Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Прежде всего важно выполнять технические требования, благодаря чему возможна наиболее точная регистрация изображений. В целях контроля можно рассмотреть каждую деталь снимаемого изображения, за исключением случая, когда используются совершенно необычные длины волн. Имеются превосходные книги, в которых подробно описываются и разъясняются эти требования 13, 5, 7, 91. К наиболее общеупотребительным относятся три типа аппаратов: 1. Насадочная окулярная фотокамера с рулоном пленки (обычно 35 мм).
Над окуляром в такой камере обычно располагается светоделнтельное устройство, позволяющее видеть изображение, чтобы его можно было сфокусировать, через боковой окуляр. Все дополнительные детали помещаются на тубусе микроскопа. 2. Встроенные фотокамеры, разработанные рядом фирм, изготавливающих микроскопы. Эти фотокамеры имеют экспонометры и устройства для задания выдержки. Обычно онн отвечают поставленным целям; к ним прилагаются описания с правилами пользования. 3.
Аппараты старого типа с гофрнрованнымн светонепроницаемыми мехами (используются редко). Такой аппарат помещают на подставке рядом с микроскопом и подсоединяют основание мехов к световыводящему патрубку, в свою очередь соединяемому с верхней частью тубуса микроскопа. В верхней части аппарата устанавливается рамка, которая изготавливается либо под обычную пленку, либо под пленку типа Ро!агоЫ. Успех при фотографировании с помощью микроскопа и получении в результате фотоотпечатков во всех случаях зависит от следующих факторов: 1.
Качества препарата, надлежащим образом закрепленного и помещенного точно в фокусе. 2. Качества оптики, правильно настроенной и освещаемой (метод Келера следует предпочесть другим), 4! часть ь ИОРФОлОГия позволяющей получать наилучшее из возможных изображений, а также от подбора цветных светофильтров. 3. Соединения фотокамеры и микроскопа, при котором не должно быть вибраций. 4. Правильно подобранной пленки и фотобумаги, а также от их обработки, обеспечивающей оптимальный размер зерна при правильном контрасте и диапазоне плотности. 5. Правильно выбранного общего увеличения.
Как 1-й, так и 2-й пункты уже подробно обсуждались, В 3-м пункте существуют некоторые проблемы, поскольку при сочленении фотографических устройств с тубусами микроскопов образуются и передаются вибрации. Отчасти они возникают оттого, что нажим на спуск затвора сдвигает светоделитель, а затем приводит в действие сам затвор; эти движения порождают сохраняющиеся во времени вибрации. Затвор, задающий время экспозиции, лучше всего расположить между лампой и микроскопом. Вибрация не имеет значения при использовании фотокамер, снабженных мехами, которые создают своего рода световой манжет вокруг окуляра, позволяющий камере и микроскопу быть независимыми и не касаться друг друга.
Все же вибрации следует сводить к минимуму, чему помогает прочный, массивный, не касающийся стены стол. Пленка должна быть панхроматической с чувствительностью 60 — 100 ед. АЬА (чтобы экспозиции находились в хорошо контролируемых пределах), но прн фазово-контрастной микроскопии гораздо лучше использовать пленку с большей чувствительностью (300 — 400 ед. АЬА), поскольку уровень освещенности здесь значительно ниже.
Экспонометр позволяет воспроизводить вы держки, установленные в контрольном опыте. Если в вашем отделе или лаборатории собрались выкинуть старый фотоаппарат с мехами, приберегите его, потому что это самый лучший аппарат, позволяющий проводить работы высочайшего качества, пусть и не самый удобный. Прежде чем печатать микрофотографии, вы должны подумать об общем увеличении и о том, какую деталь вы хотите показать. При обработке пленки следует при- 42 К СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ держиваться инструкций изготовителя, это гарантирует получение хорошего контраста.
Зерно на проявленной пленке не позволяет печатать снимки с увеличением больше чем в 2 — 2,5 раза. В благоприятных условиях при микроскопии обычных бактерий, как правило, получают общее увеличение 1500, что необходимо для выявления тонкой детальной структуры. Поэтому изображения большего размера, получаемые на куске пленки в камере старого образца, для которой при печати обычно достаточно увеличение в 1,25 — 1,5 раза, лучше, чем значительно более мелкие изображения на 35-миллиметровой пленке.
Если полученные микрофотографии по резкости и качеству изображения уступают картине, наблюдаемой в микроскоп, попытайтесь все повторить. Независимо от используемой камеры важна точность фокусировки. При использовании аппарата с мехами удобен такой прием: помещают на место фотопленки (или фотопластинки) плоскую стеклянную пластинку с меткой, нанесенной на ее нижнюю сторону; на эту метку наводят зрительную трубу, глядя в которую, затем регулируют фокусировку всей системы. При желании можно использовать также традиционные матовое стекло и черную накидку. Фотографии следует увеличивать до формата, позволяющего легко различать важные детали; объект при этом должен занимать большую часть фотографии. 1.10.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ Книги по световой микроскопии и фотографии в микроскопии легко доступны — от энциклопедий до брошюр в бумажной обложке. Однако в книгах можно найти лишь основные принципы микроскоппрования. Научиться удовлетворительно работать с микроскопом можно только под чьим-то непосредственным руководством, приобретая практический навык, немалую часть которого составляет искусство приготовления хороших препаРатов. Микроскопии бактерий посвящено множество различных книг, но ее принципы универсальны. В приводимом ниже перечне (! — 10) представлены различные типы опубликованных по данному вопросу работ.
