Диссертация (1174327), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Точкой обозначены выбросы – значения, которые больше 3гоквартиля или меньше 1го на 1,5*ИКР; где ИКР – расстояние между 1м и 3мквартилем. * - p < 0,05, для несвязаннаых выборок по U критерию Манна-Уитни.54В образцах, взятых через 48 часов после ишемического воздействия, гораздобольше дифференциально экспрессирующихся мкРНК – 34 (p < 0,05; U-test)(Таблица 1). При этом, по сравнению с ложнооперированными животными,экспрессия большинства этих мкРНК повышается в 1,3–2 раза, а для мкРНК let-7f5p, miR-30a-3p, miR-21-5p и miR-223-3p – от 3,8 до 10,2 раз. По сравнению с 24-хчасовой точкой, уровень экспрессии let-7f-5p и miR-21-5p увеличен соответственнов 1,6 и 2,1 раза, а miR-27a-5p снизился в 1,5 раза.
Тем самым экспрессия miR-27a5p через 48 часов после инсульта уже статистически не значимо отличалась отконтрольной выборки (p = 0,064).Таблица 1. Дифференциально экспрессирующиеся мкРНК в ткани левогополушария головного мозга крыс через 48 часов после ишемическоговоздействия.мкРНКр, U-testКИмкРНКр, U-testКИmiR-30c-2-3p0,0021,605miR-99a-3p0,0152,027miR-125b-5p0,0411,615miR-221-3p0,0022,062miR-300-5p0,0081,659miR-27b-3p0,0022,099miR-107-3p0,0041,667miR-24-3p0,0022,103miR-497-5p0,0081,703miR-22-5p0,0152,120miR-27a-3p0,0021,719miR-29a-5p0,0022,123miR-30b-3p0,0151,722miR-186-5p0,0022,312miR-29c-3p0,0021,736miR-99a-5p0,0082,342miR-124-3p0,0081,752miR-128-3p0,0022,386miR-330-5p0,0021,764miR-23a-3p0,0022,686miR-181b-5p0,0041,785miR-376b-5p0,0042,711miR-29a-3p0,0021,823miR-30c-5p0,0252,756let-7i-3p0,0081,860miR-9a-5p0,0042,951miR-22-3p0,0041,892let-7f-5p0,0043,862let-7i-5p0,0081,935miR-30a-3p0,0046,060miR-212-3p0,0151,938miR-21-5p0,0026,704miR-26-a5p0,0022,000miR-223-3p0,02510,20455Статистически значимое изменеие экспрессии (в основном увеличение)наблюдалось у 26 мкРНК в коре левого полушария крыс через 48 часов послефотохимически индуцированного тромбоза по сравнению с 24 часовой точкой.Ни через 24 часа, ни через 48 часов после ишемии не обнаружено измененийв экспрессии miR-30a-5p, miR-138-5p, miR-29b-3p, miR-29c-5p, miR- 92b-3p miR30c-1-3p, miR-551b-3p и let-7c-5p в коре левого полушария головного мозга.Используя метод двумерного иерархического кластерирования, былапроведена кластеризацию экспрессии мкРНК в образцах ткани левого полушарияголовного мозга крыс (через 24 и 48 часов после ишемического воздействия), атакже контрольной выборки (Рисунок 8).
Образцы ткани ложнооперированныхкрыс-самцов составили отдельный кластер, а образцы ткани крыс, подвергнутыхишемическому воздействию, в основном распределились по двум кластерам (24 и48 часов). Некоторые образцы, относящиеся к одному временному периоду, попалив кластер с образцами другого временного периода, а часть образцов не попала нив один кластер, что, по-видимому, связано с индивидуальными особенностямиответа на ишемию у разных особей.56-0,760,220,79-0,900,9Рисунок 8. Сравнительный анализ экспрессии мкРНК в зоне пенумбра левогополушария головного мозга крыс в остром периоде ишемического инсульта 24 и48 часов, а также контрольной выборки.
Названия мкРНК указаны справа.Идентификатор каждой крысы указан внизу, первая буква обозначает пол (f –самки, m – самцы), далее идет порядковый номер, в конце указанапринадлежность к одной из трех групп (sham – ложнооперированные, 24h –крысы с ишемией через 24 часа, 48h – крысы с ишемией через 48 часов). Группытакже обозначены цветом вверху под дендрограммой: ложнооперированныекрысы – зеленым цветом, с ишемией через 24 часа – желтым, с ишемией через 48часов – фиолетовым.
Шкалы коэффициентов корреляции по Пирсону дляобразцов мозга крыс (вверху), для мкРНК (слева). Цветовая (красно-синяя) шкаласоответствует логарифмированному по основанию 2 и центрированномупреобразованию уровней экспрессии мкРНК. Красная окраска соответствуетповышенной экспрессии (гиперэкспрессии) мкРНК, синяя сниженнойэкспрессии (гипоэкспрессии) относительно среднего значения по используемойвыборке данных.СравнительныйанализэкспрессиимкРНКвтканиправого(неишемизированного) полушария головного мозга крыс показал, что в группахэкспериментальных животных через 24 и 48 часов после фотохимически57индуцированного тромбоза экспрессии 36 из 45 исследованных мкРНКразличаются более чем в 1,5 раза. Среди них, в образцах, взятых через 24 часа послеишемии, идентифицировано 9 мкРНК, экспрессия которых изменялась в пределах1,5–17,9 раз по сравнению с ложнооперированными животными.
