Диссертация (1174231), страница 18
Текст из файла (страница 18)
62).абвгдеРисунок 62 — Культивированные зернистые нейроны мозжечка крыс в контролепосле воздействия глутамата (а) и после культивации с цитратом натрияв глутаматной модели стресса в концентрации 0,1 мМ (б), 0,2 мМ (в), 0,5 мМ (г),1 мМ (д) и в контроле (е). Стрелками указаны интактные культивированныезернистые нейроны. Масштабный отрезок 15 мкмВажно отметить, что в условиях глутаматного стресса действующими нейропротекторными началами цитрата лития являются и ион лития, и цитрат-анион.Этоподтверждаютрезультатынейроцитологическогоисследованияэффектов цитрата натрия. Заметим, что ион натрия не способствует повышениювыживания нейронов в условиях глутаматного стресса.
В проведённой серии экспериментов с цитратом натрия при умеренном глутаматном стрессе выживало всреднем 43% нейронов. Добавление цитрата натрия в концентрациях 0,1; 0,2; 0,5 и1 мМ повышало выживаемость до 45, 48, 52 и 38% соответственно. Таким образом, цитрат натрия в концентрации 0,5 мМ незначительно (на 9%), но способствовал повышению выживаемости КЗН. Следовательно, и ион лития, и цитрат-анионв составе соли проявляют синергизм в нейропротекции при глутаматном стрессе.121Влияние аскорбата натрия на выживаемостькультивированных зернистых нейронов мозжечкав условиях глутаматного стрессаВ условиях глутаматного стресса аскорбат натрия в концентрациях 0,2и 1,0 ммоль/л не имел достоверного эффекта на выживаемость, а в концентрации0,1 и 0,5 мМ приводил к снижению выживаемости нейронов (рис.
63).1 ммоль/ласкорбата натрия0,5 ммоль/ласкорбата натрия0,2 ммоль/ласкорбата натрия0,1 ммоль/ласкорбата натрияКонтрольРисунок 63 — Выживаемость культур нейронов при различных концентрацияхаскорбата натрия. Эмпирические функции распределения значенийвыживаемости нейроновНа фоне добавления различных концентраций аскорбата натрия в условияхглутаматного стресса в исследуемых культурах нами было выявлено достоверноеизменение при добавлении аскорбата натрия в концентрации 0,1 и 0,5 мМ(p < 0,05) (табл. 19). Медиана выживаемости при воздействии глутамата составила 52,96 (q25% = 45,17, q75% = 67,66), в культуре с добавлением цитрата натрияи глутамата в концентрации 0,1 ммоль/л — 36,6 (q25% = 30,47, q75% = 57,27,122p < 0,005), при добавлении аскорбата натрия и глутамата в концентрации0,2 ммоль/л — 48,51 (q25% = 36,93, q75% = 60,59, p > 0,1), при добавленииаскорбата натрия и глутамата в концентрации 0,5 ммоль/л — 48,29 (q25% == 32,02, q75% = 60,85, p < 0,05), при добавлении аскорбата натрия и глутаматав концентрации 1,0 ммоль/л — 52,96 (q25% = 42,56, q75% = 65,49, p > 0,5).Таблица 19 — Основные статистические показатели выживаемости при воздействии аскорбата натрия на культивированные зернистые нейроны мозжечкав условиях глутаматного стресса0,10,20,51,0ммоль/лммоль/лммоль/лммоль/л28,7622,0923,8813,3523,361-й квартиль, 25 %45,1730,4736,9332,0242,56Медиана52,9636,6*48,5148,29*52,963-й квартиль, 75 %67,6657,2760,5960,8565,49120,0086,81120,90110,6098,7218,7118,5820,0921,1118,74Стандартная ошибка2,7892,7692,9953,1482,793Нижняя граница ДИ51,9538,8545,5841,6750,34Верхняя граница ДИ63,1950,0257,6654,3661,60ЗначенияМинимальноезначениеМаксимальноезначениеСреднеквадратическоеотклонениеКонтроль* Отличия между группами (р < 0,05 по сравнению с контролем) в соответствии с t-критерием.Описанные выше результаты иллюстрируются отдельными примерамификсированных культур нейронов в контроле после воздействия глутамата и после культивации с аскорбатом натрия в глутаматной модели стресса (рис.
