Диссертация (1174206), страница 39
Текст из файла (страница 39)
Для оценки использовалось максимальное из зарегистрированных значений.Нахождение максимального значения скорости при УЗ исследовании артерий мозга позволяеториентировать датчик таким образом, чтобы движение крови в сосуде было направлено надатчик. Нормальные значения систолической линейной скорости кровотока в б.ЛСМА имеютбольшой разброс данных и составляют 43 [32; 58] см/с. При полной окклюзии ЛСМАпроисходило снижение систолической линейной скорости кровотока до 3,2±1.2 см/сек, в конце216периода окклюзии скорость не изменялась и составляла также 3,2±1.3 см/сек. После удаленияфиламента из артерии кровоток восстанавливался до 36±11 см/сек, что значимо не отличалось отпоказателей до введения филамента.На выборке 352 крысы с фокальной филаментной ишемией по методике Koizumi J.
быливыявлены следующие причины, которые препятствовали полной окклюзии ЛСМА, либо привелик ситуации отсутствия реперфузия после удаления филамента:трудности введения филамента во ВСА на интракраниальном уровне из-за узкого входа вполость черепа;введение филамента не во ВСА, а в наружную сонную артерию;недостаточно глубокое введение филамента в артерию;перфорация стенки артерии при введении филамента на любом этапе исследования(Рисунок 40), которая приводит к формированию САК или внутримозговой гематомы;филамент имеет меньший диаметр, чем диаметр ЛСМА, что может потребовать заменыфиламента. Эмпирическим путем было определено, что использование крыс весом от 200до 250 граммов позволяет стабильно воспроизводить ишемический инсульт у крыс привведении изготовленных нами филаментов.
Отклонение от приведенных показателеймассы тела не позволяет получить полную ишемию мозга;высокая или низкая бифуркация сонных артерий, либо отсутствие бифуркации сонныхартерий (аномалии развития сосудов);разрыв ЛСМА, который приводит к САК или паренхиматозному внутримозговомукровоизлиянию (Рисунок 40). Эти осложнения операции часто приводят к сдавлениюЛСМА и отсутствию реперфузии, а через 24 часа инфаркт мозга занимает 100% б.ЛСМА;пристеночное тромбообразование приводит к блокированию реперфузии по ЛСМА послеизвлечения филамента. Через 24 часа инфаркт мозга также занимает 100% б.ЛСМА).217Рисунок 39 – УЗ Допплерограмма ЛСМА при различных вариантах филаментнойэндоваскулярной окклюзии ЛСМАA – полная окклюзия ЛСМА после введения филамента и реперфузия - восстановлениекровотока после извлечения филамента до исходного уровня;Б – неполная окклюзия ЛСМА – введение филамента требует коррекции либо животноедолжно будет исключено из дальнейшего анализа, так как ишемии не будет;В – отсутствие реперфузии по ЛСМА после извлечения филамента – животное должно бытьисключено из дальнейшего анализа, так как ишемический инфаркт мозга займет 100 % б.ЛСМА.Наложение клипсы на Введение Извлечение филамента левую ОСАреперфузияфиламента –окклюзия СМАаВведение филамента –не полная окклюзия СМАбИзвлечение филамента –отсутствие реперфузиив218Рисунок 40 - Ограниченное САК в основании мозга, вызванное разрывом ЛСМА при слишкомглубоком введении филамента.А.
Вид основания мозга крысы.Б. Срез мозга крысы, окрашенный ТТХ. Красным выглядит жизнеспособная ткань, а белогоцвета – зона ишемического инфаркта мозга, которая занимает целиком б.ЛСМА.219Использование УЗ допплерографии дает новые возможности для проведения болеекачественных исследований по моделированию церебральной ишемии. УЗ допплерографияможет быть использована для решения следующих задач в процессе исследования по методикеKoizumi J.: отобрать крыс для включения в опыт, проконтролировать степень полноты окклюзииартерий, исключить из эксперимента крыс с атипичным церебральным кровотоком иконтролировать стабильность показателей кровотока при окклюзии на протяжении всеговремени установки филамента.
Использование УЗ допплерографии позволяет получить большеданных о состоянии ишемии и способствует использованию меньшего количества крыс в опыте.Как показали наши исследования, модель церебральной фокальной полной транзиторнойишемии мозга у крыс по методике Koizumi J. также соответствует всем критериям моделиинсульта для проведения доклинических исследований в реабилитации, так как позволяетвоспроизвести стойкий однородный инфаркт мозга. Использование УЗ допплерографии(«Минимакс-Допплер-К», датчик 25 мГц) позволяет контролировать кровоток в мозге крысы иобеспечить воспроизводимость инфаркта мозга крысы со стабильным размером инфаркта мозга.11.5 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ТЕСТОВ ДЛЯ МОДЕЛИРОВАНИЯ ИШЕМИИМОЗГА У КРЫСНа рисунке 41 можно видеть зону ишемического инфаркта после окраски с применениемтрифенилтетразолия хлорида.
Она выглядит более светлой. При моделировании ишемииголовного мозга у крыс по методике Koizumi J. за счет филаментной 30-минутной окклюзииЛСМА повреждение преимущественно располагается в подкорковых структурах левогополушария большого мозга.Рисунок 41 - Зона ишемического повреждения головного мозга крысы через 48 часов после30-минутной окклюзии левой СМА по методике Коидзуми (ТТХ)220На первом этапе оценки производилось наблюдение и фиксация нарушений без примененияспециализированных шкал, но с использованием КФЖ в динамике. В результате наблюденияпосле выхода из наркоза у животных отмечались следующие нарушения «функций» иограничения«деятельности»:исчезновениевидовыхрефлексов(защитныйрефлекс,назодвигательный оборонительный рефлекс, назодвигательный ориентировочный рефлекс,компенсаторный позо-выравнивающий рефлекс при падении и другие) и очаговыеневрологические нарушения функций.На рисунке 42 представлены данные об очаговомневрологическом дефиците, оцененном с помощью КФЖ без использования шкал.
