюдением правил асептики достаточное количество 20%-ного раствора мочевины (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 2с(а. Перемешивают и с соблюдением правил асептики разливают по 2— 3 мл в стерильные небольшие пробирки. Охлаждают в наклонном положении, при котором высота столбика равна 1,3 см, а длина скошенной части 2,5 см. 20.3.13. Безазотная среда для С1оз(г(г((ит рал1еиг(апит [28[ МНБОа 7НтО 0,0493 г КтНРОа РеС!з 6НзО 0,054! г Биотии МаБОа НзО 0,0034 г Сахароза На,МоОо2НзО 0,0048 г СаСОз 2пБОг 7Н,О 0,00058 г Дистиллированная СпБОз БНзО 0,00050 г вода СоС!а 6НзО 0,00048 г 1,!32 г Следы 20,0 г 3,0 г 1000 мл 20.3.!4.
Желточный агар [7[ 20,0 г Глюкоза 2,5 г Агар 1,0 г Дистиллированная ный 0,1 мл вода Пелтон МазНРОз )з аС! МаБОЬ 0,5%- (вес/айвам) рас. тиар 1,0 мл 12,5 г 500 мл (Применение. Для повышения буферности можно увеличить количество СаСОз до 30 г.) Компоненты смешивают и автоклавируют. Перед инокулированием в среде необходимо создать аназробвые условия, пропуская через нее газообразный азот, очищенный от кислорода. Й. Овйля хАРАктвРистикА 20.3.15. Бульон Хейнса !42! Трнптон 1,5 г Дрожжевой экстракт 1,0 г К,НРО» 1,0 г Глюконат калия 40,0 г Компоненты смешивают, доводят рН смеси до 7,0 и стерилизуют фильтрованием.
20.3.16. Безазотиая среда Хиио и Уилсоиа для ВасН)из !431 Раствор А: Сахароза 20,0 г МЯ50» 7Н,О 0,5 г !ЧаС1 0,01 г Ге5О» ° 7НзО 0,015 г Раствор Б: л-Амннобе»»зой»ная кислота Бнотнп К»НРО» — КН»РО», 0,1 М брфер, рН 7,7 0,005 г 10,0 г 500 мл )Ча»МоО» 2НзО СаСО» Днстнллнровапная вода !0,0 мкг 5 мкг 500 мл Растворы А и Б автоклавируют отдельно. После охлаждения смешивают с соблюдением правил асептики равные объемы растворов. 20.3.17.
Среда для теста О/Р по Хью и Лейфсоиу [44] 2,0 г Бромтпмоловмй спннй Агар Днстнллнрованная 5,0 г вода 0,3 г О,ОЗ г 5.0 г 1000 мл Пептои (панкреатнче скнй гпдролнзат ка зевка) )ЧаС! КзНРО» 75 Компоненты смешивают, рН смеси доводят до 7,3 — 7,4. Смесь кипятят для растворения агара, стерилизуют автоклавироваиием и охлаждают до 60'С в водяиой бане. Скорлупу яйца дезиифицируют спиртом и дают ей обсохнуть. Яйцо разбивают и отделяют желток от белка. Желток с соблюдением правил асептики переиосят в расплавленный агар и перемешивают до получеиия однородной суспеизии.
Разливают в чашки и оставляют для затвердения. Работая с аиаэробиыми оргаиизмами, чашки используют в течение 4 ч после приготовления или хранят их в анаэробном боксе. ЧАСТЬ тг. СИСТНМАТНКА Компоненты смешивают и рН смеси доводят до 7,1. Смесь кипятят для растворения агара и разливают по 3 — 4 мл в пробирки размером 13Х100 мм. Стерилизацию проводят в автоклаве. Пробирки охлаждают до 45 — 50'С и в каждую пробирку добавляют 10$-ный раствор углевода (обычно глюкозы), стерилизованного фильтрованием, до конечной концентрации 1,07о.
