Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 99
Текст из файла (страница 99)
6. М!!!ег А О. Ехрегнпеп1в !п то1есп!аг яепе!!сз. Со!д 8рбпк Нагьог 1.аЬога1огу, СоЫ Бринк НагЬог, Ы. У., 1972. ЧАСТЬ 1!. РОСТ 7. Р!г! Я. У. Рппс!Р!ев о1 гп!сгоЬе апй се11 соц!ча??оп, В1ас1пчеИ Зс!еп! И?с РпЬИса1юпв, Ох?огй, 1975. (Имеется перевод: Перт С. ?Лж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. — Мс Мир, 1978,) ?1.6.2.
Специальная литература 8. Вг!г?уез В. А. Зугпр. Зос. Йеп. М!сгоЫо?., 26, !83 — 208 (1976). 9. Всоси Т. Р. Зс1епсе, 155, 81 — 83 (1967). 10. Всоси Т. Р, Вас1епо?. Реч„35, 39 — 58 (1971). 11. Виспалал АЬ Е. Л. ?п1ес1, 61я., 23, 109 — 125 (1918). 12. Са!ат С. Т. !п: Л. Р. Ь?огг?в апй Р. %. В!Ььопз (ебв.), Ме?Ьойя 1п гп!сгоЬю!о2у, чо?, 1, р. 567 — 592, Асаньею?с Ргезя, !пс., Ь?етч Уогц 1969.
13. Сатруей А. Вас!епо1. Веч., 21, 263 — 272 (1957). 14. Сара!г?о Р. Н., Вагьоиг Я ЕЬ 1п: Р. С. Напатчац апг? ??. В, Зе!!отч (ес1з.). Мо!есп!аг шесЬапцгпв 1ог гера1г о1 ОЬ?А, раг1 А, р. 405— 418, Р?епиш РиЬИяЫп8 Согр., Ь?е~ч Уог?г, 1975. 15. Са?о Е. Р, Ситт!лз С.
В., Но!г?еталл У.. К, УоЬлзол У. Е., Мооге 97. Е. С., Ят(уег! Кс М., Ятцй К. В. Я. Оп!Впе о1 сбпкв1 гпе(Водя ш апаегоЫс Ьас1ег!о?оиу, Ъ!гб!п?а Ро!у1есЬшс Оп?чегвИу, В!ас?свьпгб, 1970 16. С1?рол С. Е. Л. Вас1епо1., 92, 905 — 912 (1966). 17. У?гайе У Р., ТвисМуа Н, М. Арр!. М?сгоЫо?, 26, 9 — 13 (1973), 18. УНллеу О. У.
5?а!!в!!са? гпе?ьоб ?п Ыо?ои?са? аввау, Зппп ей., р. 570— 586, На1пег РнЫ?зЫпи Со., Ь?етч Уог?с, 1964. !9. Огау Т. Н, О., Ров?да!е У. Н. Зутр, Зос, Оеп. М!сгоЫоЕ, 26, !в 43 (1976). 20. ОйлЯег Н. Н., Вегасег Р, 2, А?12. М!сгоь?о?, 11, 191 — 197 (1971). 21.
НаЫогзал Н. О., 22еу!ег М ?7. Л. Вас!епо?„25, !О! — !21 (1933). 22. Нанев Т. А., Оег)ге У. ?г., Рауаол У. Р. 1п: Р. Качепарь (ей.), Апа1уИса! пнсгоЫо?о2у, р. 219 — 247, Асайеш!с Ргезя,?пс., Ь?ем Уог?с, 1963. 23. УУеаел С.-О„Н!ел! Т. Ап?огпа1!оп |п ш!сгоЫо?обу апй ?югпппо?опу, ЛоЬп %1?еу апб Вопя, ?пс., Ь?етч Уог?г.
1975. 24 НоЫетал Е. К, Са!о Е. Р., Ураоге 07. Е. С. (ейя.), Апаегоье 1аЬога1огу гпапна1, 41Ь ес?., Тг1гк!п!а Ро1у?есьп!с !пя?цн1е апд 5!а!е Оп!чегяцу, В?асЬзЬшу, 1977. 25. Нилуа!е )7. Е. ?п: Л. ??. Ь?огпв апд О. %. ??1ЬЬопя (ейв.), Ме!Ьодя 1п ш!сгоЫо?обу, чо1. 3, р. 117 — 132, Асаг?еш!с Ргеяв, 1пс., Ь?етч Уог?г, 1971. 26. Каоелауь Р. 1п: Р. Качепабь (ей), Апа1чцса? пнсгоЬ!о?оду, р, 43 — 121, Асаньею?с Ргевв, ?пс..
Ь?евг 'гог?г, !972. 27. Кеглег М, СоМе О. ?)., САею Н., МсНицу Р. У. Л. Ор!. 5ос. Аш., 68, 592 †6 (1978). 28. Кось А. У. ВюсЬЬп, В1ооьчв. Ас1а, 51, 429 †4 (1961) 29. Кось А. У.. Л. ТЬеог. Вю1., 18. 133 †1 (1968). 30. КосА А. Е. Апв1. В?осьеш., 38, 252 †2 (!970). 31.
