Диссертация (1174206), страница 40
Текст из файла (страница 40)
При оценке по тесту правой передней лапы (Рисунок 43 ж) выявленызначимые различия (р=0,000051) между группами на 2, 7 и 14 дни. В отличие от всех изучаемыхв этой главе тестов, дисперсия данных в «Placing test» не превышал разницы между группами224животных на 2, 7 и 14 сутки после операции. Но на 3 и 4 неделе функциональный(неврологический) дефицит по данному тесту был не выявлен.Рисунок 44 - Оценка функционального (неврологического) дефицита по шкале mNSS втечение 4 недель после окклюзии ЛСМА на 30 минут по методике Koizumi J. в сравнении сложнооперированными крысами (* - p<0.001)***ИспользованиешкалыmNSS[178]позволиловыявитьмаксимальнуюстепеньневрологических расстройств в опытной группе на 2-е сутки (Рисунок 44) (р=0,00005), составляет2,5 (2; 4) баллов.
Ни у одного животного не было выявлено изменения рефлексов (Pinna-рефлекси корнеальный рефлекс) после ишемии. На 7 и 14 сутки происходило снижение неврологическогодефицита до 1 [1; 3] и 1 [1; 1] балла и значимостью р=0,00005 и р=0,0009 по сравнению с группойложнооперированных, соответственно, а к 3 неделе функциональный (неврологический)дефицит по шкале mNSS не выявлялся (p=1,0). mNSS позволила комплексно оценитьфункциональный (неврологический) дефицит в течении только 2 недель после моделированииишемии мозга крысы по методике Koizumi J. Недостатком шкалы mNSS также являлся большойразброс данных.225Рисунок 45 - Оценка неврологического дефицита по Бедерсон-тесту в течение 28 дней после30-минутной окклюзии левой СМА по методике Коизуми в сравнении с ложнооперированнымиживотными (* - p<0.001)***ПрииспользованииБедерсон-теста(Bedersontest)максимальныеневрологическиерасстройства в опытной группе выявлялись на 2-е сутки (Рисунок 45), что достоверно отличалосьот показателей группы сравнения (р=0,00005) и составляло 2 [2; 3] и 0 [0; 0] баллов,соответственно.
На 7 и 21 сутки происходило снижение неврологического дефицита до 2 [1; 2,5]и 1 [1; 1,5] баллов и значимостью р=0,00005 и р=0,0008 по сравнению с ложнооперированнойгруппой, соответственно, а к 28 суткам неврологический дефицит по Бедерсон-тесту невыявлялся. Таким образом, данный тест позволил комплексно оценить функциональныйневрологический дефицит в течение 3 недель после моделирования фокальной 30-минутнойишемии мозга крысы по методике Koizumi J. Однако недостатком теста также являлся большаядисперсия данных (23%), поэтому, если смоделировать ситуацию использования данного тестадля оценки лечебного эффекта нейропротективных вмешательств, то согласно нашим расчетамБедерсон-тест позволит выявить только значимый эффект с регрессом неврологическогодефицита более 25%226Рисунок 46 - Оценка функционального (неврологического) дефицита шкале Гарсия в течение4 недель после окклюзии ЛСМА на 30 минут по методике Koizumi J.
в сравнении сложнооперированными крысами (* - p<0.05)****Шкала Гарсия [212] позволила оценить (Рисунок 46) двигательные, чувствительныенарушения и снижение активности на 2-е сутки - 13,5 [12,5; 14] баллов, что значимо (р=0,00005)отличалось от показателей группы ложнооперированных крыс - 18 [17; 18]. На 21 суткипроисходило снижение (р=0,0133) неврологического дефицита до 15 [14; 16] балла (р=0,006 посравнению с группой сравнения), а к 28 суткам неврологический дефицит по шкале Гарсия невыявлялся (p=0,083 по сравнению с группой ложнооперированных).
Шкала Гарсия позволилакомплексно оценить функциональный (неврологический) дефицит в течение 3 недель послемоделирования 30-минутной фокальной ишемии мозга у крыс. Шкала Гарсия имела наименьшийразброс данных – 12%.Функциональный (неврологический) дефицит у крыс после 30 минутной окклюзии ЛСМАсохранялсядостаточнодлительныйсрок.Однакодвигательныйдефицитукрысвосстанавливался достаточно быстро, и к 28 дню после экспериментального инсультаимеющиеся неврологические расстройства не влияли на «обычную» двигательную активность.Поэтому все использованные в данной работе тесты позволили оценить неврологическийдефицит только в течение не более 28 дней.
Далее, по любому из тестов, неврологическийдефицит не выявлялся. Можно предположить, что у крыс, по аналогии с человеком, в результате22730-минутной окклюзии СМА развивался «малый инсульт», то есть происходило полноевосстановление нарушенных функций.При исследовании новых лекарственных средств или нейропротективных технологийважным является выявление даже незначительного терапевтического эффекта. Это приобретаетособую значимость при изучении механизмов действия мультимодальных лекарственныхсредств, у которых имеется несколько путей защитного влияния на головной мозг, и вкладкаждого из механизмов в развитие защитного эффекта может быть различным. Поэтому вопросвыбора правильной модели и системы оценки этого эффекта становится критическим, посколькуположительный терапевтический эффект может быть не заметен при низкой чувствительноститеста.
При создании шкалы или неврологического теста должен быть использован большойдиапазон значений. В настоящем исследовании мы получили данные о том, что частьсуществующих тестов регистрировала небольшую разницу значений (в один-два балла) посравнению с ложнооперированными животными, что позволяет выявить только значимыйтерапевтический эффект в 50 и более процентов, в случае его наличия.
