Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Объем доводят дистнллнронанной водой до 100 мл. Латоклавируют !5 мнн прн !21'С. Раствор витамина Ки 0,15 мл витамина К» растворяют в 30 мл 95е/е -ного этанола. 79 ЧАСТЬ и. СИСТВМАТИКА 20.3.29. Искусственная морская Состав 7 [741: ХаС1 27,5 г МКС!з 50 г М250з 2,0 г СаС!, 0,5 г вода !,0 г 0,001 г 1000 мл КС! Ре50з дистиллированная вода Состав 2 [1001: !ЧНз[ЧОз 0,002 г НзВОз 0,027 г СаСН 1,140 г РеРОз 0,001 г МяС!з 5,143 г КВг 0,100 г КС! 0,690 г НаНСОз 0,200 г [ЧаС! !Чар 1Чаз510з 1Чаз504 згС!з Лзгстиллнроваинаи вода 24,320 г 0,003 г 0,002 г 4,060 г 0,026 г !000 мл Для приготовления бульона РУ сухие ингредиенты (кроме цистеина) помещают в колбу с вертикальным отводом, предназначенным для предотвращения перекипания. Для приготовления 750 мл среды используют 1-л колбу, а для приготовления 500 мл среды — 750-мл колбу.
Добавляют воду, солевой раствор и ресазурнн. Кипятят до тех пор, пока розовая окраска ресазурина не станет бесцветной. Снимают колбу с огня и вместо отвода устанавливают форштосс с двумя отводами, в один из которых вставлена газоотводная трубка. Во время охлаждения среды в ледяной бане до комнатной температуры через нее пропускают очищенный от кислорода углекислый газ. Добавляют растворы гемина, витамина Кз и цистеина.
Доводят рН смеси до 7,1 с помощью 8 п. ХаОН. Пропускание СОа продолжают до тех пор, пока рН не снизится до 5,9. Затем, пропуская через среду очищенный от кислорода азот, ее разливают в пробирки размером 18Х142 мм (Ве!1со О!азз„[пс.), через которые предварительно уже был пропущен азот. После извлечения газоотводной трубки пробирки закрывают черными резиновыми пробками (№ 1). Автоклавируют в течение 15 мин в зажимном устройстве в авто- клаве с быстрым вытеснением воздуха и затем охлаждают. Пробирки, в которых среда окрашивается в бледно-розовый цвет, свидетельствующий о ее окислении. выбраковывают.
20. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА 20.3.30. Цитратный агар Симмонса !84! 2,0 г 5,0 г 0,2 г 1',0 г Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 0,9. Кипятят для растворения агара, разливают в пробирки и стерилизуют автоклавированием. Пробирки остывают в наклонном положении. 20.3.3!. Агар с соево-казенновым гидролизатом Панкреатичегкнй гндролизат казеина !!ЗР 115,0 г Папаиновый гидролизат соевой муки ЦЗР г,' 5,0 г МаС1 5,0 г Агар 15,0 г Дистиллированная вода !000 мл Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Смесь кипятят для растворении агара и стерилизуют автоклавированием.
!Примечание! эта среда известна также под названием триптоно-соевый агар или триптиказо-соевый агар; его можно использовать в качестве основы для кровяного агара.) 20.3.32. Полужидкая аргининовая среда Торили !9Ц !.-аргииин НС! 10,0 г Агар 3,0 г Дистиллированная 1000 ма вода Пептои МаС! К,НРО, Феноловый красный Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,2. Смесь кипятят для растворения агара и стерилизуют автоклавированием.
20.3.33. Модифицированный бульон Тодда — Хьюитта [35~ Экс1ракт из сердца быка 1000 мл Неопепз он 20,0 г Компоненты смешивают, и доводят рН смеси до 7,0 с помощью 1 н. НаОН. Затем добавляют: МаС! 2,0 г МаНСО, 2,0 г МаеНРО, 0,4 г Глюкозу 2,0 г 8! Цитрат натрия ЫаС! МЕЗО» !ЧН Н РО !,0 г 5,0 г 0,3 г 0,01 г КтНРО4 Бромтимоловый синий Агар Дистиллированная вода 1,0 г 0,08 г 15,0 г 1000 мл ЧАСТЬ Ч.
СИСТЕМАТИКА Доводят рН смеси до 7,8. Смесь кипятят 15 мин, фильтруют через бумагу и разливают в пробирки. Стерилизуют автоклавированием 10 мин при 121'С. 20.3.34. Агар с тремя углеводами и железом 10,0 г )О,О г Панкреатический гидролизат казвина ()5Р (см.
примечание) Пептичсскай гидролизат «инно«ной ткани ОБР (см, примечание) Глюкоза Лактоза Сахароза Сульфат железа(1!)- или сульфат железа(П1)- аммония !ЧаС! Тиосульфат на«рия Феноловый красный Агар Дистиллированная вода 1,0 г !0,0 г 10,0 г 0,2 г 5,0 г О,З г 0,024 г 13,0 г 1000 мл (Примечание. Первые два номпонеита можно заменить следующими: экстракт из говяжьего мяса — 3,0 г; дрожжевой экстракт— 3,0 г; пептон — 20,0 г.) 20.3.35.
Безазотная среда для К1е(«э(е1(а Иоча и Пеигры 199! Раствор Л: На«НРО4 КНэРОч Дистиллированная вода Раствор Б« Мя50« 7НэО Ре50« 7Н«0 На«МоОь (безводный) 6,25 г 0,75 г 500 мл 6,25 г 0,04 г 0,005 г 20,0 г 3,5 г 500 мл Сахароза г!аС! Дистиллированная вода Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 7,3. Смесь кипятят для растворения агара и разливают в пробирки.
