Диссертация (1174307), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Проанализировать результаты хирургического лечения детей с тяжелымипрогрессирующими стадиями ретинопатии недоношенных.6. Выявить клинические признаки, указывающие на возникновение ипрогрессирование аутоиммунного процесса при ретинопатии недоношенных.Материалы и методы исследования: Всего нами обследовано 28 взрослыхздоровых людей (56 глаз) в возрасте от 19 до 54 лет (из них 13 мужчин и 15женщин), 27 соматически здоровых доношенных детей (54 глаза) в возрасте от1,5 месяцев до 9 месяцев и 60 детей (120 глаз) с РН от III+ до V стадий и сзадней агрессивной формой РН, рожденных на сроках гестации от 25 до 32недель, в том же возрасте, что и доношенные дети (от 1,5 месяцев до 9месяцев), (больший процент детей в возрасте до 6 месяцев).Из патологических состояний у матерей недоношенных детей наиболеечасто встречались хронические воспалительные заболевания женских половыхорганов, угроза выкидыша, токсикоз первой и второй половины беременности,цитомегаловирусная инфекция, хронический пиелонефрит.Недоношенные дети имели в анамнезе патологию ЦНС (перинатальноепоражение центральной нервной системы II-III степени, внутрижелудочковыекровоизлиянияII-IIIстепени),легких(внутриутробнуюпневмонию,бронхолегочную дисплазию), сердечно-сосудистой системы (различные видыврожденногопорока),врожденнуюнекротизирующий энтероколит.неонатальнуюинфекцию,анемию,Выхаживание этих детей происходило сиспользованием кислорода от нескольких суток до 1 месяца, в единичныхслучаях – дольше.Подбор больных для исследования подбирался так, чтобы у больного надвух глазах отмечалась одна и та же стадия процесса.
Исключение составили 4109больных с III+ стадией, у которых на парном глазу была II стадия, при которойне потребовалось хирургическое лечение. У всех больных с РН отмечаласьпрогрессирующиестадииретинопатиисвысокойсосудистойипролиферативной активностью. Нами было обследовано: 20 чел. (36 глаз) с III+стадией РН, 8 чел. (16 глаз) с IVа стадией, 4 чел. (8 глаз) с IVb стадией, 19 чел.(38 глаз) с V стадией и 9 чел.
(18 глаз) с задней агрессивной формой РН.Офтальмологическое исследование включало: исследование остротызрения (реакция зрачка на свет, светоощущение, слежение за игрушкой(расстояние до игрушки), биомикроскопию с помощью ручной щелевой лампы,офтальмоскопию под мидриазом (с помощью налобного бинокулярного офтальмоскопа), обследование глазного дна на офтальмологической камере RetCam III, ультрaзвуковое исследование глазного яблока.Иммунологическое исследования: мы проводили иммунфенотипирование клеток периферическойкрови, включаяТ-регуляторные клеткиCD4+CD25highFoxp3+CD127low. Забор крови у детей из вены проводился наоперационном столе во время оперативного вмешательства под общимобезболиванием.
Иммунофенотип клеток крови определяли с использованием7-цветного коктейля антител: СD14 FITC (clone Tuk4), CD56PE (clone REA196),CD4 PerCP (clone VIT4), CD19 PE-Vio*770 (clone-L T19), CD3 APC (cloneBW264/56), CD8 APC-Vio770 (clone BW135/80), CD45 VioBlue* (clone 5B1).Статистическую обработку проводили с использованием программы«Statsoft Statistica v.7».
Достоверность полученных различий оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (сопоставление двухнезависимых групп данных по клиническим признакам в случае распределений,отличных от нормальных). Достоверными считались различия при р<0,05.Были выстроены графики тенденции (линии тренда) изучаемых параметровклеточного иммунитета у детей с различными стадиями ретинопатиинедоношенных.Для оценки количественного содержания Т- и В-лимфоцитов и, в частности,Т-регуляторовСD4+СD25highFoxp3+СD127lowмысравнивалиих110содержание в группах с взрослыми, соматически здоровыми доношенными инедоношенными детьми с ретинопатией недоношенных, а также по стадиямРН. В настоящее время накоплены многочисленные данные о нарушенияхиммунитета у преждевременно родившихся детей, особенно при появлениипризнаков патологии [20, 126, 256, 264].
Полученные нами результатыподтверждают наличие особенностей Т- и В- клеточного иммунитета у детей сретинопатией недоношенных по сравнению со взрослыми идоношеннымидетьми.При сравнении показателей клеточного иммунитета в группах c взрослыми, соматически здоровыми доношеннымии недоношенными детьми сретинопатией недоношенных были получены следующие результаты: присравнении показателей взрослых и детей отмечалось различие по всем 7параметрам, статистически достоверное - по 4 из 7 параметров (р<0,0001-0,05)при сравнении взрослых и всех детей, по 1 из 7 показателей – при сравнениивзрослых и соматически здоровых доношенных детей (р<0,05), по 3 из 7 присравнении группы взрослых и недоношенных детей с РН (р<0,05), по 5 из 7 –при сравнении доношенных соматически здоровых детей и недоношенныхдетей с ретинопатией (р<0,05).При сравнении показателей всех детей и взрослых, не считая возраста,отмечалось достоверное различие по четырем из семи показателей клеточногоиммунитета (р<0,05-0,0001).