Очаговыйневрологический дефицит «функций» был представлен двигательными расстройствами(гемипарез или монопарез у 100% крыс опытной группы - b730 Функции мышечной силы),чувствительными нарушениями (гемигипестезия и гемигипалгезия у 100% крыс опытной группы- b265 Функция осязания и/илиb2703 Чувствительность к повреждающим стимулам),расстройства координации движений и равновесия (лобная атаксия у 100% крыс опытной группы- b760 Контроль произвольных двигательных функций) и снижением общей двигательнойактивности (у 75% крыс опытной группы - d4 Раздел 4 Мобильность). Более подробный анализфункционирования будет приведен ниже. Данная симптоматика соответствовала поражениюбассейна левой СМА у крыс. К 28 суткам после моделирования фокальной ишемииневрологическая очаговая симптоматика регрессировала более чем у 60% животных.
Такимобразом, модель 30 минутной филаментной окклюзии ЛСМА у крыс позволяет воспроизводитьишемический инсульт с регрессом функционального дефицита в течение четырех недель. Вгруппе сравнения (ложнооперированные крысы) также наблюдались снижение силы (на 2 суткиу 20% крыс), расстройство координации (на 2 сутки у 20% животных) и снижение активности (на2 сутки у 30% крыс).
Вероятно, снижение активности было связано с влиянием наркоза, адвигательные и чувствительные расстройства являлись результатом реакции животного напослеоперационную рану. К 14 суткам ни у одного животного группы ложнооперированных невыявлялось расстройств. Послеоперационные изменения не препятствовали оценке очаговыхневрологических расстройств.221Рисунок 42 - Нарушения и ограничения, возникающие у крыс, оцененные с помощью КФЖ ибез применения оценочных шкал и тестов в течение 4 недель после окклюзии ЛСМА на 30минут по методике Koizumi J.
в сравнении с ложнооперированными крысами222Рисунок 43 - Тест «хождение по балке» («Ledged Tapered Beam») [4АБ], тест установки позы(«Bracing test») [4ВГ], угловой тест (Corner test) [4ДЕ], тест с вытягиванием лапы («Placing test»)[4ЖЗ] у крыс в течение 4 недель после окклюзии ЛСМА на 30 минут по методике Koizumi J. всравнении с ложнооперированными крысами (* - p<0.05)********223Тест«хождение по балке» («LedgedTapered Beam») [Рисунок43АБ] позволилзарегистрировать двигательный дефицит в обеих задних конечностях крысы.
На 2-е сутки после30-минутной ишемии головного мозга имелось статистически значимое (р=0,001) отличие поколичеству промахиваний-баллов в правых задних конечностях от группы ложнооперированных- 4 (3; 8) и 0,5 (0; 2) балла, соответственно (Рисунок 43А). Однако была выявлена большаядисперсия данных в обеих группах и, несмотря на значимые статистические различия, визуальногруппы совпадают (разброс данных - 80%). А на 14 день после 30-минутной ишемии мозгастатистически значимой разницы между правыми задними конечностями в группахложнооперированных и ишемизированных крыс выявить не удалось (р=0,06).
Из-за большогоразброса данных и низкой чувствительности данный тест не позволил эффективно оценитьфункциональный (неврологический) дефицит при модели филаментной ишемии по методикеKoizumi J.При выполнении теста установки позы («Bracing test») [Рисунок 43ВГ] различий поколичеству шагов-баллов в левых («не пострадавших») конечностях на протяжении 28 днейисследования по сравнению с группой ложнооперированных не было выявлено (Рисунок 43В). Вправых конечностях («пострадавших») на 2-е сутки отчетливо выявляется значимое различие(p=0,006) по количеству шагов-баллов между опытной группой и группой ложнооперированных– 5 [2; 5,5] и 10 [7; 10] шагов-баллов, соответственно (Рисунок 43Г). На 7, 14, 21 и 28 днизначимость различий между этими группами сохранялась р=0,02, р=0,004, р=0,04 и р=0,006,соответственно.
Разброс данных через 48 часов после ишемии мозга составил 75%, чтопревышало разницу с группой сравнения. Однако большой разброс данных также препятствовалэффективному использованию теста.Использование углового теста («Corner test») в группе животных с ишемией мозга позволиловыявить, что количество поворотов головы было значимо больше (Рисунок 43Д и 43Е), чем вгруппе ложнооперированных крыс (р=0,0003).
Крысы на 2-е сутки после ишемии более активноповорачивали голову влево - «крыса смотрит на очаг» – 3 [1,5; 3,5] и 7 [6,5; 8,5], соответственно.По сравнению с группой ложнооперированных животных значимая разница сохранялась на 7 и14 дни (р=0,02 и р=0,03, соответственно). На 21 день по данному показателю животные в двухгруппах не отличались. Разброс данных в опытной группе через 48 часов составил 65%, чтопревышало разницу между этой группой и группой ложноперированных крыс (49%).Тест с вытягиванием лапы («Placing test») позволил оценить слабость мышц передних лап. Приоценке поражения левой стороны тела - значимой разницы между группами животных не былополучено (Рисунок 43 з).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
