Диссертация (1335938), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Статистические методыПолученныерезультатыподвергалисьстатистическойобработкесвычислением средней арифметической (М) и стандартной ошибки средней(m). Достоверность различий сравниваемых параметроварифметическойрассчитываласьсиспользованиемнормированного отклонения Zсчитались значимыми при р<критерияСтьюдента,величиныи F – распределения вероятности. Различия0,05.
Расчет производился с использованиемпакета статистических программ “STATISTICA 6.0”.Частотыподсчетом.встречаемостиОценкааллелейотклоненияигенотиповраспределенийопределялигенотиповпрямымизученныхполиморфизмов ДНК от канонического распределения Харди-Вайнберга и анализассоциативных связей внутри генотипических сочетаний, а также оценку степениразличий в частоте встречаемости аллелей, генотипов и межгенных комбинациймежду исследуемыми группами проводили с помощью точного критерия Фишера.89Расчет показателя отношения шансов (OR – odds ratio) с 95% доверительныминтервалом (CI – confidence interval) и р-значения проводилась с помощьюонлайн-калькулятора, доступного по ссылке: http://ihg.gsf.de/cgi-bin/hw/hwa1.pl.90Глава 3РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ДНКПАЦИЕНТОВ СИБИРСКОГО РЕГИОНА3.1.
Результаты молекулярно-генетического анализа ДНК пациентовСибирского региона, перенесших острое нарушение мозговогокровообращенияПослепроведениямолекулярно-генетическоготестированиячастотывстречаемости генотипов по редким аллелям изучаемых генов определеныпрямым подсчетом в соответствии с разделением на клинические группы –пациенты с острым нарушением мозгового кровообращения по ишемическомутипу (ИИ), а также контрольная группа.
Распределения аллелей всех геновсоответствуют равновесию Харди-Вайнберга, р>0,1.При рассмотрении распределенийчастот встречаемости генотипов,обращает внимание большее число пациентов с гомозиготным генотипом поредкому аллелю Т гена MnSOD в группе контроля, 29,7%, против 22,1% средипациентов с ИИ.
Однако для гетерозиготных генотипов отмечена обратнаятенденция – в группе с ИИ его носителей больше на 4,1%.Также, для редкого аллеля Т гена HIF1a выявлено большее количествоносителей гетерозиготного генотипа в группе с ИИ, чем в контрольной группе,18,6% против 10,5%, соответственно. Частоты встречаемости гомозиготногогенотипа между группами не различаются.Для частот встречаемости генотипов прочих рассмотренных генов – GPX,p22phox, BDNF, ApoE – значимых отличий обнаружено не было, разница междугруппами составляет не более 2-3% во всех случаях. Распределение частотвстречаемости генотипов по изученным полиморфным вариантам в каждойгруппе в процентных соотношениях представлено в таблице 10.91Таблица 10 - Частота встречаемости генотипов полиморфных аллелей в группахисследованияГенотипИИ(%)TTCTССTTCTССTTCT22,153,124,814,445,939,712,540,5СС47,0РаспределРаспределениеениеКонтрольХардиХардинаяВайнбергаВайнбергагруппа, (χ², (χ²(%)Пирсона,Пирсона,df=1), рdf=1), р29,749,00.3864180.89627721,313,00.7899680.82102844,642,410,841,20.6492960.20852748,0HIF1a C1772Tгипоксияиндуцированный фактор1аTTCT0,718,60,610,5СС80,788,9BDNF G196Тнейротрофическийфактор мозгаТТGТ55,537,757,236,8GG6,8ГеныMnSOD C47TмарганцеваясупероксиддисмутазаGPX-1 C599Tглютатионпероксидаза-1P22phox C242Tцитохром b-245, альфаполипептид1.0000000.7486170.3066211.0000006,0Ɛ2/Ɛ20,80,7Ɛ2/Ɛ311,113,40.270897*ApoE Ɛ2/Ɛ3/Ɛ4Ɛ2/Ɛ42,10,7аполипопротеин ЕиƐ3/Ɛ368,066,50.696571**Ɛ3/Ɛ416,817,4Ɛ4/Ɛ41,21,3* - распределение относительно полиморфного аллеля Ɛ2** - распределение относительно полиморфного аллеля Ɛ40.601222*и0.657790**92Необходимо отметить, что для гена АроЕ характерны 2 однонуклеотидныезамены, которые формируют 3 возможных полиморфных аллеля - Ɛ2, Ɛ3, Ɛ4.Соответственно распределению аллелей существует 6 вариантов генотипа пополиморфным вариантам АроЕ, как показано в таблице 4.
