Диссертация (1174312), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Полученный результат демонстрировалив условных единицах [76].Гидрофобныепродуктыоценилипофизико-химическимсвойствамальбумина. Для этого определили эффективную и общую концентрациюальбумина в плазме крови флюоресцентным методом на анализаторе АКЛ-01.Применялиреактивный«Зонд-Альбумин»(г.Москва)соответственнообщепринятым инструкциям. Резерв связывания альбумина – отражающий долюцентров альбумина в плазме –рассчитали по формуле: РСА= ЭКА/ОКА; индекс38токсичности плазмы – отражающий степень заполнения тканевых центровразличными токсическими веществами – определяли по формуле: ИТ=ОКА/ЭКА1[15].2.Определение активности перекисного окисления липидов по уровнюдиеновых коньюгатов спектрофотометрическим методом [43]. Эритроцитарныелипиды высушивали досуха с помощью вакуумного испарителя, затем липидныйостаток растворяли в гексане.ПоглощающийспектррегистрированнаспектрофотометреСФ-46(Россия)при длинах волн 190-275 нм.
Окисление липидов оценено по уровнюокисленных индексов, рассчитываемых на 1 мг липидов в соотношении А 232 /А215 и А 275/А 215 (А – оптическая плотность).Содержание выражали в усл.ед./мг липидов.ТБК-активные продукты (малоновый диальдегид) определили в реакции с2-тиобарбитуровой кислотой [93]. Комплекс, состоящий из 3 мл 1 % фосфорнойкислоты, 1 мл 0,5% раствора ТБК и 0,5 ммоль ЭДТА, добавлен к эритроцитам.Далее проведена индукция липопереокисления при помощи раствора сульфатажелеза в концентрации 5 мкмоль на протяжение часа. Образцовые пробиркиперемешены и инкубированы в течение 45 мин при 100 С. В эти образцыприливали 4 мл н-бутанола, тщательно встряхнули и центрифугировали на 15 минпри 1500 g.Поглощающий спектр регистрирован в области 532 нм, а оптическаяплотность – при длинах волн 190-275 нмКонцентрация ТБК-реагирующих продуктов определена в нмоль/г белка.3.Активность фосфолипазы А2оценена при применении 1% раствора тритонХ-100.
Активность фосфолипазы А2определена в среде, содержащей 150 ммольтритон Х-100, 10 ммоль трис-HCL-буфер (pH 8,0), 10 ммоль CaCl2 ифосфатидилхолины яичного желтка (субстрат, 1,2 ммоль). Каталитическойдеятельности энзима регистрирована на установке, состоящей из электродасравнения ЭВЛ-IМ, измерительного электрода ЭСЛ-43-07, ультра-термостата,39микробюретки, иономера ЭВ-74. Активность ФЛА2 оценена титрометрическимметодом при помощи 0,02 М NaOH карбоксильных групп, выделяющихсясвободных ЖК.Расчет проведен по пальмитиновой кислоте и выражен в мкмоль/с/г белка.4.Определение активности супероксиддисмутазы. 3 мл фосфатного буфера(рН 7,4) добавлены к эритроцитам и гомогенизированы до появления однороднойсуспензии.
Далее смесь центрифугирована в течение 15 минут при 5000об/мин.Затем 0,5 мл супернатанта вносили в центрифужную пробирку, гдеимеется 1 мл хлороформно-спиртовой смеси по соотношению 2:1. Полученныйраствор тщательно перемешен и центрифугирован. Спиртовой слой отбирали идобавляли несколько капель раствора КН2РО4. Энзимный препарат получен приразбавлении полученной фазы в 20 раз.
В реакционнуюсмесь входили НАД*Н(98,5 мкмоль), нитросиний тетразолий (57 мкмоль),0,2 мл ферментного препарата,феназинметасульфат(16мкмоль).Нитросинийтетразолий,являющийсяиндикатором – способным инициировать электроны, восстанавливается доформазана. Восстановленный биформазан окрашивается от синего до черногоцвета. Реакция занимает 10 минут в 0,5 моль фосфатном буфере (рН 8,3) с ЭДТА(0,1 ммоль) при 250 С в аэробных условиях [3].
Активность супероксиддисмутазырассчитывается по формуле:А = Т % / (100% – T%),где, А – активность фермента в условных единицах на 1 мг белка, Т% – процент торможенияреакции восстановления нитросинего тетразолия в пробе за минуту.5.Определение концентрации молочной кислоты проведено по реакции спараоксидифенилом. Уксусный альдегид, образующийся из молочной кислотыпри присутствии солей меди и фосфорной и серной кислот, реагирует спараоксидифениломиформируетфиолетово-окрашенныепродукты.Исследуемый экстракт (0,02 мл) выливает в трихлоруксусную кислоту (1 мл – 5%)и центрифугирует. К без белковому фильтрату (0,2 мл) прибавляют 0,1 мл смесифосфорной кислоты и медного купороса и 2,5 мл серной кислоты.
