Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Главная же наша цель заключалась в том, чтобы показать, как сделать микроскоп, световой илн электронный, более полезным, эффективным и ценным в работе. В иллюстративном материале особой нужды нет, так как основные параметры и устройство микроскопов подробно разбираются в учебниках и в цитируемой литературе, имеющейся в каждой главе. Поэтому мы приведем по возможности ясное описание пригодных, на наш взгляд, методик и акцентируем 14 ВВЕДЕНИЕ внимание на возможных ошибках и трудностях. Одновременно мы пытаемся подчеркнуть, что многое можно сделать на очень простом оборудовании, причем умение приходит с опытом, который ничем не заменишь. Световой микроскоп доступен н необходим всем микробиологам, но, поскольку его эффективное использование достигается не так уж часто, мы приводим в гл.
1 подробные рекомендации, знание которых необходимо каждому. В гл. 2 и 3 описывается использование светового микроскопа для получения информации о детальной структуре и для идентификации бактерий. Электронный микроскоп устроен значительно сложнее, чем световой. Как правило, его обслуживанием и регулировкой занимаются специалисты-профессионалы, которые инструктируют, помогают и дают советы. Поэтому в гл, 4 большое внимание уделяется методическим аспектам подготовки препаратов для микроскопии. Для успешного продолжения работы, начинающейся с разрушения бактериальных клеток и нх фракционирования, описываемых в гл. 5, нужна как световая, так и электронная микроскопия.
При этом в качестве главного средства контроля чистоты субклеточных фракций и установления связи между структурой и функцией применяется электронный микроскоп. Глава 1 СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ Р. Мюррэй, К. Робииоу Микроскопические исследования проводить легко и интересно, а их результаты отличаются четкостью, когда под рукой имеются микроскопы по крайней мере четырех различных типов. Лучше всего, если они постоянно готовы к работе и содержатся в порядке. Речь идет о 1) обычном, хорошо, но без излишеств оснащенном микроскопе, нужном для оценки в самом первом приближении, 2) фазово-контрастном микроскопе, 3) оптимально оборудованном микроскопе, настроенном на высокое разрешение деталей и приспособленном для фотографирования, и 4) люминесцентном микроскопе.
Конечно, возможны различные сочетания, а иногда нужды исследователей удовлетворяются и при более ограниченном выборе. В продаже имеются самые разнообразные микроскопы. Те из них, что производятся на лучших заводах, примерно одинаковы по качеству, а количество предлагаемых для них дополнительных приспособлений более чем достаточно.
Они различаются главным образом конструкцией опорной части, и их выбирают исходя скорее всего из соображений удобства и личных симпатий. По-настоящему хорошие микроскопы дороги. Приложив усилия, можно делать хорошие работы на микроскопе общего назначения или даже на студенческом микроскопе, если оборудовать нх первоклассной оптикой. Однако при этом трудно состязаться с работами, выполненными на приборах, которые поставляются лучшими фирмами- изготовителями, Выбор может зависеть также от технических требований. Всегда рекомендуется проводить прямые сравнения разных микроскопов и приспособлений на собственном материале при используемых в работе условиях.
Поэтому нет необходимости обращать внимание на то, кем сделан инструмент. Главное — чтобы работа на хорошем микроскопе (независимо от времени 1б ! СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ его изготовления) доставляла удовольствие, а широкий выбор приспособлений и умение пользоваться ими способствовали экономии времени и точности результатов.
Применение плохо настроенных микроскопов с плохим освещением настолько широко распространено, что лишь немногие биологи представляют себе возможности микроскопа. Иногда исследователи приходят в изумление, когда им удается получить очень большое разрешение даже на студенческом микроскопе. Это возможно в том случае, если использовать принципы, изложенные в равд.
1.1 или 1.3 и 1.3.1. 1.1. ОБЫЧНАЯ МИКРОСКОПИЯ Микроскопы, которые используют в общих целях в учебной комнате, в исследовательской лаборатории нли в клинической лаборатории, могут иметь разные марки, обладать разным качеством и предназначаться для разных условий. В бактериологии вопросы, на которые можно ответить с помощью микроскопа, формулируются следующим образом. Обладают ли изучаемые объекты размером бактерий и окрашиваются ли они так же, как бактерии? Однородны ли они по форме и размеру? Какие это бактерии — грамположительные или грамотрицательные? Организмы или клетки одного или более чем одного типа присутствуют в препарате? и т.