Генотип Ɛ3/Ɛ3 –условно дикий тип, Ɛ2 и Ɛ4 – полиморфные аллели.Данные частоты встречаемости генотипов по аллельным вариантамподвергнуты статистической обработке с вычислением отношения шансов (oddsratio, OR), доверительных интервалов, значения р, критерия χ2. Приведенырезультаты статистической обработки данных с указанием полиморфныхвариантов, достоверно влияющих на риск развития ишемического инсульта.3.2. Взаимосвязь риска развития ОНМК с полиморфизмами генов системыперекисного окисления липидовС целью определения полиморфных вариантов, достоверно влияющих нариск развития ишемического инсульта, частоты генотипов изучаемых генов былипопарно проанализированы в группах ИИ и здоровых лиц.Присравнительноманализераспределенияредкогоаллелягенаглютатионпероксидазы MnSOD выявлена тенденция к развитию протективногоэффекта у его носителей, риск инсульта у его гомо- и гетерозиготных носителей, атакже общий риск снижен от 0,641 до 0,822, соответственно.
Однако,статистически значимых различий не обнаружено, уровень значимости р>0,05,что не позволяет рассматривать MnSOD как достоверный диагностическиймаркер. Результаты статистического анализа представлены в таблице 11.Таблица 11 - Результаты статистического анализа частоты встречаемостиполиморфизма MnSOD C47TMnSODАллель[С]<->[Т]Гетерозигота[СС]<->[СТ]Аллель ТГомозигота[СС+]<>[ТТ]Носительство аллеля[СС]<-Общий рискдля аллеляТ93Odds_ratio=0.
Odds_ratio=0.802932C.I.=[0.625C.I.=[0.5991.028]1.449]chi2=3.05chi2=0.10p=0.08080 (P) p=0.75507Аллель[Т]<->[С]Гетерозигота[ТТ]<->[СТ]Odds_ratio=1. Odds_ratio=1.248454C.I.=[0.973C.I.=[0.9511.599]2.225]chi2=3.05chi2=2.99p=0.08080 (P) p=0.08368>[СТ+ТТ]Odds_ratio=0.
Odds_ratio=0.Odds_ratio=0.641822799C.I.=[0.387C.I.=[0.5421.062]1.248]chi2=3.12chi2=3.00chi2=0.85p=0.07737p=0.08349p=0.35770Аллель СНосительстОбщий рискГомозиготаво аллелядля аллеля[ТТ]<->[СС] [СС+СТ]<С>[ТТ]Odds_ratio=1. Odds_ratio=1.Odds_ratio=1.560486252C.I.=[0.942C.I.=[0.9942.585]2.223]chi2=3.12chi2=3.00chi2=3.75p=0.07737p=0.08349p=0.05294При сравнении частот встречаемости полиморфных аллелей генов GPX-1 иp22phox статистически значимых различий не обнаружено.
Распределениеотносительно риска ишемического инсульта близко к единице во всех случаях,уровень значимости р более 0,1. Таким образом, коррелятивных связейносительства редких аллелей генов GPX-1 и p22phox и риска развитияишемического инсульта не выявлено. Результаты статистического анализапредставлены в таблицах 12 и 13.Таблица 12 - Результаты статистического анализа частоты встречаемостиполиморфизма GPX-1 C599TАллель ТАллельGP[С]<->[Т]XГетерозигота Гомозигота[СС]<->[СТ] [СС+]<>[ТТ]Носительств Общий риско аллелядля аллеля Т[СС]<>[СТ+ТТ]94Odds_ratio=1.092C.I.=[0.7681.551]chi2=0.24p=0.62453 (P)Аллель САллель[Т]<->[С]Odds_ratio=1.100C.I.=[0.6591.837]chi2=0.13p=0.71420Odds_ratio=1.179C.I.=[0.5582.492]chi2=0.19p=0.66622Odds_ratio=1.118C.I.=[0.6901.813]chi2=0.21p=0.65031Odds_ratio=1.088Носительство аллеля[СС+СТ]<>[ТТ]Odds_ratio=0.
Odds_ratio=0. Odds_ratio=0. Odds_ratio=0.916933848892C.I.=[0.645C.I.=[0.445C.I.=[0.401C.I.=[0.4431.301]1.960]1.793]1.795]chi2=0.24chi2=0.03chi2=0.19chi2=0.10p=0.62453 (P) p=0.85552p=0.66622p=0.74847Общий рискдля аллеляСГетерозигота Гомозигота[ТТ]<->[СТ] [ТТ]<->[СС]chi2=0.23p=0.62808Odds_ratio=0.919chi2=0.23p=0.62808Таблица 13 - Результаты статистического анализа частоты встречаемостиполиморфизма р22phox C242TАллель ТАллель[С]<->[Т]Носительство аллеля[СС]<>[СТ+ТТ]Odds_ratio=1. Odds_ratio=1. Odds_ratio=1.
