Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 27
Текст из файла (страница 27)
!34 4. ЭЛЕКТРОННАЯ МИКРОСКОПИЯ Замораживание — травление, замораживание — скалывание 46. ВепейеИ1 Е. 1., Раоагй Р. (сй.). Ржеве-е|сЫо8: 1есЬпк|иез апй аррИсаИопз. 5ос|е1е Ргап4а!яе де М!сгозсор!е В!ее!гоп|4(ие, Рапв, ! 973. 47. Ви!!1|оал1 Е, 1п: Л. К. КоеЫег (ей,), Адчапсей 1есЬпщиез!п Ыо1ои1- са! е|ес1гоп ги|сгоясору, р. 67 — 112. Брг!пуег-Чег!эи, Хе|ч УогК, 1973. 48. КоеЫег У. К 1и: М. А. Науа1 (ей.), Рппс)р|св апй 1есЬпЩцев о1 е!сс1гоп гпкгозсору. В(о1оу)са! аррИсаИопв, чо!. 2, р. 53 — 98. Чап ХоЫгапй Ие!иЬоРЛ Со., Мечт УогК (1972). Сканирующая электронная микроскоаия 49. В1асК У.
Т.!и: М. А. Науа1 (ей.), Рг1пс!р!ев апй 1есЬпщиез о! всапп!пи е!ес1гоп ткговсору. В)о!об)са) арр!каИопв, чо) 1, р. 1 — 43. Чап Хоя(гапй Ие|пЬоЫ Со., Ме|ч УогК (! 974). 50. Сийга А.о Е 1и: М. А. Науа( (ей.), Рг1ис|р)ез апд 1есЬпщиез о1 зсэпи!пи е!ес1гоп писгозсору. В|о1о8|са1 аррйса1|опз, чо|. 1, р, 44— !!2. Чап Хоя|гапй )се!пЬо!й Со., Хе|ч УогК (!974). 51. Науа| М. А., 2!гЫи В. Е. 1п| М.
А. Науа( (ей.), Риис|!рез апй |есЬищиез о1 е1ес1гоп писгоясору, В)о!ои!са! арр11саИоив, чо). 3, р. 311 — 319. Чап ХозИап6 Ие)пЬо!6 Со., Хеа| УогК (1973). о2. Науез Т. Е. 1и: Л. К. КоеЫег (ей.), Айчапсей 1есЬпщиев !и Ь|о!о. и|са! е!ес(гоп иисговсору, р, !53 — 2!4. Брг!и8ег.Чег(яд, Меэ УогК, 1973. Трансмиссионная электронная микроскопия в микробиологии 53. Авакян А. А., Ко|4 П. Н., Павлова Н. Б., Атлас патогенных бактерий человека и животных, Медицина, М., 1972. 54.
01аиег1 А. М., ТЬогя1еу 34. У., ТАогпе К. У. У., Б!еу1ег (У, В. 1и: И. Ри!!сг апй Р. ЧУ. Ьоче!осК (ей.), М|сгоЫа1 иИгая1гис1иге. ТЬе ияе о1 РЬе е1ес1гоп пйсгоясоре, р. 31 — 47. Асадегп)с Ргеяз, 1пс., Хечч УОГК, 1976. 55. СгеелАа!ЕА б. Н., Еоалз Е. К 1п: С. Воо!Ь (сд.), Ме)Ьодв |п т!сгоЬ|о1оуу, чо1.
4, р. 518 — 565. Асайет!с Ргеж, !пс., Хе|э УогК (!971). ' 56. Н|КЫоп Р. У. )и: И. РиИег апй 1). ТЧ. 1.оче!осК (ей.), МкгоЬ!а1 иИгав1гис|иге. ТЬе цяе о1 1Ье е)ес1гоп т|сговсоре, р. 161 — 173. Асайепис Ргезв, !пс.. Мечт УогК (! 976). 57. НойуУйяя )Р., хогг У. А., Ура(Ьег Р. П. !и; И. РиИег ат! 17. 1Ч.
1оче!осК (ей.), МкгоЫа) цИгав1гис1иге. ТЬе цве о( 1Ье е!ес1гоп пцсгоясоре, р. 51 — 71. Асайепис Ргеяя, 1пс., Хе|у УогК (1976). 58. КеПенувгуэг Е. 1и: И. Л. С. Нагпв (ед.), ТЬе 1п1егрге1аИоп о1 иИгаЫгис1иге, р. 233 — 246. Асайепис Ргет, 1пс., Хе|и УогК, 1962. 59. Ке!!еауегугг Е., Еу1ег А., БэсЬаий У.
Л. В|орЬуз. В|осЬет. Су1о!., 4, 671 — 678 (1958). 60. Ба|за А. М. 1и: И. РцИег апй !). '|Ч, 1.очс!осК (сй.), М|сгоЬ|а! цИга. Ыгистге ТЬе иве о1 1Ье е!ес1гои писговсоре, р. 73 — 86. Асайет)с Ргевз, !пс., Хе|ч УогК (1976). 6!. УлсУг(е1й К. б. !и: Л. И. Хогпз апд О.