64).Наглядно показано снижение количества выживших нейронов в концентрациях0,1 и 0,5 ммоль/л (рис. 64, б, г).123абвгдеРисунок 64 — Культивированные зернистые нейроны мозжечка крыс в контролепосле воздействия глутамата (а) и после культивации с аскорбатом натрияв глутаматной модели стресса в концентрации 0,1 мМ (б), 0,2 мМ (в), 0,5 мМ (г),1 мМ (д), в контроле (е). Стрелками указаны интактные культивированныезернистые нейроны. Масштабный отрезок 15 мкмНа фоне добавления различных концентраций аскорбата натрия в условияхглутаматного стресса в исследуемых культурах было выявлено достоверноеснижение выживаемости КЗН при добавлении аскорбата натрия в концентрации0,1 и 0,5 мМ (p < 0,05).Сравнительная характеристика действия солей лития и натрия на выживаемостькультивированных зернистых нейронов в условиях глутаматного стрессаИтак, результаты показали, что в исследованном диапазоне концентраций(0,1–1 мМ) неорганические соли лития (хлорид лития и карбонат лития) не обладают нейропротекторным эффектом.
В то же время аскорбат лития и цитрат лития способствуют достоверному повышению выживаемости нейронов в субмилллимолярных концентрациях (рис. 65–68).124Рисунок 65 — Сравнение нейропротекторной эффективности различных солейлития (в концентрации 0,1 мМ) в условиях умеренного глутаматного стресса(выживало в среднем 30% нейронов при добавлении 100 мкМ глутамата).Примечание: NaAsc — аскорбат натрия, NaCit — цитрат натрия, LiAsc — аскорбат лития,Li3Cit — цитрат лития.
Статистическая значимость определялась в соответствии с критериемКолмогорова — СмирноваРисунок 66 — Сравнение нейропротекторной эффективности различных солейлития (в концентрации 0.2 мМ) в условиях умеренного глутаматного стресса(выживало в среднем 50% нейронов при добавлении 100 мкМ глутамата).Примечание: NaAsc — аскорбат натрия, NaCit — цитрат натрия, LiAsc — аскорбат лития,Li3Cit — цитрат лития. Статистическая значимость определялась в соответствии с критериемКолмогорова — Смирнова125В условиях глутаматного стресса при добавлении в культуру 100 мкмоль/лглутамата соли лития (LiCl, Li2CO3, LiAsc, Li3Cit) и натрия (NaAsc, NaCit) в концентрации 0,1 мМ не изменяли выживаемость КЗН мозжечка.Добавление неорганических солей лития (LiCl, Li2CO3) и натрия (NaAsc,NaCit) в концентрации 0,2 ммоль/л, не изменяло выживаемость КЗН мозжечка,добавляемого к нейронам в глутаматной модели стресса (p > 0,05). Добавление жеорганических солей лития (LiAsc, Li3Cit) достоверно повышало выживаемостьнейронов по сравнению с группой, где добавляли глутамат (p < 0,01) (рис.
67).Рисунок 67 — Сравнение нейропротекторной эффективности различных солейлития (в концентрации 0.5 мМ) в условиях умеренного глутаматного стресса(выживало в среднем 50% нейронов при добавлении 100 мкМ глутамата).Примечание: NaAsc — аскорбат натрия, NaCit — цитрат натрия, LiAsc — аскорбат лития,Li3Cit — цитрат лития. Статистическая значимость определялась в соответствии с критериемКолмогорова — СмирноваДобавление неорганических солей лития (LiCl, Li2CO3) и натрия (NaAsc,NaCit) в концентрации 0,5 ммоль/л не изменяло выживаемость КЗН мозжечка,добавляемого к нейронам в глутаматной модели стресса (p > 0,05). Добавление жеорганических солей лития (LiAsc, Li3Cit) достоверно повышало выживаемостьнейронов по сравнению с группой, где добавляли глутамат (p < 0,01) (рис.