Odds_ratio=1.007185044066C.I.=[0.753C.I.=[0.619C.I.=[0.555C.I.=[0.661p22ph1.508]1.638]2.531]1.649]oxchi2=0.13chi2=0.00chi2=0.19chi2=0.03p=0.71808 (P p=0.97848p=0.65985p=0.85421)Аллель САллель[Т]<->[С]Гетерозигот Гомозиготаа[СС+]<[СС]<->[СТ] >[ТТ]Гетерозигота[ТТ]<->[СТ]Гомозигота Носительст[ТТ]<->[СС] во аллеля[СС+СТ]<>[ТТ]Общий рискдля аллеляТOdds_ratio=1.073chi2=0.12p=0.72711Общий рискдля аллеляС95Odds_ratio=0.938C.I.=[0.6631.327]chi2=0.13p=0.71808 (P)Odds_ratio=0.849C.I.=[0.3931.834]chi2=0.17p=0.67719Odds_ratio=0.844C.I.=[0.3951.801]chi2=0.19p=0.65985Odds_ratio=0.846C.I.=[0.4101.746]chi2=0.20p=0.65090Odds_ratio=0.933chi2=0.12p=0.72711В результате статистического анализа частоты встречаемости показано, чтоносительство полиморфного аллеля Т гена HIF1a статистически значимоувеличивает риск развития ишемического инсульта с OR=1,603, p=0,01058.
Длягетерозиготных носителей аллеля Т риск развития ишемического инсульта выше в1,952 раза (p=0,00460), а для гетеро- и гомозигот по редкому аллелю ТТ – в 1,922(p=0,00474) раза по сравнению с обладателями дикого генотипа СС. Значениеобщего риска для данного аллеля составляет OR=1,702, р=0,00711, что указываетна наличие коррелятивных связей полиморфного варианта гена HIF1a и высокогориска развития ишемического инсульта. Результаты статистического анализапредставлены в таблице 14.Таблица 14 - Результаты статистического анализа частоты встречаемостиполиморфизма С1772Т HIF1aАллель ТАллель[С]<->[Т]HI Odds_ratio=1.F 800C.I.=[1.1702.767]chi2=7.32p=0.00680 (P)Аллель СГетерозигота Гомозигота[СС]<->[СТ] [СС+]<>[ТТ]Odds_ratio=1.952C.I.=[1.2223.117]chi2=8.03p=0.00460Odds_ratio=1.394C.I.=[0.1959.977]chi2=0.11p=0.73944Носительство аллеля[СС]<>[СТ+ТТ]Odds_ratio=1.922C.I.=[1.2153.040]chi2=7.98p=0.00474Общий рискдля аллеля ТOdds_ratio=1.702chi2=7.25p=0.0071196Аллель[Т]<->[С]Гетерозигота Гомозигота[ТТ]<->[СТ] [ТТ]<->[СС]Odds_ratio=0.556C.I.=[0.3610.855]chi2=7.32p=0.00680 (P)Odds_ratio=1.400C.I.=[0.18810.421]chi2=0.11p=0.74150Odds_ratio=0.717C.I.=[0.1005.132]chi2=0.11p=0.73944Носительство аллеля[СС+СТ]<>[ТТ]Odds_ratio=0.789C.I.=[0.1105.640]chi2=0.06p=0.81302Общий рискдля аллеля СOdds_ratio=0.581chi2=7.25p=0.00711При сравнении частот встречаемости полиморфных аллелей гена BDNFстатистически значимых различий не обнаружено.
Распределение относительнориска ишемического инсульта близко к единице во всех случаях, уровеньзначимости р более 0,1. Таким образом, коррелятивных связей носительстваредкого аллеля Т гена BDNF и риска развития ишемического инсульта невыявлено. Результаты статистического анализа представлены в таблице 15.Таблица 15 - Результаты статистического анализа частоты встречаемостиполиморфизма BDNF G196ТАллель ТАллель[G]<->[Т]BDNFГетерозигот Гомозиготаа[GG+]<[GG]<->[GТ] >[ТТ]Носительство аллеля[GG]<>[GТ+ТТ]Odds_ratio=0. Odds_ratio=0. Odds_ratio=0.
Odds_ratio=0.937900855873C.I.=[0.688C.I.=[0.397C.I.=[0.385C.I.=[0.3991.898]1.907]1.275]2.039]chi2=0.17chi2=0.06chi2=0.15chi2=0.12p=0.67674 (P) p=0.80054p=0.69986p=0.73246Аллель GАллельГетерозигот Гомозигота Носительств[T]<->[G]а[TT]<->[GG] о аллеля[TT]<->[GТ][GG+GT]<-Общий рискдля аллеляТOdds_ratio=0.933chi2=0.17p=0.67843Общий рискдля аллеляG97>[ТТ]Odds_ratio=1. Odds_ratio=1. Odds_ratio=1. Odds_ratio=1.068053170069C.I.=[0.527C.I.=[0.732C.I.=[0.785C.I.=[0.7081.453]1.565]2.597]1.562]chi2=0.17chi2=0.06chi2=0.15chi2=0.12p=0.67674 (P) p=0.79995p=0.69986p=0.72997Odds_ratio=1.072chi2=0.17p=0.67843Ввиду наличия в гене АроЕ трех полиморфных аллелей – Ɛ2, Ɛ3 и Ɛ4, былпроведен двухступенчатый анализ частот встречаемости генотипов по этималлелям относительно Ɛ2 и Ɛ4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
