1625915648-5ed1152c004edfe493dad6e5388afaf3 (843956), страница 90
Текст из файла (страница 90)
15.5, н) н гозлзк>т в ией <шбольш<х сприцательное дзвленис (рис. 155, б). зтг> ирилодит к тому. чп) лимбраиа <щотио закуиоршз;нт отверстие ишзетш! и формируе>ся вьиот><жизый коитзнт сей-зссас!)ес1, или иначе, иниетка-лимбрзиа с саиротивлсиис м утечки более 1 ГОМ (так иазь<васмый )(!Лз ьсз!). Восле нормализации,<звлсиия В и)<не<к<' конфигурация сей.зпасйсс1 близлз к фили>ло! и целой гнтузцни, носко!и ку зона мсмбраиы, захвзчсиизя ии- Риа. 15 4 Сравнение методов регистрации с ламощью обычного мнкразлектрода (а) н росси-лнлетки (б) (37,, — сопротивление мик- розлектрода и кончика авиетки) (нз Регистрация одиночных кана- лов> Пол ред Б Сакмана н Э Неера.
М. Мнр, 19В7) М 1 ' Ъ-Р ЖЕТЕ.'> РАЗДЕП Рс Общая физиология возбудимых тканен Рис 15 5 Схема различных конфигураций рагс«-с>авр [из Реги- страция одиночных каналов l Под ред Б Сакмана и Э. Неера М. Мир, 1967! веткой, с воутрсш и й стороны коитактиру<. г с внутриклеточной жидко<-гью, а с внешней стороны —. со станЛартиь<м писк. и точи ь>м раствором.
которь>м заполня>от рзы 1>-иииг>ку..-)тз к<и>фигурзция, г одной стороны, иозволяет рсгиш риршвть олшшчнь>е ноииыс каналы иол ищи'<кой, з с другой, явля< тся иромсжугочиой лля лру> их коиф>и урзцнй. О>щ позволяет изучать иа одиночном кз>шл< роль вторичных к<сссснлжеров, которые вкчк>чщотгя чср<з р<ц<иторы илазл>атичсской к«>к<б!щи ь>. Коифигур>щия сгй-зт<з<.!«й иозвол>цт сформировать лру>ук> коифнгу!вцик>, нззываемук» их!<)с-оо! рз1сЬ.
К «образовании> приводит ргзкое огрь>ванне ииигтки оз клетки (риг. !5>5, в), причем К!К>а веа! ие мсняеп я. В зтом случае из ииистке находится лищь фраг- м<>п мембраны. виуг1хш<яя сторона к<порой сл>отргп и омьию>ощий рзгтвор нсрфузиоши>й камеры, и вне. щияя контактирует с содержимым иииетки. Дзииая конфигурация >ииользуст<я Лля изучения вклада соединений цитоилззмь> в юшзльную активность.
Конфи > ура<ив ссИ -зпас)ич1 иозволяст двумя путями (в завил>«кюти от задач иссл<дошпсля) «)х>рмировьпь конфшурщ<ик>, иазывзсмук> вй<-ссИ. В одном случ и для <с получения в иииетку необходимо резко и оЛномомгитио иодап нгболыщ>г о>р>и<жплыих дав. ла цис, разрываклцес мембрану и<щ ииисткой и образу>о>цс< низкоомнь>й иуть межлу виутрсиисй средой клетки и раствором в ииосткг. При:пом в мембрз>« возникает дырка, величина кот<Их>й позволяет осуще стиляга об«<си ионов и рззл>г>ных со<линений м<>клу пипеткой и цитоилазмой (риг.
15.5, г). В другом случае иизкоомиый путь между внутрсшц и средой кл<пки и !>щ творол> в ниц< ткс форм ирустгя:в счет влияния соединений, иахолящнхся в ииигткс и вызывакицих образовали< и мембране иор, ироницасмых для ионов.
ио иг лля молекул,)то исрфорьгп<щ>ый (р<т1ога!«1) ратаса. Литиби<лнки инстатин (лук<в>гв) и зм<)н>териции-Ь (авц>йо1епси>-В) исиол ьзуют в и иигточном растворе, побы образовать сигцифнчг< юк поры на участке мембраны иод ииисткой. Оин ироиускакп чср<з ки к>брзиу м<»«>вален >.иь«катионы и зинины. Ещ< идно соединение .
грал>ицилия (дези>!с<<И!>) . помогает формировать каналы, ироинцщмыс только лчя моновалентных катионов.;)та методика иозволщ т исслеловать ионин>стоки, иринка>о>ци<. через мембрану, идентифицировать и вычленить их. 1!ример орипшальиой кривой ири рсгигтра>ши ионных п>ков от изолированного кзрлиомиоцгп а ж< лулочка мыши в конфигурации ибо!с-ссИ ирглставл< и иа рнс.
15Х> и вил< кривой синего цвета, участки к<порой маркироваиы буквои С>. Для <ч иолучсиия у ввприкуляриых карлиомиоцит<в мыи>и фи«< ирои><зи ион нцизл иа уровне-45 мВ и ироволилн сто смещение имиульсиьв< током длительностью !40 мг ло И мВ (красная кривзя). Пз уровне фиксироищии>го потенциала -45 мВ регистрировалн отсутл в>ц токз через мсл<брану клетки «С1ы При <ъи шенин л>ембрашюго иотсициз ла ло 0 к<В реп>стрировали входящий !.. ь-ток, т.е.