ЧАСТЬ !. МОРФОЛОГИЯ 1,11 ЛИТЕРАТУРА 1. Апошшоцж РЬо(адгарйу !ЬгопйЬ йе пнсгозсоре. ЕазЬпап Койай Со., Коснеыег, Х, т'. Это пример брошюр, которые выпускаются фирмамк-изготовите. лями, связанными какими то сторонамн своей деятельности с микроскопией. Последние нх варианты можно получить у подобных этой фирм или их агентов. По большей части зто превосходные издания.
2. Вагег ?с 1ес!пгс по1сь оп йе нзе о[ йе ппсгозсоре. В!асймеИ 5с!еппйс РцЫюа1юпь, Ох1огй (1968). Советы опытного микроскописта. 3. Вга ун у Б. ТЬе орИса! ппсгозсоре ш Ыо1оцу. Ебтчагб Агпо!б, 1.опбоп (19?6). Это маленькая брошюра, в которой ясно изложен материал по разрешающей способности микроскопов н современяым видам микроскопии.
4, Сагугйе А 7. 1пнпегь(оп оИ апб йе ш1сгозсоре. ТесЬшса! Еерг!п1 1Π— !051. К. Р. Сагйййе 1аЬога!ог!ез, Себбаг Огочц Х. А (1975). Другая брошюра, выпущенная фирмой-изготовителем. Комментарии см. выше [!). 5. СиуИну С, Р, А. Модегп ш!сгоьсору — е1ешеп1агу 1Ьеогу апб ргасИсе, Вийегмогйь апд Со., Ьопдоп (1974). Комментарии см, выше [3). 6. Ену!е С. Е, (ег(.). РЬо1онгарЬу [ог йе ьс!епИз1. Асабеш!с Ргезь, 1пс., Хетт 'г'огй (1968). Общие вопросы научной фотографии, включая микрофотографию. 7. ?ишез А [эцЛ1 ш!сгозсорю !есЬп!г[нез !п Ыо1оцу зпб шеб!с!пе.
МагИпнз ХИЬоИ Мегйса! 1?ш!з!оп, Агпз1егбагп (19?6). Прекрасная современная книга, в которой освещена теория н практика с упором иа последнюю. В ней даются советы по специальным и усовершенствованным методикам и их прнменеаию, включая фазово-контрастную, иитерференционную, темиопольную, поляризационную и люмииесцентную микроскопию. 8.
Моугигу Р. К. М[сгозсору 1гош 1Ье чету Ьец!пп!пя. Саг! Ее!аз, ОЬег1госЬеп, Резега! ИернЫ[с о1 Оеппапу. Еще одна брошюра, выпущенная фирмой-изготовителем. Комментарии см. выше [1). 9. Вй!!!ауег С. Р. РЬо1ош[сгоягарЬу!п йеогу апй ргасИсе. уойп 9?Иеу апд Боль, 1пс., Хечг 'гогй (1944). Ничто, по.видимому, не заменит этого классического произведения, в котором досконально и в то же время доступным языком разбираются свойства линз в объективах, свойства окуляров и конденсоров.
В нем подробно изложены приемы хорошего освещения, взвешены прсимущества различных нммерсиоиных сред, разбираются практические н теоретические вопросы микроскопии. 1О. В(аутег Е. М. ОрИса1 ше!Ьобь !п Ыо!оцу. Лойп уггйеу апд Эопь, 1пс., Хечг Ъогй (!970). Эта книга — источник теоретических основ большинства видов микроскопии и введение в аналитические процессы, включая дифракцию, спектроскопию и сопряженные оптические методы. В ней освещаются принципы, но нет практических рекомендаций. Глава 2 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ Р. Мюррэй, К Робиноу Развитие методов электронной микроскопии ослабило стремление исследователей получить как можно больше информации цитологического характера методами световой микроскопии.
Тем не менее эти методы еще очень полезны для общего изучения бактерий и заполнения пробелов на уровне распознавания клеточных компонентов между живой клеткой, с одной стороны, и изображением, которое дает электронный микроскоп, — с другой. Приготовить образцы для световой микроскопии нетрудно, а получаемые с ее помощью результаты очень ценны как с эстетической, так и с научной точки зрения. В ряде мест этой главы упоминаются или подразумеваются следующие полезные предметы. !.
Пинцет с плоскими незазубренными захватывавшими поверхностями, изогнутыми под углом 30', удобный для вынимания покровных стекол; изогнутый заостренный ювелирный пинцет с незазубренными кончиками также хорош для этой цели. 2. Нож для нарезания атаровых блоков. Для этой цели годны все виды инструментов, но обычные ножи или скальпели портятсн при стерилизации в пламени. Поэтому лучше всего пользоваться нихромовой проволокой, конец которой, обработанный на наковальне, имеет узкую листовидную форму.
Отрезанный довольно короткий кусок этой проволоки закрепляют в держателе петли и стерилизуют в пламени. 3. Колумбийские кюветы для окрашивания. Они облегчают работу с препаратами, нанесенными на покровные стекла, при их хранении, отмывке и окрашивании. Кюветы сделаны с таким расчетом, чтобы вмещать квадратные покровные стекла со стороной 22 мм 1А. Н. Тпотаз Со., РЫ!абе!рЫа, Ра.).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