Далееполученный раствор тщательно встряхивает и через 3 мин ставит в кипящую40водяную банюна 3 мин, затем охлаждают 3 мин в ледяной воде. Затем 1 каплипараоксидифениладобавляютвдиметилформамидевцентрпробирки,встряхивают и оставляют 10 мин при комнатной температуре. Дальше нагреваютна водяной бане на l мин, охлаждают и фотометрируют при длине волны 565 нм.Одновременно ставят холостой опыт и калибровочные опыты, которыеобрабатывают так же, как опытные. Окраска калибровочной пробы, имеющей 2нмолямолочнойкислоты,пропорционально окраскаравнитпробы,пробуссодержащейсодержанием20нмоль,0,5ммоль/л;соответствуетконцентрации 5 ммоль/л.Концентрации пировиноградной кислоты определена при помощи реакции с2,4-динитрофенилгидразином.динитрофенилгидразиномвПК,взаимодействующаящелочнойсреде,собразует2,42,4-динитрофенилгидразоны ПК желто-оранжевого цвета.
Опытная и контрольнаяпробы ставятся синхронно. Далее в две контрольные пробы наливают по 1 млводы, а в опытную – 1 мл тканевого экстракта. Потом приливают во все пробиркиспиртовый раствор КОН (1 мл – 2,5%), перемешивают на 1 мин. Далееприливают2,4-динитрофенилгидразин(0,5мл – 0,1%), перемешивают иоставляют на 15 мин в комнатной температуре. Затем фотометрируют нафотоэлектроколориметр в кюветах на реактивы по5 мм с синим светофильтром.ПК наливают в пробирки последовательно 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 и 1 мл раствора(50 мкг – 1 мл), и добавляют соответственно до 1 мл воды.
Дальше спиртовыйраствор КОН (1 мл – 2,5%) приливают в каждую пробу, перемешивают на 1 мини добавляют 2,4-динитрофенилгидразин (0,5 мл – 0,1%), оставляют стоять втечение 15 мин. затем фотометрируют каждую пробу на фотоэлектроколориметрпротив контроля в тех же кюветах, что и опытные пробы.
Далее регистрируютсяоптическая плотность Е на оси ординат и содержание пировиноградной кислотына оси абсцисс(5, 10, 20, 30, 40, 50 мкг) в 1 мл.Определение гипоксического коэффициента по формуле: количество МК /количество ПК.416.Оценка функционального статуса головного мозга всех пациентовданной работы проводилась по следующим психосоматическим тестам:6.1.Тест связи чисел – определяет способность к исполнениюосмысленных поведений. Во время выполнения ТСЧ-А пациент соединяетнепрерывно небольшое количество числа (1 – 250), напечатанные на бумажнойлисте.
Оценивается время, затраченное больным на проведение задания, включаявремя исправления ошибок. При ТСЧ-В больному предлагаются буквы от А до Ли числа от 1 до 13, заключенные в круги и расположенные на бумажной листе.Пациента должен соединить цифры и буквы следующим образом: 1-А-2-Б-3-В-4Г и т.д..Данный тест оценивает зрительно-пространственную координацию,скорости моторной внимательности, и способности переключения внимание [64].6.2.Тест «Точка в круге» определяет длительную монотонную работу иконцентрациювниманияпациентов.Сначалабольногодолженпройтиподготовительный этап – проставить точки в центре 20 кругов, нарисованных набумажной листе, а потом поставить точку в центре каждого 100 кругов на время,затраченное на прохождение теста [48].6.3.Тест «Лабиринт» – оценивает скорость и точность зрительно-моторной реакции. Пациент должен провести линию направляющей стрелкой полабиринту не косая стенок.
Тест «Лабиринт» оценивает состояние визуальномоторной интеграции и наглядно-действенного мышления [14].Углубленные лабораторно-биохимические исследования проводили напервые и седьмые сутки.Полученныестатистическимицифровыеметодами:результатыкритерияобработаныСтьюдента(t),следующимикорреляционнуюзависимость – критерия r, с помощью программы IBMSPSSStatistics 22. Динамикапоказателей отражена на графиках, построенных с использованием программыэлектронных таблиц Microsoft Excel 2019.42Глава 3. ЦЕРЕБРАЛЬНЫЕ НАРУШЕНИЯ И РАССТРОЙСТВАГОМЕОСТАЗА ПРИ ОСТРОМ ПАНКРЕАТИТЕ РАЗЛИЧНОЙ ТЯЖЕСТИНА ФОНЕ ТРАДИЦИОНОЙ ТЕРАПИИПанкреатические ферменты и вторичные продукты, образованные врезультате активации фосфолипазы А2, перекисного окисления липидов,калликреин-кининовой системы, биогенных активных веществ и циркулирующихво крови оказывают токсическое воздействие на жизненно-важные органы и, впервую очередь, на головной мозг, приводя к гомеостатическим нарушениям ицеребральным расстройствам [6].3.1.
