Диссертация (1174350), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Приэтом необходимо отметить, что наблюдаемые эффекты были достигнутыпри использовании оригинального способа местной доставки лекарственногосредства при низкой используемой дозе и однократном применении действующеговещества.3.2 Механическая прочность послеоперационного рубцапри подавлении активности р38 МАР-киназыИсследование механических свойств рубцов на экспериментальной моделиметодом тензиометрии показало, что при низких нагрузках поведение образцовсоответствовало закону Гука: деформирующая сила и величина деформации былипропорциональны между собой.
То есть при данных нагрузках образцыдемонстрировалиповедение,соответствующееповедениюупругоготела.При больших нагрузках наблюдался переход упругой деформации в пластическую.Выявлено, что точка перехода упругой деформации в пластическую в срок7 суток после моделирования раны у экспериментальных животных значительноснижалась, по сравнению с интактной кожей. В дальнейшем наблюдалосьпостепенное повышение этого показателя.При этом на 30-е сутки в группе животных, которым в рану вводилиблокаторр38,чем в группеданныйконтроля(р = 0,0016) (Рисунок 14).показатель–былсоответственно,статистически8417 ± 503значимоивыше,5623 ± 164 кПа45Рисунок 14 – Точка перехода упругой деформациив пластическую деформациюРазрушающая нагрузка, измеренная как отношение силы, приведшейк разрушению образца, к площади поперечного сечения образца, для интактнойкожи превышала 12 МПа.
Эта величина была значительно ниже у животныхэкспериментальных групп в ранние сроки заживления раны и постепенноповышалась по мере созревания образующегося рубца.Так, на 7-е сутки после моделирования в контрольной группе разрушающаянагрузка составила 2758 ± 1466 кПа, в группе с блокадой р38 – 3687 ± 899 кПа(Рисунок 15).46Boxplot by GroupVariable: Break, kPaInclude condition: Day=75000Break, kPa40003000200010000Controlp38GroupMedian25%-75%Min-MaxРисунок 15 – Предел прочности образцов на 7-е сутки, кПаНа 14-е сутки прочность исследуемых образцов увеличилась.
В контрольнойгруппе она составила 4896 ± 768 кПа, в группе с введением блокатора р38 –5175 ± 952 кПа. Показатели статистически не различались (Рисунок 16).7000Boxplot by GroupVariable: Break, kPaInclude condition: Day=146000Break, kPa500040003000200010000Controlp38GroupРисунок 16 – Предел прочности образцов на 14-е сутки, кПаMedian25%-75%Min-Max47К 30-м суткам прочность образцов достигала максимума за весь периоднаблюдений. Причём в группе с введением блокатора р38 она была статистическизначимо выше, чем в контроле – 9130 ± 341 и 7872 ± 237 кПа (р < 0,05)(Рисунок 17).Предел прочности кожи (30 сут)10000kPa80006000400020000Controlp38ГруппаMedian25%-75%Min-MaxРисунок 17 – Предел прочности образцов на 30-е сутки, кПаДинамика прочности исследуемых образцов представлена на рисунке 18.48Рисунок 18 – Предел прочности образцов, кПаТаким образом, наши исследования по изучению механических свойстврубца показали, что местная блокада р38 MAP-киназного сигнального каскадаприводиткзначительномуизменениюмеханическихсвойстврубца,образующегося на месте хирургической кожно-мышечной раны.Локальное действие ингибитора р38 МАРК позволяет к 30-м суткамраневого процесса добиться образования рубца, при котором механическиесвойства образца тканей в его области (разрушающая нагрузка и точка переходаупругой деформации в пластическую деформацию) сильнее приближаютсяк показателям интактной кожи, чем в контроле.3.3 Оценка синтеза коллагена при формированиипослеоперационного рубца на фоне снижения активности р38 MAP-киназыКак известно, оценка синтетической активности фибробластов проводится попродукции ими специфического белка – коллагена.
Нами изучена способность49фибробластов синтезировать коллаген в зоне образования послеоперационногорубца в фибробластическую фазу воспаления. Исследования проводилисьна гистологических препаратах, окрашенных по Ван Гизону, при этом оцениваласьотносительная площадь, занимаемая коллагеновыми волокнами [32].Установлено, что у животных контрольной группы относительная площадь,занятая волокнами коллагена в зоне послеоперационной раны, закономерновозрастала от 3 до 30 суток, достигала максимальных значений к 30-м суткам –73,54 [66,87–78,01] % (Рисунки 19, 20, 21).Рисунок 19 – Контрольная группа, 3-и сутки.Коллагенообразование в области раны.Окраска по Ван Гизону50Рисунок 20 – Контрольная группа, 30-е сутки.Плотно упакованные волокна коллагена в зоне послеоперационного рубца.Окраска по Ван Гизону51Boxplot by GroupVariable: Scar_pcntInclude condition: v2="control"1009080Scar_pcnt7060504030201003d7d14d30dMedian25%-75%Min-MaxTime_seriesРисунок 21 – Контрольная группа, динамика количестваколлагеновых волокон в зоне формирования послеоперационного рубцаПри этом в интактной дерме изменений не наблюдалось (Рисунок 22).Boxplot by GroupVariable: Derma_intact_pcntInclude condition: v2="control"85Derma_intact_pcnt80757065605550453d7d14d30dTime_seriesРисунок 22 – Контрольная группа, динамика количестваколлагеновых волокон в интактной дермеMedian25%-75%Min-Max52В дерме рядом с травматическим повреждением плотность коллагеновыхволокон статистически значимо повышалась на 14-е сутки (p = 0,029)(Рисунок 23).Boxplot by GroupVariable: Derma_near_scar_pcntInclude condition: v2="control"90Derma_near_scar_pcnt858075706560555045403d7d14d30dTime_seriesMedian25%-75%Min-MaxРисунок 23 – Контрольная группа, динамика количестваколлагеновых волокон в зоне, прилегающей к зоне формированияпослеоперационного рубцаЛокальноеприменениеблокаторар38SB 203580приводилок существенному снижению коллагенообразования в зоне формирующегосяпослеоперационного рубца.