ток чсрсз 1-тии Са -каналов <С2<ч и л юг< поздние токи !< (>ок «СЗэ). Посл< ок<н>чш>ия илшульсз злеьтриче- 15 6. Оригинальная кривая изменения тока через мембрану, егисгрированная ог аенгрикулярного миоцита мыши а коиценции ы«Ые-се!1 (ло Кавыл А. Кые1еха 1, >вельег9 О. 5!>а<сика!еа с«вел! >л тел!лов>аг вуосу!еа: авр>1!сае ала аллу<«воров!с а!а всгеаке и>В Иурег!горлу Сал»о«акса>аг >Эеа. 2000, 46, 409 —. 420) ГЛАВА 15. Исследования Вопросы дпя повторения Резюме ск<ио тока внош рсгистриров!(и< полное отсутствие гока через мембрану «Сй!«.
Конфи гу)щция ууЬО1с -сс П иозволщ"г сфорл<ировать лругук> ко<>фигу!хишк> оигьк1с.ои! ра(сЬ (рнг. 1б.б), д). Медлснцо«п гяпнщщц щцнтки от к.цтки за<">валяет мембрану 1юстягнвагься ло гсх нор, нека нна ие о)д<- лится сп кн-гки и ис со>вьется. !'Сверь сс внутренняя чиоть булс! к(нгщктировать с раствором В ииист3нч 3 внсицшя с омывакяцим раствором в цсрфузиоиной щ!Ки:рс. 5)31 ко<5<!и<гурации иснО.<ь;<уется для изучения вклада соединений в<к иик й с!)еды клетки в активи<к"и <3(НИН'!Н<ЛХ К;Ц<1>ЛОВ. Именно м< годом рз(с!>.с!ашр в раегшчиь<х коифшурациях были иолу и ны осиовиь<с рсзуль<аты, соязанныс с цзуч< и Нем ионн ь<х токов, текущих через мсмбраиу целой клс < ки, и ионных токов, текущих через ноииые каналы. Выли изучеиы н классифнцн!к>вавы почти исе иониьи кан!щи и<э<бран ирак>я<чески всех клс)ок органов н ткангй >«иных органнзх<О>5.
?)тол<у вопр<>су нсювящас>ся слсдуницая <лава. !. Мгп>л фиксации оопинивла из «нитках >ззклнюзется в )он<, что мембранный шнсицизл рсгистрируг<ся микро- СК1ЕНТРОЛОМ И ИОД!Ш)('Я ИЗ УСИ>И1'П'ЛЬ ИЗИРЯ>НСН<3Я С ИО- лнявьн» .лскгроинои глсмы с обратной связьн> его мох<но д, ипельиое вреыя фикси рова гь (или ио)щср>ки вать) иа як>- бом у(юане иу и и <цх>и)скшшя пи<а и рш в > орой мокр<иле «- грод.
теппжсу лпп оотщшигш также иазывагггя ооллс(вки- ппазматической мембраны клеток методом ра1сц-о!агпр "2<вес <мемым (Ьо!с!<ий ро1ин!а1) ! !Ри помо>ии гсис!мгорз ирямо у>ольных имну)ыов.иск<ричгско<о >ока нз м<мбрзис <к>длсрлонысмий иопииша Нож<в смещ < гь.<о ис«шорой иом>й величины и улсрживзть из:пом урошю тзкжс с >ижнииью .иск<ров>нгй см ми г обр:Наш гщиыо.
2. Раиштие мстолз фиксации ион ишы.>а зак)н> истся в рззрзбогкс Не<оса анализа к.н ток 1!ср<!>у шоииу<о «оиру рлще <ям ! и,< два мп г«з 35 3« рс! о<н>лм есть кошмы ког ог>н рстие, рззмс ры которого соотж" и-гвунп размерам и)уча( мой нле)ки н к которому она иолволит<я. Резкое созлшис в нижнемм отст кс о три цв гол ьво го дав и н ия разрывает час <ъ ыс мб1>з. ии, находя щук« я со с < оров и зп>го <пс< кз. Таким обрз юм, с сивой < торопи ипмторолки изхоли) ся вш ииыя чаг) ь мсыбраии. з с лруыщ внутренняя. У кажлого опска ес>ь автовом иая система иерф)зии и злектрошн>-и.>мерительная схема.
сь мс<ол ра(< Ь-с1ав>р ио<5<и<<яет реги(трировагь на изолировзииыл клетках их иотсициалы, соки или олииочиыс <ншиьн каналы и(х рсдсгвом специальной стекзяииои ниц< тки (ра(сЬ ишн"и и) Кром< пно. ме>ол Но<в<мист рггис)рировзть нониь<с кзинлы г изолироваииоп> кусо >кз мсмбраии. которьш )н>кстбитьрасиоломки иоотновкиин> котгнрспно и',и>е<ки лв(ю нве>виси, шбо виу>рснисй с) ороиой. 1 Как говсршсиствовалигь мс)олы фиксации иогтмшивла ирин!сиитсльио к лл( ткач? 2 Пс(х числите принципы исглсловзиия ионвих токов у ин)лирова<шых клсгон ме)одом рз<сЬ-с1н<вр.
З Какие коифигураш>и ра(гЬ с!шир вы зиаще и что они иозв<>лаю с делать? лй Что такое исрфора)нвиый рщсй> ИОННЫЕ КАНАЛЫ И ТОКИ ЧЕРЕЗ НИХ ГЛАВА В главе рассматриваются токи, зарегистрированные методом ра(с(7-с(агпр в конфигурации и<(чо(всей, н токи через различные типы одиночных ионных каналов, относящихся к потенциалуправляемым, лигандуправляемым и механоуправляемым. Вел ковая ггруктура каца:и уп" <ки, ч< рез ко горую н состояиии покоя клетки <жунп ствлясгся нь(ход ионов К и ихол шпи)в (ч<3, ис определена. Олизко;)ту структуру иззвали калий.иатрисвым кзн;шом утечки.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