68).126Рисунок 68 — Сравнение нейропротекторной эффективности различных солейлития (в концентрации 1,0 мМ) в условиях умеренного глутаматного стресса(выживало, в среднем, 50% нейронов при добавлении 100 мкМ глутамата).Примечание: NaAsc — аскорбат натрия, NaCit — цитрат натрия, LiAsc — аскорбат лития,Li3Cit — цитрат лития. Статистическая значимость определялась в соответствии с критериемКолмогорова — СмирноваПри добавлении карбоната лития в концентрации 1,0 ммоль/л происходилодостоверное снижение выживаемости КЗН (р < 0,05 по сравнению с контролем).Добавление аскорбата натрия приводило к увеличению выживаемости нейронов(в среднем на 25%, p < 0,001).
Добавление органической соли лития (аскорбаталития) достоверно повышало выживаемость нейронов по сравнению с группой, вкоторой добавляли глатамат, а также неорганические соли лития и натрия(p < 0,01). Добавление хлорида лития и натрия в концентрации 1,0 ммоль/л неизменяло выживаемость КЗН мозжечка, добавляемого к нейронам в глутаматноймодели стресса (p > 0,05).127ЗАКЛЮЧЕНИЕКрупнейшие эпидемиологические исследования последнего десятилетиявыявили возрастание распространенности хронических НДЗ, что связано с неуклонным старением западной цивилизации.Десятки миллионов людей в мире и миллионы в России страдают хроническими НДЗ, они быстро прогрессируют, что заканчивается инвалидизацией и летальным исходом.
Деменцией страдает 5,4% населения мира старше 65 лет, или35,6 млн человек, а к 2040 г. число заболевших может превысить 100 млн.В то же время множеством эпидемиологических и клинических исследований доказано, что перспективным направлением в терапии НДЗ является использование препаратов лития, механизм нейропротекторного действия которых реализуется через: ингибирование GSK-3β, стимулирование белка теплового шока(hsp70), ингибирование входа кальция в клетку через NMDA глютаминовые рецепторы и активацию EPK сигнального пути (Einat H., 2003, Gould T.
D, 2004).История терапевтического применения карбоната лития насчитывает около 70 лет,не теряя своей актуальности и в настоящее время. Это связано с тем, что литийобладает широким спектром биологической активности, не имеющим аналогов.Карбонат лития является «золотым стандартом» лечения аффективныхрасстройств. Однако в настоящее время накопился массив данных, подтверждающих нейропротекторный и нейрорегенеративный эффекты лития как приострых повреждениях мозга, так и при хронических НДЗ в экспериментальныхмоделях с использованием лабораторных животных. Кроме того, является доказанной роль ионов лития в протекании многих процессов в организме, напримерв метаболизме простых сахаров (Bosch F.
et al., 1992, O’Neill R. D. et al., 1984),в обмене липидов (Diaz-Sastre C., 2005), регуляции артериального давления(Kohno T., 2007).Несмотря на все положительные эффекты, препараты лития достаточно ограниченно используются в клинической практике из-за сложностей в подборе128терапевтической дозы, необходимости мониторирования его концентрации двараза в сутки, большого количества побочных эффектов. В связи с этим необходим поиск новых солей лития, не обладающих подобными недостатками. Имиявляются органические соли лития, оказывающие свое действие в физиологических дозах (30–100 мкг/кг).Таким образом, целью данной работы было изучение биораспределениялития при введении per os органических солей лития (цитрата, аскорбата) исравнение эффектов органических солей лития (цитрата, аскорбата) и неорганических солей лития (хлорида, карбоната) на выживаемость культивированныхзернистых нейронов мозжечка в условиях глутаматной токсичности in vitro, чтов перспективе позволит расширить показания для применений данных органических солей лития в клинической практике.Работа состояла из двух экспериментов: изучение биораспределения органических солей лития и оценка нейропротекторного эффекта солей литияи натрия на модели глутаматного стресса.В первом эксперименте при введении органических солей лития (цитрата,аскорбата) per os однократно в дозе 1 мг/кг после забоя животных и отбора органов и биологических жидкостей у крыс в 9 временных точках: 0 мин, 45 мин, 1 ч,1,5 ч, 3 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч — было установлено, что цитрат лития способствует поддержанию стабильных концентраций иона лития в крови (низкое значениенаклона участка финального выведения (Lz = 0,005 1/ч) и высокое значение периода полувыведения (Т1/2 = 146 ч) и в головном мозге (Lz = 0,001 1/ч и Т1/2 = 602ч), низкое значение клиренса (CL = 0,004 л/ч.)).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