Содержимое пробирок перемешивают и оставляют для остывания. 20.3.18. Минеральная основа по Хатнеру 1271 10,0 г 14,45 г 3,335 г 0,00925 г 0,099 г 50 мл 950 мл К основному соленому раствору добавляют несколько капель Нт50, для предотвращения осаждения. При приготовлении минерального раствора нитрилотриуксусную кислоту растворяют в дистиллированной воде и нейтрализуют, добавляя приблизительно 7,3 г КОН. Вносят остальные компоненты и доводят рН до 6,8. 20.3.19. Модифицированная Лейфсоном среда для теста О/Г (МОГ) [551 Казитон Онсо 1,0 г Агар 3,0 г Дрожжевой экстракт 0,1 г Искусственная мор- 500 мл (ННс) э 5оа 0,5 г ская вода Трис 0,5 г (равд. 20.3,29) Феноловый красный 0,01 г Дистиллированная вода Компоненты растворяют в дистиллированной воде, доводят рН смеси до 7,5 и стерилизуют автоклавированием.
Морскую воду автоклавируют отдельно. Охлаждают оба раствора до 45 — 50'С и сливают их с соблю- 76 Минеральньш" раствор: Нитрилотриуксусная кислота М95О, СаСВ 2Н,О (НН4) ьмототь 4Нто гезос 7НтО Основной солевой раствор Дистиллированная вода Основной солевой раствор: ЭДТА 2,5 г 2и5О 7Н,О 10,95 г Ге50ь 7Нто 5,0 г МиВО Н О 1,54 г Сотое 5Ньо 0,392 г Со(НОь)т 6Нто 0,243 г На,в,от.10Н,О 10,!77 г Дистиллированная !000 мл вода ав ОБщАя КАРАктйРистикА дением правил асептики. Добавляют 10- или 20о/о-ный раствор подходящего углевода (обычно глюкозы), стерилизованного путем фильтрования, до конечной концентрации 0,5 или 1,О /о.
Среду разливают с соблюдением правил асептики по 2,5 — 3,0 мл в пробирки размером 13Х100 мм н оставляют для охлаждения. 20.3.21. Малонатный бульон 1341 1,0 г 2,0 г 0,6 г 0,4 г 2,0 г 3,0 г 0,25 г си- 0,025 г Дрожжевой экстракт ()чнй ВО КеНРОв КНтРОе )ЧаС! Малонат натрия Глюкоза Бромтимоловый ний Дистиллированная вода 1000 мл Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,0. Стерилизуют автоклавированием. 20.3.22.
Предварительно восстановленная молочная среда 17) Свежее снятое молоко 100 мл Раствор ресазурина, 0,0257)-ный 0,4 мл Раствор гемина (равд. 20,3.28) 1,0 мл Раствор витамина К, (равд. 20.3.28) 0,02 мл 77 20.3.20. Лакмусовое молоко 112) Спиртовой раствор лакмуса, 50 г лакмуса измельчают в ступке с 150 мл 40о/о-ного этанола. Смесь переливают в колбу и осторожно кипятят 1 мин в паровой бане. Жидкость декантируют и хранят отдельно.
К осадку добавляют еще 150 мл 40о/о-ного этанола и снова кипятят 1 мин. Надосадочную жидкость декантируют и объединяют с предыдущей порцией. Объединенную порцию оставляют на ночь и затем разбавляют 40ово-ным зтанолом до 300 мл. Доводят рН до 7,0, добавляя по капле 1 н. НС1. Приготовление среды. В снятое молоко добавляют достаточное количество лакмуса до появления сине-фиолетовой окраски (обычно 40 мл на ! л). Доводят рН смеси до 7,0, добавляя 1 н. ХаОН.