В течение всего срока наблюдения – от 3-х до 30-хсуток отмечалось статистически значимое снижение коллагенообразованияв сравнении с группой контроля (Таблица 2).53Таблица 2 – Количество коллагеновых волокон в зоне формирующегося рубца приподавлении активности р38 МАР-киназыСрокКонтрольная группаMe25% кв. 75% кв.Введение SB 203580Me25% кв. 75% кв.Zp3-и сутки11,578,5327,854,530,899,812,490,0110007-е сутки25,2115,6136,921,781,092,805,200,00000114-е сутки55,4141,1074,3831,5423,1540,244,490,00000730-е сутки73,5466,8778,0143,6041,0560,153,140,001700Так, на 3-и сутки коллагенообразование в области раны практическиотсутствовало (Рисунок 24).Рисунок 24 – Группа с блокадой р38 МАР-киназного каскада, 3-и сутки.Резко сниженное коллагенообразование в области раны.
Окраска по Ван Гизону54В итоге к концу наблюдения (30-е сутки) у животных с введением SB 203580количество коллагеновых волокон в ране было практически в 2 раза ниже, чем вконтроле (43,6 [41,05–60,15] в группе SB 203580, по сравнению с 73,54 [66,87–78,01] в группе контроля; р = 0,0017) (Рисунок 25).Рисунок 25 – Группа с блокадой р38 МАР-киназного каскада, 30-е сутки.Низкая плотность коллагеновых волокон в области послеоперационного рубца.Окраска по Ван ГизонуУказаннаядинамикасинтезаколлагенапослеоперационного рубца представлена на рисунке 26.взонеобразования55Boxplot by GroupVariable: Scar_pcntInclude condition: v2="p38"807060Scar_pcnt50403020100-103d7d14dMedian25%-75%Min-Max30dTime_seriesРисунок 26 – Группа с блокадой р38 МАР-киназного каскада, динамика количестваколлагеновых волокон в зоне формирования послеоперационного рубцаВ интактной дерме количество коллагена при применении блокатора р38в сроки 3, 7 и 14 суток статистически значимо отставало от такового в контрольнойгруппе, к 30-м суткам различия нивелировались (Таблица 3, Рисунок 27).Таблица 3 – Количество коллагеновых волокон в интактной дермеСрокКонтрольная группаMe25% кв.
75% кв.Введение SB 203580Me25% кв. 75% кв.ZP3-и сутки56,4255,3665,6847,2446,0447,632,810,0037-е сутки62,3758,2066,8849,5235,0762,271,890,06214-е сутки65,4760,8370,9455,7449,0566,632,700,00530-е сутки58,4455,8861,7959,2051,3663,460,190,8956Boxplot by GroupVariable: Derma_intact_pcntInclude condition: v2="p38"80Derma_intact_pcnt706050403020103d7d14d30dTime_seriesMedian25%-75%Min-MaxРисунок 27 – Группа с блокадой р38 МАР-киназного каскада, динамикаколичества коллагеновых волокон в интактной дермеВ зоне, прилегающей к зоне травматического повреждения, у животныхгруппы с применением блокатора р38 наблюдалось нарастание количестваколлагена в динамике от 3-х к 30-м суткам (Рисунок 28).При этом на 3-и и 14-е сутки показатель был статистически значимоснижен, по сравнению с контрольной группой.
Различия нивелировались к 30м суткам (Таблица 4).57Boxplot by GroupVariable: Derma_near_scar_pcntInclude condition: v2="p38"90Derma_near_scar_pcnt807060504030203d7d14dMedian25%-75%Min-Max30dTime_seriesРисунок 28 – Группа с блокадой р38 МАР-киназного каскада,динамика количества коллагеновых волокон в зоне, прилегающейк зоне формирования рубцаТаблица 4 – Количество коллагеновых волокон в дерме в зоне, прилегающей к зонетравматического поврежденияСрокКонтрольная группаВведение SB 203580ZP55,923,460,0001445,2363,471,690,09761,0851,1475,332,880,00367,5157,3171,190,860,425Me25% кв.75% кв.Me25% кв.75% кв.3-и сутки67,6765,1474,7651,0046,897-е сутки65,9364,4370,8154,3314-е сутки75,3372,8579,7030-е сутки68,4463,3874,70Таким образом, локальное подавление активности р38 MAP-киназы снижаетсинтетическуюактивностьпослеоперационного рубца.фибробластоввзонеформирования583.4 Влияние блокатора р38 МАР-киназы на дифференцировкуфибробластов в зоне формирования послеоперационного рубцаНами изучено влияние локального введения ингибитора р38 МАРКна дифференцировку фибробластов в зоне формирования послеоперационногорубца.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