Однако, толькочетыре из них имели статистически значимые отличия: miR-200b-3p (КИ = 4,81),miR-181b-5p (КИ = 1,91), let-7f-5p (КИ = 3,62) и miR-27a-5p (КИ = 2,93). При этом,хотя экспрессия miR-92b-3p статистически значимо отличалась в группе крыс сишемией по сравнению с контрольной выборкой, но медиана значения экспрессииданной мкРНК отличалась только в 1,19 раз.В образцах, взятых через 48 часа после ишемического воздействия, гораздобольше дифференциально экспрессирующихся мкРНК – 38 (p < 0,05; U-test)(Таблица 2).
По сравнению с 24-х часовой точкой, уровни экспрессия miR-200b-3pи miR-92b-3p уменьшилась соответственно в 2,9 и 1,12 раза, тем самым экспрессияэтих мкРНК через 48 часов после инсульта уже статистически не значимоотличалась от контрольной выборки.Статистически значимое изменеие экспрессии (в основном увеличение)наблюдалось у 21 мкРНК в коре правого полушария крыс через 48 часов послефотохимически индуцированного тромбоза по сравнению с 24 часовой точкой.58Таблица 2. Дифференциально экспрессирующиеся мкРНК в ткани правогополушария головного мозга крыс через 48 часов после ишемическоговоздействия.мкРНКр, U-test КИмкРНКр, U-test КИmiR-124-3p0,0021,326miR-29a-3p0,0091,442miR-29c-3p0,0021,413miR-551b-3p0,0091,575miR-29c-5p0,0021,937miR-212-3p0,0091,875let-7i-3p0,0022,305miR-24-3p0,0091,721let-7i-5p0,0022,15miR-27b-3p0,0091,882miR-181b-5p0,0021,91miR-138-5p0,0151,517miR-330-5p0,0022,189miR-26a-5p0,0151,619miR-99a-5p0,0022,109miR-29a-5p0,0151,865let-7f-5p0,0026,368miR-9a-5p0,0151,86miR-107-3p0,0025,714miR-30a-5p0,0151,309miR-21-5p0,0022,392miR-125b-5p0,0261,234miR-27a-3p0,0041,475miR-22-5p0,0262,098miR-129-5p0,0041,811miR-23a-3p0,0261,942miR-186-5p0,0042,227miR-30c-5p0,0412,162miR-22-3p0,0041,759miR-376b-5p0,0412,075miR-300-5p0,0042,056miR-497-5p0,0411,696miR-27a-5p0,0042,625miR-376b-5p0,0412,075miR-300-5p0,0042,056miR-128-3p0,0041,643.2 Дифференциальная экспрессия мкРНК в лейкоцитах периферическойкрови крыс, подвергшихся фотохимически индуцированного тромбозуОценку экспрессии мкРНК в лейкоцитах переферической крови крысосуществляли только в группах животных, подвергшихся ишемическомувоздействию.
Кровь брали у крыс до и через 24/48 часов после фотохимическииндуцированного тромбоза. В крови крыс до фотохимически индуцированного59тромбоза не было обнаружено статистически значимых различий в экспрессиимкРНК между группами 24 и 48 часов. При анализе уровней экспрессии мкРНКбыли выявлены изменения в их значениях у 25 мкРНК через 24 часа после ишемии(1,5 < КИ < 8,0) и у 26 – через 48 часов (1,5 < КИ < 9,0). При этом, у ряда мкРНК,экспрессия которых не изменялась через 24 часа после ишемии, определеноувеличение экспрессии через 48 часов.
К таким мкРНК относятся let-7i-3p, miR23a-3р, miR-27a-5p, miR-29a-5p, miR-29c-5p, miR-124-3p, miR-125b-5p и miR-2123p. Напротив, семь мкРНК перестали дифференциально экспрессироваться через48 часов: miR-27a-3p, miR-30a-5p, miR-30c-2-3p, miR-128-3p, miR-138-5p, miR-1865p и miR-497-5p. Уровень экспрессии miR-29a-3p, miR-29c-3p, и miR-200b-3p через24ч/48ч постишемического периода оставался неизмененным.
Важно заметить, чтопо уровню экспрессии в лейкоцитах крови достоверные отличия зарегистрированытолько для miR-497-5p через 24 часа после ишемии (КИ = 1,768; р = 0,034) –Рисунок 9.60*Рисунок 9. Уровни нормированной SNORD61 экспрессии мкРНК miR-497-5p,выделенной из лейкоцитов перефирической крови крыс до фотохимическииндуцированного тромбоза (0 часов) и через 24 часа после него (24 часа).
Данныепредставлены в виде медианы и квартилей. Точками обозначены отдельныезначения мкРНК; серая полоса соединяет значения экспрессии miR-497-5p однихи тех же крыс в разных временных интервалах. * - p < 0,05, для связаннаыхвыборок по критерию Уилкоксона.Был проведен сравнительный анализ данных изменения экспрессии мкРНК вответ на ишемический стресс как в ткани мозга, так и в лейкоцитах крови крыс(Таблица 3).
После фотохимически индуцированного тромбоза экспрессия let-7f5p, miR-21-5p и miR-223-3p как в ткани мозга, так и в лейкоцитах крови возрастаетчерез 48 часов. Экспрессия miR-30a-3p, miR-30c-5p, miR-99a-5p, miR-107-3p и miR221-3p через 24 часа после ишемии изменяется только в лейкоцитах крови, но через48 часов значимо возрастает и в ткани головного мозга. Уровни экспрессииlet-7i-3p и miR-212-3p изменяются в ткани мозга и лейкоцитах крови только через48 часов после ишемического воздействия. Экспрессия miR-497-5p изменяетсячерез 24 часа только в лейкоцитах, а через 48 часов только в ткани мозга.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