%, И!ЬЬопз (ей.), МеКЬойв |п т)сгоЫо)оиу, чо|. 9, р. 127 — 176. Асайепбс Ргезв, !пс., Хеа| УогК (1976). 135 ЧАСТЬ 1. МОРФОЛОГИЯ 62. Ну!ег А., Ке!!елйегуег Е. Х. Ь)а!иг(огвсЬ. Те!! В, 13, 597 — 605 (1958). 63. УРайег Р. Р., $йог! У. А., У(орет О. Гп: Е. РиВег апс) Р. ГЧ.
Г.очс- 1осЬ (ей), М!сгоЫа! ийгая1гис1иге. ТЬе нве о1 йе е1ес1гоп ткговсоре, р. 1!8 — 146. Асабепнс Ргезв, 1пс., Ь)еас "с'ог)с, 1976. Сканирующая аяектронная микроскопия е микробиологии 64. ВиЕа Е. А., Уг., УиВал О. $1, НеяяеВ!ле С. ГР. Вайег Р. Е. 1п; У. К. Ь(огг!в апб Р. %. К!ЬЬвоп (ей), Мсйос1з !п т)сгоЫо!оду, чо1. 8, р. 2 — 33.
Асадет!с Ргсвз,!пс., Ь)есч уотерс (1973). 65. Колс)о !. Гп: М. А. Науа( (ед.), Рппс!р!ея апд 1есЬпщиев оГ всапи!пи е!ес1гоп т1сгозсору. В!о!оу)са! арр!юаВопя, чо!. Б, р. 309— 316. Чап Ь)ив!ганс( Ее!пйо!д Со., Ь)есч Уотерс (!978). 66. Когтелбу А. С. 1п: М.
А. Науа1 (ей), Рппс!р!ез апб 1есйпщиев о1 всапп!пд е!ес1гоп пнсговсору. В!о!ои!са! аррВсаВопз, чо!. 3, р. 82 — 108. Чап Ь)ов!гапд Ке1пйоЫ Со., Ь)есч "сог1с (1975). 67. Нала!луа М Гп: Е. 1.. Велес!еЬВ апб Р. Рачагб (еб.), Ргеегее1сЫпи: Гесйпрциев апд арр1!са!!опз, р. 151 — 179.
5ос!е1е Ргапца!ве бе М!сговсор!е Е1сс1гоп1ане, Рапв, 1973. 68. й!Усйегяол УГ. 9г., Вибо Е. А., Уг., Кит!атал С. Р. Гп; М. А. Науа1 (ей.), Рппс!р!ев апс( 1есйпщиея оГ всапп)пд е!ес(гоп т!сговсору. В!о!ои!са! аррПсаВопз, чо!. 1, р. !59 — ! 80. Чап Ь)ов1гапд Гсе!пйо!д Со., Ь)еиг 'с'огК (1974). 69. Раяятоге $. М., Во!е В. Гп; К. РиВег апд Р. %, 1лче!осу (ед.), М!сгоЫа! и!!гая!гас!иге. ТЬе иве о1 йе е1ес1гоп пнсговсоре, р. 19— 29. Асабет!с Ргевв, 1пс., Ь)есч Уогй, !976.
70. Уояйн' 2., Тойитауа У., Ташага У. Айвз оГ всапп)пу е1ес(гоп пнсгозсору !п га!сгоЫо!оду. 16а1сн 5Ьо)п, Ь!с(., То1суо (ТЬе ГЧ!1!!аспв апб сЧ!!Ыпз 1.о., Вай!гпоге), !975. Эяектронная микроекоиия нукяеиноеык кислот 71. Втаб!еу Р. Е. !п: Р. Кау (ей), Тесйпщнев Гог е)ес!гоп пнсговсору, 2пб ес(., Р. А. Рачй Со., РЫ1абе!рЫа, 1965. 72. Рао(я УГ. 9Г., $!тол М., Рао)бяол М. МеГЬодв Епяуто1., 21, 413— 428 (!971). 73.
Кау Р. 1п: К. Ь(огпв апб Р. сйг. КГЬЬопв (ед.), Майоля!п нного. Ыо!оду, чо1. 9, р. 177 — 214. Асяс(ет!с Ргеяя, 1пс., Ь)еи Уогй (1976). 74. К!е!лясйт!с(! А, К., Хайл УГ. К 2. Ь(а!иг(огвсЬ. Тей В, 14, 770 — 779 (1959). 75. Тйотая У. О. !п: М. А. Нуа( (ей), Рг!пс!р1ез апб 1есйпщиез оГ е1ес1гоп т!сгозсору. В1о1од!са1 арр!сса!!опв, чо!. 9, р. 64 — 83.