Если терапевтическийэффект составит 10-20%, данные тесты не покажут разницы, и результат окажется негативнымили недостоверным. Из всех изученных нами тестов наиболее чувствительными оказались тест свытягиванием лап («Placing test»), Бедерсон тест (Bederson test) и шкала Гарсия.Мы проанализировали оценочные шкалы с позиции классификации функционированияживотных. В таблице 27 представлено сопоставление шкал и опросников с доменамиклассификации функционирования.Таблица 27 - Сопоставление шкал и КФЖ.Шкала mNSS(Modified NeurologicalSeverity Scores)Шкалы или пункт шкалыХождение по балке («Ledged TaperedBeam»)Тест установки позы («Bracing test»)Угловой тест (Corner test)*Тест с вытягиванием лапы («Placingtest»)Подвешивание крысы захвостХодьба по поверхностиBeam – балансный тестPinna-рефлекс (встряхиваниеголовой при прикосновениик наружному слуховомупроходу)Корнеальный рефлекс(моргание глазом при легкомприкосновении к роговицетканью)Бедерсон тест (Bederson test)Домен КФЖd4502 Ходьба по различным поверхностямd4154 Нахождение в положении стояd4105 Наклонd445 Использование лапd4156 Нахождение в положении виса назадних лапахd4500 Ходьба на короткие расстоянияd4154 Нахождение в положении стояb7502 Рефлексы на другие экстероцептивныестимулыb2151 Функции векаd445 Использование лап228Шкала неврологического дефицитаГарсияСпонтанная активность (вd450 Ходьбаклетке в течение 5 мин)Симметричность движенийb7302 Сила мышц одной стороны тела(4 конечности)Симметричность предплечий d445 Использование лап(крыса вытягиваетконечности, когда ее держатза хвост)Забирается по стенкеd4556 Лазанье по разным поверхностямпроволочной клеткиРеакция на прикосновение к b265 Функция осязаниякаждой стороне туловищаОтвет на прикосновениеb2704 Чувствительность вибриссвибриссы* - в данном тесте указывается, что оценка проводится для измерения неглекта и парезавзора.
Однако это два разных вида нарушений с разной локализацией очага в мозге. Неглект –это нарушение в системе восприятия, парез взора – это двигательный дефицит. Поэтому оценкапо данному домену будет относится к активности и участию. К тому же данная активностьможет быть ограничена и другими причинами, такими как боль, нарушение поверхностной иглубокой чувствительности, нарушение схемы тела и т.д.Анализ шкал показал, что по Шкале mNSS оценивается только 5 доменов, из которых 3 доменаактивности и участия и 2 домена функции, а по шкале Гарсия 6 доменов, из которых 3 доменаактивности и участия и 3 домена функций.
Остальные тесты позволяют оценить только поодному домену из категорий активности и участия. Учитывая, что наиболее чувствительнымиоказались тест с вытягиванием лапы («Placing test»), Бедерсон тест (Bederson test) и шкала Гарсия,то использование этих шкал и тестов в совокупности позволяет оценить только 6 доменов, таккак домен «d445 Использование лап» встречается во всех трех тестах.Из выбранных нами тестов найдены те, которые позволяют измерить степень нарушения иограничений при инсульте у крыс, однако с позиции анализа функционирования шкалыохватывают крайне мало проявлений инсульта у крыс.
В следующей части будет представленоподробное описание функционирования крыс при инсульте.При фокальной филаментной транзиторной 30-минутной церебральной ишемии у крыс пометодике Koizumi J., развиваются поведенческие нарушения и очаговый функциональныйневрологический дефицит в виде снижения силы, чувствительных и координаторных нарушений.Наблюдается регресс основных функциональных нарушений, которые постепенно регрессируютчерез 4 недели. То есть модель ишемии мозга у крыс по методике Koizumi J. позволяет получитьишемический инсульт с регрессом неврологических симптомов в течение месяца – «модельмалого инсульта».229Все изучаемые неврологические тесты и шкалы позволяют выявить и количественно оценитьфункциональный дефицит у крыс. Наиболее чувствительными и репрезентативными оказалисьтест с вытягиванием лапы («Placing test»), Бедерсон тест (Bederson test) и шкала Гарсия.Требуется разработка видоспецифичных для крыс тестов и шкал для оценки функциональногодефицита, основанных на видовых особенностях используемых лабораторных животных иобладающих высокой чувствительностью и специфичностью.230ГЛАВА 12.
АНАЛИЗ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ЖИВОТНЫХ (КФЖ) СРАВНЕНИЕМОДЕЛЕЙКак приведено выше нам было создана классификация, позволяющая описывать все аспектыфункционирования у животных. Полная классификация приведена в приложении 1. Длясравнениямоделейинсультанамипроанализированывседоступныеаспектыфункционирования.Всего для анализа из 1405 доменов КФЖ был выбран 421. Выбор был обоснован наличиеминструментов оценки (шкала Гарсия, mNN, Бедерсон тест и др.) и компетенций специалистов,позволяющих проводить оценку и наблюдение за животными без специальных инструментов.Так для наблюдения за животными было привлечено три специалиста с медицинскимобразованием и один с ветеринарным.
Все специалисты были обучены оценке состояния крыс сучетом видовых особенностей. Из всех выбранных доменов полноценное функционирование(норма для функции и структур, полное выполнение для активности и участия) было выявлено в266, а 155 были актуальны для выбранных моделей. Поскольку условия опыта были одинаковыдля двух моделей, факторы среды и персональные факторы при моделировании с применениемкак одной, так и второй модели были одинаковыми.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