Стерилизуют автоклавированием 15 мин при 121'С. Охлаждают, наклонив пробирки так, чтобы высота столбика агара составляла 2,5 см, а длина скошенной части — 3,8 см. м овшдя хлрдктарнстнкл Растворы А и Б автоклавируют отдельно и после охлаждения объединяют их равные объемы с соблюдением правил асептики. 20.4. РЕАКТИВЫ 20.4.1, Реактив Венедикта Г(нграт натрия 17,3 г г4аеСОз 10,0 г Сн304 3НеО 1,73 г Первые два компонента растворяют при нагревании в 80 мл иоды.
Смесь фильтруют, разбавляют до 85 мл. Растворяют Сн5О4 в 10 мл воды и, помешивая, переливают в карбонатно-цнтратный буфер. Общий объем доводят до 100 мл дистиллированной водой. 20.4.2. Забуференный раствор глицерина для монтирования микроскопических препаратов Глицерин 90 мл Фосфагно-солевой буфер (ФСБ) (равд. 20Л.17) 10 мл Компоненты смешивают и доводят рН смеси до 8,0, добавляя 5)аОН. Сосуд с раствором плотно закупоривают для предотвращения абсорбции двуокиси углерода. Свежие растворы следует готовить каждый месяц. 20.4.3.
Угольно-желатиновые диски 1521 15 г дегидратированной пищевой желатпны (О)1со ).аЬога1ог(ез) смешивают со 100 мл водопроводной воды н смесь нагревают для растворения желатнны. Добавляюг 3 — 5 г мелко измельченного актнвировапного угля, смесь хорошо встряхивают и разливают в чашки Г!етри слоем толщиной 3 мм. Смесь разливают достаточно охлажденной, для того чтобы она быстро затвердела до осаждения активированного угля. Рекомендуется перед разливом желатины смазывать дно чашки очень тонким слоем петролатума. После того как смесь затвердеет, ее вынимают из чашки и помещают в 10-о~юный раствор формалина на 24 ч. Затем вырезают из затвер- 83 ЧАСТЬ Ч.
СИСТЕМАТИКА девшей желатины диски диаметром 1 см нли полоски шириной 5 — 8 и длиной 20 мм. Полоски н диски заворачивают в марлю, опускают в сосуд, который помещают под кран с водой на 24 ч. Затем их кладут в бутыли с завинчивающимися крышками, заливают водой и стерилизуют 80 мин паром или повторным нагреванием в течение 20 мин в водяной бане при 90 — 100'С (не автоклавируют!).
После стерилизации сливают воду и помещают полоски или диски с соблюдением правил асептики в стерильные среды (по 1 полоске в пробирку). Среды инкубируют для проверки на стерильность, после чего они готовы для инокулирования. 20.4.4. Проявляющий раствор для аргинина [771 а-Нафтол, 257,-ный (вес/объем) раствор в и-пропаиоле 20мл Диацетил, 1е/е-ный (вес/объем) раствор в и-пропаноле 2,5 мл Компоненты смешивают и разбавляют н-пропанолом до 100 мл.
20.4.5. Реактив Эрлиха и-Днметиламинобенаальдегнд 1,0 г Этанол, 957е-ный раствор 95 мл НС) (конц.) 20 мл Альдсгид растворяют в этаноле и затем добавляют кислоту. Хранят в холодильнике в защищенном от света месте. 20.4.6. Формиат-фумарат (Ф-Ф) [71 Формиат натрия 3,0 г! Фумаровая кислота 3,0 г Дистиллированная вода 50 мл Компоненты смешивают. Добавляют 20 гранул )ь'аОН, размешивают до растворения этих гранул и фумаровой кислоты. Доводят рН смеси до 7,0, добавляя около 15 капель 4 н.
ХаОН, и стерилизуют фильтрованием. аа. ОБщАя хАРАктеРистикА 20.4.7. Реактив Ковача л-Днметиламинобензальдегид 3,0 г Пентанол или бутанол (амиловый илн бутиловый спирт) 75 мл НС! (конц.) 25 мл Альдегпд растворяют в спирте при 50 — 55'С. Раствор охлаждают, добавляют к нему кислоту и хранят в холодильнике в защищенном от света месте. 20.4.8. Реактивы для определения оптического вращения молочной кислоты (71 раствор хлорной кислоты (КК): Хлорная нислота, 70зй-ная 5,8 мл Добавляют дистиллированную воду до 100 мл.
Буферный раствор: Глицин 3,75 г Сульфат гидразина 5,2 г Компоненты добавляют к 60 мл дистиллированной воды. Доводят рН смеси до 9,0, добавляя 8 н. Ь)аОН, и разбавляют дистиллированной водой до 100 мл, Раствор лактатдеаидросеназы (ЛД)г Лактатдегидрогеназа из мышц кролика (номер по ка- 0,8 мл салагу ь-2375; 51йша СЬеппса1 Со., 51. 1.ошз, Мо.) Дистиллированная вода 0,8 м л Раствор готовят в ледяной бане и хранят во льду. Его следует готовить в день применения.
Раствор ФЛЬЬ Никотинамидаденнндинуклеотид (НАВ, номер по ката- 0,160 г логу Н-7004; 51йша СЬеш)са) Со.) Дистиллированная вода 8,0 мл Растворяют 5)АР в воде; хранят в холодильнике; используют свежеприготовленный раствор. 20.4.9. Раствор метилового зеленого для теста на ДНКазу 1851 Метиловый зеленый (номер по каталогу М295, Сегщ1еб иго!ой!са! 51а!п, С. 1. № 43590 г!зЬег 5с1еп101с Со., РНМЬогйЬ, Ра.) Дистиллированная вода 0,5 г 100 мл чАсть ч. системдтнкд Краситель растворяют в воде.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