Чап Ь)ов!гапй Ие!пио16 Со., Ь)есч Уотерс (1978). Электронные микрофотографии интерпретация и увеличение изображения 76. Ауаг А. 9г., АЫегяол УГ. Н„Сйеясое Р. 1п: А. М О!внес! (ей), РгасВса1 те!Ьобз 1п е(ес1гоп гп!сгозсору, чо!. 2, р. !91 — 276. А!нег!сап Е!яечсег РиЬВвЬ!пд Со., Ь)ссч 'гогй (!974).
77. раглеб О. С., ЕВл! УГ. В. Гп: М. А. Науа( (ей), Ргтпр(ея апб !есЬ. пщиев о1 е1ес(гоп пнсговсору. В!о1од1са! арр!Гса(!опв, чо1. 5, р. 19— 61. Чап Ь)оя!гапб Ке!пйо!д Со., Ь)есч 'сог1с (1975). 78. Ргалй У. 1п; У. К. КоеЫег (еб.), Абчапсеб 1есйпщиев !п Ыо!оу)са! е1ес!гоп пнсгоясору, р. 217 — 274. 5рг!пуег-Чег1ау, Ь)еиг УогЬ, 1973. 136 Глава 5 ПОЛУЧЕНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ К. Шнайтман Схемы фракционирования на субклеточном уровне ие могут быть универсальными, они обязательно должны быть индивидуальными. В них необходимо учитывать не только особенности отдельных организмов, но и тип органелл, которые выделяют, а также характер информации, которую требуется получить.
Мы не будем здесь рассматривать все многочисленные схемы фракционирования, применяемые для бактерий и других микроорганизмов, а опишем лишь некоторые общепринятые методы разрушения клеток и фракционнрования их содержимого, используемые для бактерий, и приведем несколько примеров применения этих методов к фракционированию кишечной палочки (ЕзспепсЫа сой).
5.1. МЕТОДЫ РАЗРУШЕНИЯ КЛЕТОК Выбор метода разрушения клеток является важнейшим моментом при построении схемы клеточного фракционироваиня. При выборе такого метода необходимо иметь в виду следующее. 1. Соответствует ли метод разрушения клеток типу исследуемого организма? Единой методики, которая давала бы хорошие результаты для всех типов бактерий, не существует.
Например, один из возможных методов разрушения большинства грамотрицательных бактерий — продавливание клеток в прессе Френча — не очень эффективен по отношению к грамположительным коккам. Во встряхивающем гомогенизаторе Брауна полностью разрушаются клетки грамположительных кокков (Вгацп МЗК зпакег) н значительно повреждаются клетки грамотрнцательных бактерий. 2. Не повреждаются ли при использовании избранного метода субклеточиые органеллы? Такая проблема существует, например, при работе с ультразвуком.
Пу- 1аа а получение клеточных ФРАкций тем обработки ультразвуком эффективно разрушаются самые различные бактериальные клетки, однако часто при этом повреждаются внутриклеточные органеллы. 3. Имеется ли необходимое оборудование? Многие механические устройства, с помощью которых бактериальные клетки эффективно разрушаются, очень дороги и поэтому малодоступны в обычных условиях или не подходят для обработки требуемого количества материала. 4. Какая методика является самой простой? Методики, в соответствии с которыми необходима длительная ннкубация, нли методики, включающие много сложных этапов, нередко дают плохой выход илн приводят к потере ферментативной актнвности. При разрушении клеток любым способом должна контролироваться степень разрушения. Часто с этой целью подсчитывают относительное число выживших клеток, но, видимо, это не лучший способ контроля, так как клетки могут утратить жизнеспособность и без потери внутриклеточного содержимого. Хорошим способом контроля является световая микроскопия влажных препаратов, но только в том случае, если она осуществляется количественно путем подсчета относительного числа оставшихся интактнымн клеток в счетной камере какого-либо типа.
Это необходимо потому, что иногда при разрушеяии клеток образуются субклеточные фрагменты, которые слишком малы, чтобы их можно было различить в световом микроскопе. Чтобы отличать интактные клетки от лишенных содержимого «теней» или больших фрагментов клеточной оболочки, применяют фазово-контрастную микроскопию, а также негативную окраску нигрознном или тушью. Если клетки разрушают по методике, в соответствии с которой они переходят в сферопласты илн протопласты в осмотически стабилизированной среде, важно определить процент такого перехода; при этом лучше воспользоваться счетной камерой, чем просто просматривать влажные препараты. Лизированные протопласты или сферопласты часто плохо видны в световой микроскоп, и одного лишь качественного сравнения числа этих структур, оставшихся ннтактными, с числом нормальных клеток недостаточно.
ЧАСТЬ !.МОРФОЛОГИЯ Другой эффективный метод контроля заключается в отборе проб по ходу разрушения и их центрифугировании в таком временном и скоростном режиме, который достаточен для осаждения интактных клеток. Надосадочную жидкость проверяют затем на содержание белка и других поглощающих в ультрафиолете веществ (т. е. нуклеиновых кислот) или специфических цитоплазматических ферментов; таким образом определяют степень выхода этих компонентов из подвергаемых разрушению клеток. Ниже мы остановимся на нескольких конкретных методиках, которые применяют для разрушения клеток. См. также равд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