У детей отмечалось снижение общего количестваТ-клетокСD3+ , Т-рег CD4+CD25highFoxp3+CD127low , увеличение индексаCD4+/CD8+ , увеличение количества В-клеток CD19+. Исключение составилизначения CD3-CD16+CD56+, CD3+CD4+, где р>0,05.При сравнении состояния клеточного иммунитета у соматическиздоровых доношенных детей и взрослых достоверное отличие получено поодному из семи параметров клеточного иммунитета: обнаружено увеличениеколичества CD19+ в группе соматически здоровых доношенных детей.При сравнении показателей детей с ретинопатией недоношенных ивзрослыхотмечалось достоверное различие по тремиз семи параметров111клеточного иммунитета.
У детей с ретинопатией недоношеных отмечалосьснижение общего количества СD3+ , CD4+CD25highFoxp3+CD127low, увеличе-ниеколичества CD19+ (р<0,05) .При исследовании недоношенных детей с ретинопатией и соматическиздоровых доношенных, статистически значимое отличие получено по пяти изсемипоказателей клеточного иммунитета. Не было выявлено статистическидостоверного различия по иммунологическим показателям при сравнении детейв возрасте от 1 до 3 месяцев, от 3,5 до 6 месяцев и от 6,5 месяцев до 9 мес. Удетей с ретинопатией недоношенных отмечалось снижение общего количестваСD3+,СD3+СD4+,СD4+СD25highFoxp3+CD127low,снижениеиндексаСD3+СD4+/СD3+СD8+, увеличение количества CD19+.В исследованиях Correa-Rocha R., Perez A.
с соавт.(2012), Scheible K.M.,Emo J. с соавт. (2015) при изучении иммунного статуса недоношенных детейбыло обнаружено, что абсолютное количество всех иммунных подмножеств(т.е., моноциты, гранулоциты, В – лимфоциты, естественные киллеры (NKклетки), Т- клетки CD4 + и CD8 +) были у недоношенных детей заметнониже, чем у доношенных новорожденных [126, 256]. Т-регуляторные клетки (Tрег) были единственными, частота которых у недоношенных детей в большомпроценте случаев была выше, чем у доношенных[137].
Отмечено, чтосниженные показатели Т-рег у недоношенных детей являются прогностическинеблагоприятным фактором для постнатальной адаптации [59, 60] . Сниженныепоказатели Т-рег и подавление их функции отмечалось у недоношенных детейстакими заболеваниями, как бронхолегочная дисплазия, некротизирующийэнтероколит и др., в патогенезе которых доказана рольиммунологическихаутоиммунных процессов [225; 247].ВнашемисследованииCD4+CD25highFoxp3+CD127lowприобнаружено,сравнениичтозначенийколичествоэтихТ-регклетокуменьшается от группы сравнения с взрослыми до группы недоношенных сретинопатией. Полученные данные могут свидетельствовать об изменении и,возможно, срыве механизма иммунологической толерантности, за которую112ответственны Т-рег CD4+CD25highFoxp3+CD127low.
Не получено статистическизначимого отличия по показателям натуральных киллеров - CD3-CD16+CD56+(Р>0,1) и CD3+CD8+ (P>0,5).Нами были проведены исследования Т- и В-клеточного иммунитета унедоношенных детей с ретинопатией с различными стадиями заболевания.В работах многих авторов выявлена связь между возникновением ипрогрессированием(цитокинов,РНростовыхинарушениемфакторов,иммунологическихсистемыкомплимента,показателейпоявлениемантиретинальных аутоантител и др.) [31, 35, 80, 170, 190, 194, 268]. Также влитературе уже имеются данные, свидетельствующие о роли аутоиммунныхреакций в патогенезе РН (наличие аутоиммунизации к S-АГ (Катаргина Л.А..Слепова О.С., Скрипец П.П.
(2003г.); роль системы лейкоцитарного антигенаHLA в патогенезе РН (Flor-de-Lima F, Rocha G., и др. (2013); повышение всыворотке крови уровней провоспалительных цитокинов (TNF и в меньшейстепени–IL1), а также иммунорегуляторного цитокинаIL2 (Т-клеточногоростового фактора, способствующего развитию аутоиммунных реакций) придефицитепротивовоспалительного(иммуносупрессорного)цитокина-защитного фактора TGF (Hellstrom A.2001, Tufail А. 2004, Sonmez K. 2008,Mititelu M. 2012, Катаргиной Л.А, 2013, Chen S.N.2015).При сравнении показателей Т- и В-клеточного иммунитета у доношенныхсоматически здоровых детей и недоношенных, страдающих ретинопатией III+,IV, V стадий выявлено, что показатели Т- и В-клеточного иммунитетасущественно различались у доношенных соматически здоровых детей инедоношенных, страдающих ретинопатией III+, IV, V стадий. В нашемисследовании не было выявлено статистически достоверного различия поиммунологическим показателям при сравнении детей в возрасте от 1 до 3месяцев, от 3,5 до 6 месяцев и от 6,5 месяцев до 9 мес.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