д. Для выяснения этих вопросов самые первые наблюдения можно, как правило, проводить, не достигая высшей степени разрешения. Сначала исследователя может удовлетворить и упрощенная процедура, поскольку хорошо известно, что для получения более высокого разрешения улучшения можно добиться почти на каждом этапе исследования. Микроскоп (рис.
1.1) должен иметь: 1. Окуляры по крайней мере 10-кратного увеличения. Вместе с тем для детальных исследований бактериальных структур нужны компенсационные окуляры с ббльшим увеличением (12Х или 15Х). Онн закрепляются в тубусе микроскопа, который имеет фиксированную или регулируемую длину (до 180 мм или до величин, рекомендуемых заводом-изготовителем). 2 — 1260 ЧАСТЬ Ь МОРФОЛОГИЯ 12 и и и !6 17 Рис. К1, Обычный оптический микроскоп, используемый для повседневной работы.
1 — тубус; 2 — револьвер со смениымн объективами; 3 — иммерсионный объектив 40Х; 4 — безыммерсиоиный объектив 40Х; б — безыммерсионный объектив !ОХ; б — иредметиый столик; 7 — предметное стекло (объект);  — окуляр; У вЂ” макровннт; 10— микровиит; 11 — препаратоводитель; 12 — штатив; 13 в конденсор; 14 — регулитор ирисовой диафрагмы; !б — кондеисорный винт; 1б— зеркало (плоская сторона); 17 в лампа; 18 — основание. 2.
Слабые безыммерсионные объективы (10Х н 40Х), которые необходимы для микроскопирования растущей культуры и для нахождения потенциально интересных полей зрения в препарате. 3. Ахроматический иммерсионный объектив (от 90Х до 100Х), для которого иммерсией служит масло. 4. Предметный столик с механическим препаратоводителем нли простыми пружинными зажимами.
Если микроскоп снабжен препаратоводителем, последний должен легко сниматься, чтобы можно было просматривать под малым увеличением чашки Петри или окрашиваемые на предметных стеклах препараты. 5. Находящийся под столиком высококачественный конденсор (апланатическнй конденсор с тремя линзами Ь СВЕТОВАЯ МИКРОСКОПИЯ с предпочтительной числовой апертурой от 1,3 до 1,4). Конденсор этого типа необходим для объективов, с которыми работают прн масляной нммерсии, поскольку он обеспечивает требуемое для ннх количество и качество света. Конденсор должен иметь ирисовую (апертурную) диафрагму, находящуюся под нижней линзой.
б. Источник света, либо смонтированный внутри микроскопа и имеющий ограниченную регулировку, либо (что предпочтительнее) внешний и перемещаемый. В последнем случае под конденсором монтируется зеркало (плоское с одной стороны и вогнутое с другой), положение которого можно менять; свет направляется вверх по оптической оси микроскопа за счет наклонного положения зеркала. Из множества различных ламп для большинства работ подходит круглая матовая лампа, над которой располагается линза типа «бычий глаз». Однако при исследовании окрашенных препаратов, особенно при освещении по Келеру (равд. 1.3.1), изображение значительно улучшается, если использовать лампу, которая дает четкое изображение источника света, снабжена держателем для светофильтра и ирисовой полевой диафрагмой.
Проекционные лампы со спиральной нитью (дающне неравномерное изображение) нужно фокусировать на матовое стекло, служащее рассеивающей перегородкой и расположенное в держателе для светофильтра лампы; затем путем регулировки отражателя, находящегося в корпусе лампы, следует сместить одно из двух изображений нити так, чтобы витки одного приходились на промежутки между витками другого, н путем небольшой расфокусировки добиться возможно более однородного н яркого освещения поверхности, служащей источником света.
Прн работе с микроскопом выполняются следующие операции: 1. В положении, когда окуляр н объектив 1ОХ занимают свои места, конденсор почти полностью поднят до уровня предметного столика, а апертурная диафрагма в конденсоре полностью открыта, зеркало поворачива1от таким образом, чтобы направить свет вверх по оптической оси. Макровинтом устанавливают объектив в положение, прн котором источник света находится в фокусе, после чего выводят его в центр с помощью зеркала. 19 ЧАСТЫ. МОРФОЛОГИЯ При микроскопировании, как правило, используют плоское зеркало.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