Косу А. У.. Абч. МкгоЬ. Раув о?, 6, 147 †2 (197!). 32. Кось А. Е Л Вас!епо1., 124, 435 †4 (1975). 33 Кось А Е. Л. Оеп. М!сгоЫо!., 89, 209 — 216 И975). 34. Кось А. У.. Регврес?, В?о1, Меб„20, 44 — 63 (1976). 510 Глава 12 ХРАНЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ Р. Герна В большинстве бактериологических лабораторий ор. ганизованы музеи живых культур микроорганизмов, используемые в процессе обучения, в исследовательских, промышленных и других целях. Правильное хранение культур является чрезвычайно важной проблемой, которой следует уделить (но часто не уделяется) такое же внимание, как стандартизации оборудования и выбору химических веществ.
Потеря или изменение свойств основных культур вследствие нх неправильного хранения помешали выполнению многих научных программ. Основными целями хранения является поддержание жизнедеятельности клеток и чистоты культур, а также предупреждение изменении и мутаций, т. е. сохранение микроорганизма в состоянии, максимально близком к исходно выделенному штамму. Существует много методов хранения бактерий, однако не все штаммы при использовании какого-либо из них ведут себя одинаково. Выбор метода часто определяется наличием оборудования, места для хранения и квалифицированных сотрудников.
Ведение записей является важным аспектом сохранения основной культуры, которым нередко пренебрегают. Слишком часто при выделении микроорганизмов не обозначают штамм, а если и обозначают, то это не отражают документально в каталоге штаммов.
Цифровое или буквенное обозначение штамма связано с его спецификой, т. е. с отличительными фенотипичсскими характеристиками, которые и должны быть отражены. При документации должны указываться источник выделения и имя исследователя, выделившего штамм, поскольку таким же цифровым или буквенным индексом могут быть обозначены еще каьис-либо штаммы, выделенные другими исследователями. В некоторых случаях отмеченные цзменения штаммов, которь|е, как полагали, бгяли 512 м хелнение микеоогглиизмов вызваны условиями хранения, па самом деле оказались результатом ошибок при документации, например имели иеправильиый номер в рабочем журнале или иа коитейиерах. 12.1.
МЕТОДЫ НЕПРОДОЛЖИТЕЛЬНОГО ХРЛНЕНИЯ 12.1.1. Субкультивироваиие Традиционным методом хранения бактериальиых культур является пх периодический пересев иа свежие среды. Интервал между пересевами зависит от микрооргаиизма, используемой среды и внешних условий. Некоторые бактерии следует пересевать через день, другие— только через несколько педель или месяцев, При использоваиии этого метода для хранения культур должны быть соблюдены три условия: 1) подходящая поддерживающая среда; 2) идеальная температура хранения; 3) необходимая частота пересевав.
Поддерживающая среда Предпочтительнее использовать минимальные среды [131, поскольку в иих процессы метаболизма в микрооргаиизмах идут с пониженными скоростями и поэтому промежутки между пересевами удлиняются. Однако для роста некоторых бактерий требуются комплексные среды, или же для сохранения их специфических физиологических свойств необходимо присутствие в среде сложиых соединений. При использовании комплексной среды могут потребоваться более частые пересевы, связанные с ускоренным ростом бактерий или накоплением коиечного продукта метаболизма. Хранение Простейшим способом является хранение культур микроорганизмов при комнатной температуре в штативе пли в специально скоиструироваииом для хранения боксе, в котором имеются полки с отверстиями для пробирок. При таком хранении культур необходим постоянный 513 ЧАСТЬ П. РОСТ контроль, поскольку они имеют тенденцию быстро нысыхать, и если условия в лаборатории не регулируются, то культуры плохо переносят температурные колебания.
Для уменьшения высыхания культур используют завинчивающиеся крышки с резиновыми прокладками, обертывают верхнюю часть пробирок парафильмом (Ъ"%й Яс(епИ(с, 1пс.; № 52858-000) или помещают пробирки в пластмассовый мешок (!г!ЧК 5с(епИ!с, 1псл № 11215-790). Чтобы уменьшить скорости метаболизма микроорганизмов, культуры хранят в холодильнике прп 5 — 8'С. Используя эти меры предосторожности, можно сохранять большинство бактерий в течение 3 — 5 мес без перссева. Режим пересевов Частоту пересевов (субкультивирования) определяют экспериментальным путем.
Субкультивирование следует проводить как можно реже во избежание селекции вариантов. На случай потери культуры желательно сохранить дубликаты пробирок с ней. После каждого пересева культуру проверяют иа чистоту и периодически проводят сокращенную проверку для выявления каких-либо изменений в фепотнпическнх свойствах бактерий. В пересеваемых культурах не следует выделять единичные колонии, поскольку при этом повышается вероятность селекции мутантов. Основными недостатками метода периодического пересева являются: риск заражения, ошибки прп обозначении штаммов или наклеивании неправильной этикетки, селекция вариантов или мутантов, возможная потеря культур и необходимость выделения специального места для их хранения. 12.1.2.
Хранение под минеральным маслом Многие виды бактерий успешно хранят месяцами или даже годами с помощью сравнительно простого и дешевого метода, а именно под слоем стерильного медицинского минерального масла (можно использовать вазелиновое масло с удельной плотностью 0,865 — 0,890). Однако из-за недостаточной стерильности минерального мас- з!4 !2. ХРАНЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ ла при использовании этого метода может происходить заражение культур. Масло стерилизуют в сушильном шкафу при 170'С в течение 1 — 2 ч; автоклавирование для этой цели применять не рекомендуется 119). Культуры выращивают на косяках, в столбиках агара илн в жидкой среде соответствующего состава.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