Стерилизуют автоклавнрованием при 115 'С в течение 10 мин. Перегревание приводит к карамелизации. ЧАСТЬ У. СИСТЕМАТИКА В колбу наливают молоко и ресазурин и готовят среду так жс, как пептонно-дрожжевой бульон Рт' (разд. 20.3.28). После кипячения и остывания добавляют гемнн н витамин К!. После пропускання СОт рНдолжен быть 7,!.
Среду разливают в пробирки, через которые был пропущен газообразный азот, закрывают пробкамн, помещают в зажнмное устройство и автоклавируют при 121'С в течение 12 мин. 20.3.23. Бульонная основа Меллера [611 Пептический гидролизат животной ткани ()5Р 5,0 г Экстракт нз говяжьего мяса 5,0 г Вромкрезоловый красный, 1,5з/з-ный раствор 0,825 мл Крезоловый красный, 0,2зй.ный раствор 2,5 мл Глюкоза 0,5 г Пирндоксаль 0,005 г Дистиллированная вода 1000 мл Примечание; По оригинальной методике используют специальный пелтон Органа; однако можно применять тиотон (ВВ(., пептический гндролизат жввотной ткани) [!О).
Компоненты смешивают, доводят рН смеси до 6,0 пля 6,5. Смесь разливают в пробирки размером 13Х Х100 мм и стерплизуют автоклавированием, 20.3.24. Бульон МИУР Полипептон или забуференный пептон 7,0 г КзНРО„(см, примечание) 5,0 г Глюкоза 5,0 г Дистиллированная вода 1000 мл (Примечание: При испытании бактерий рода Вас!!!из н реакПни Фогес — Проскауера фосфат заменяют 5,0 г (ЧаС( [2).) Компоненты смешивают и регулируют рН смеси таким образом, чтобы после автоклавирования и охлаждения он был 6,9, Разливают по 5 мл и стерилизуют 1О мин нри 121'С. 20.3.25.
Питательный агар Экстракт из говяжьего мяса 3,0 г Пептон 5,0 г Агар !5,0 г Дистиллированная вада 1000 мл 78 ЗО. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 6,8. Стерилизуют автоклавированием. 20.3.26. Фенилаланиновый агар Дрожжевой экстракт 3,0 г ЫаС! 5,0 г 1-фснилалаиии 1,0 г Агар 12,0 г НазНРО» 1,0 г Дистиллированная 1000 мл вода Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Кипятят для растворения агара, разливают в пробирки и стерилизуют автоклавированием.
Пробирки охлаждают в наклонном положении. 20,3.27. Предварительно восстановленный агар Рт' 17! Готовят бульон РУ (равд. 20.3.28) и разливают его по )О мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, через которые одновременно пропускают азот, очищенный от кислорода. Снимают газопроводные трубки, пробирки закрывают пробками и автоклавируют !б мнн в зажнмном устройстве в автоклаве с быстрым вытеснением воздуха. После автоклавирования среду перемешивают, несколько раз переворачивая пробирки в зажпмном устройстве.
20.3.28. Предварительно восстановленный бульон Рт' [71 Пелтон 5,0 г Трнптиказа 5,0 г Дрожжевой экстракт 10,0 г Ресазурин, 0,25»У»-ный раствор 4,0 мл Солевой раствор (см. анже) 40,0 мл Раствор гемина (см. и»»гкс) 10.0 мл Раствор витамина К» (см, ниже) 0,2 мл Цнстеин.
НС1 0,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Солевой раствор: 0,2 г СаС1» (безводный); 0,43 г Ме5О» 7НтО; 1,0 г К»НРО»! 1 г КН»РО»! 10,0 г НаНСОе! 2,0 г ЫаС1. СаС!з и МК50» растворяют в 300 мл дистиллированной волы. Вливают 500 мл дистиллированной воды и, номен»иная, добавляют остальные соли. После растворения солей добавляют 200 мл дистиллированной воды. Раствор гемона: 0,05 г гемина растворяют в 1 мл 1 и )ЧаОН.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