Выраженность эндогенной интоксикации при остром панкреатитеразличной тяжести на фоне традиционной терапииОдним из основных факторов, инициирующих прогрессирование патологиии развитие полиорганной недостаточности при остром панкреатите, являетсяэндотоксемии. Эндогенная интоксикация является причиной нарушения функциижизненно-важных органов и систем, с одной стороны, и приводя к угнетениюфункционирования и самих органов детоксикации, к усугублению синдромаэндогенной интоксикации – с другой [108].Синдром эндотоксикоза, развивающегося в условиях острого панкреатита,как указано во второй главе, был оценен с помощью следующих показателей:содержания молекул средней массы (λ=254 и 280 нм); общей и эффективнойконцентрации альбумина, резерва связывания альбумина, индекса интоксикациипо альбумину [136].Установлено, что острый панкреатит различной тяжести в раннем периодехарактеризовался развитием выраженной эндогенной интоксикации (табл.
3.1).43Таблица 3.1. – Показатели эндогенной интоксикации у пациентов острымпанкреатитом на фоне традиционной терапииТестыНормаМСМ (λ=254 нм) усл.ед.218,6±9,8МСМ (λ=280 нм) усл.ед.298,4±8,1ОКА, г/л49,3±5,63ЭКА, г/л43,1±3,67РСА, усл. уд.0,87±0,03ИТ, усл. уд.0,14±0,01ГруппыПериод наблюдения, суткиисследованияПервыеСедьмыеI (n=15)311,2±11,6268,7±8,1III (n=15)458,4±12,91399,9±9,61I (n=15)409,6±12,8346,8±9,5III (n=15)574,6±13,61458,7±9,81I (n=15)43,6±4,2740,1±3,14III (n=15)38,8±4,05123,5±3,441I (n=15)32,5±4,1333,8±3,25III (n=15)24,5±3,76114,4±2,161I (n=15)0,74±0,020,78±0,01III (n=15)0,63±0,0210,65±0,011I (n=15)0,34±0,040,21±0,02III (n=15)0,58±0,0310,52±0,041Примечание здесь и далее: жирный шрифт – достоверность по отношению к номепри р<0,05; 1 – достоверность по отношению к первой группе при р<0,05.При изучении гидрофильного компонента эндогенной интоксикации вплазме крови выявлено, что фармакологическая эффективность стандартнойтерапии в снижении синдрома эндотоксикоза у пациентов острым панкреатитомкак легкой, так и тяжелой степени оказалась недостаточной.
Об этомсвидетельствует существенный рост уровня МСМ (λ=254 нм) на всех этапахнаблюдения и в первой группе на 42,3 и 22,9 % (р<0,05), и в третьей – на 109,6 и82,9 % (р<0,05).Подобный результат найден и при исследовании МСМ (λ=280 нм),содержание которых в условиях острого панкреатита было выше нормальнойвеличины у пациентов I группы на первые сутки на 37,2 % (р<0,05) и на 7-е – на16,2 % (р<0,05), и III группы во всем исследовательском периоде на 92,5 и 53,7 %(р<0,05) (табл.
3.1.).44При анализе продуктов эндогенной интоксикации гидрофобной природыустановлено, что общая концентрация альбумина при остром панкреатите легкойтяжести на фоне традиционной терапии снижалась на 1-е сутки на 11,5 % и 7-е –на 18,6 % (р<0,05). В 3-й группе ОКА была снежена 1-7-е сутки на 21,2 и 52,3 %(р<0,05).В то же время отмечено и сохранение снижения эффективной концентрацииальбумина у пациентов легким панкреатитом первой группы с первых суток на24,5 % (р<0,05) по седьмые – на 21,5 % (р<0,05).В III-й группе пациентов острым тяжелым панкреатитом при применениитрадиционной терапии уровень ЭКА был меньше по сравнению с нормой напротяжение всего времени наблюдения на 43,1 и 66,5 % (p<0,05).При лечении больных острым панкреатитомстандартным методом резервсвязывания альбумина был уменьшен относительно исходных данных в 1-7-есутки наблюдения и при легких формах на 14,9 и 10,3 % и при тяжелых – на 27,6и 25,2 % (p<0,05) (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
