Диссертация (1174202), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Относительное количество лимфоцитов венознойкрови в процессе апоптоза определяли с помощью Annexin V-FITC/7AAD Kit.Одновременное окрашивание клеток витальным ДНК-специфичным красителем 7амино-актиномицином D (7AAD) позволяло дифференцировать клетки на раннихстадиях апоптоза (Annexin V+/ 7AAD–, ранний апоптоз) от клеток, уже погибшихв результате апоптоза (Annexin V+/ 7AAD+, поздний апоптоз) [508, 511]. Определение числа погибших лейкоцитов осуществляли с помощью витального красителя 7AAD [427] и моноклональных антител CD45 (панлейкоцитарный маркер), меченных FITC [514], и выражали в количестве клеток в литре и в процентах.
Референтную группу составили 40 доноров крови в возрасте от 20 до 45 лет.Для повышения точности оценки результатов работы объем иссследования гемореологических показателей и показателей клеточного компонента токсемии былрасширен за счет обследования до лечения, проводимого указанными выше методами, всех больных, не ограничиваясь группой сравнения.ЭндотоксикозЭндогенную интоксикацию (ЭИ) оценивали по уровню фракций среднемолекулярных пептидов (СМП254 и СМП280) в сыворотке крови, которые определяли пометоду Н.И.
Габриэлян [98], рассчитывая при этом коэффициент распределения(КР) – отношение СМП280/СМП254, а также по общей и эффективной концентрацииальбумина (ОКА, ЭКА) с помощью флюоресцентного зонда К-35 на приборе «АЛК01-ЗОНД».Связывающую способность альбумина, отражающую гидрофобный компонент токсичности, исследовали по методу Ю.А. Грызунова и соавт. (1994) [11, 339].Удельный показатель резервной связывающей способности альбумина(РССА) рассчитывали по формуле:РССАД (%) = ЭКА (г/л)/ОКА (г/л)100%По мнению ряда авторов он свидетельствует о доле центров альбумина всыворотке, которые не блокированы метаболитами или токсинами [11].91Абсолютный показатель РССА вычисляли по формуле:РССАФ (г/л) = ОКА (г/л) – ЭКА (г/л), что соответствует определению блокированного токсичными лигандами альбумина [339, 393].Определяли гематологический индекс интоксикации – по лейкоцитарномуиндексу интоксикации (ЛИИ), индексу сдвига нейтрофилов (ИСН) [138, 139].
Определяли коэффициент эндогенной интоксикации (КЭИ), отражающий независимыйпроцесс образования гидрофильных токсикантов и транспорта гидрофобных токсикантов и свидетельствующий о балансе между выработкой и элиминацией токсичных продуктов, рассчитывается с учетом уровня в крови СМП и ЭКА по формуле: КЭИ = (СМП/ЭКА) × 1000 (норма 4,9±0,31), который отражает баланс междувыработкой и элиминацией токсичных продуктов [418].МикробиоценозНарушения микробиоценоза кишечника определяли классическим бактериологическим методом.
Оценку проводили по содержанию микроорганизмов в толстойкишке. Взятие фекалий проводилось в стерильную герметически закрывающуюсяпосуду. Пробу для исследования брали из средней или последней порции фекалий.Время от момента взятия материала до его обработки не превышало 1,5–2 часа. Исследование проводили согласно приказу МЗ РФ № 231 от 9 июня 2003 г. «Об утверждении отраслевых стандартов»: по установленному протоколу ведения больных сдисбактериозом кишечника [317].Для оценки степени нарушений просветной микрофлоры толстой кишкииспользовали классификацию дисбактериозов, предложенную А.А. Воробьевым(2004) [37], согласно которой 1-я степень характеризуется снижением содержаниябифидо- и/или лактобактерий менее 106 КОЕ/г фекалий либо повышением количества E. Coli>108 КОЕ/г фекалий; 2-я степень обусловлена наличием одного видаусловно-патогенной флоры в концентрации 105 КОЕ/г фекалий либо ассоциацииусловно патогенных микроорганизмов 103-104 КОЕ/г фекалий; при 3-й степени –обнаруживается один вид условно-патогенных микроорганизмов или ассоциациив высоких титрах.92Иммунный статусИммунологические исследования включали определение в крови абсолютного и относительного содержания T- и B-лимфоцитов [469], концентрацию иммуноглобулинов A, M и G в сыворотке крови [476], состояние фагоцитоза по латекс- и НСТ-тестам [28, 389] и содержание в крови ЦИК, в том числе БЦИК,СЦИК, МЦИК [235].2.2.3.
Исследование нейропсихологического состоянияи функциональных изменений головного мозгаДля оценки функционального состояния головного мозга проводили ЭЭГ, адля оценки когнитивных функций использовали метод слуховой, связанный с событием потенциал (ССП) и комплекс психологических тестов.Слуховой, ССП регистрировали соответственно международной схеме 10–20 % с расположением референтных электродов на мочках ушей с каждой стороны. ЭЭГ, а также слуховой ССП записывали на установке «Нейрон-Спектр –5/ВП» фирмы “НейроСофт” (Иваново, Россия). Была проведена компьютернаяобработка полученных данных с вычислением мощности частотного спектра ипостроением топографических карт основных ритмов ЭЭГ. Проводился частотноспектральный анализ с использованием быстрого преобразования Фурье.
Для локализации эквивалентных дипольных источников (ЭДИ) патологической активности использовалась программа “BrainLoc” (Россия). Анализировали эквивалентные источники с коэффициентом дипольности 95 и выше.Для оценки когнитивных функций использовали метод слухового ССП икомплекс нейропсихологических тестов: краткую шкалу оценки психическогостатуса (MMSE), батарею тестов для оценки лобной дисфункции (БЛД), тестМюнстерберга, тест вербальных ассоциаций, тест связи чисел (вариант А); таблицы Шульте и тест рисования часов.93Связанные с событиями потенциалы мозга представляют собой широкий классэлектрофизиологических феноменов, которые специальными методами выделяютсяиз «фоновой», или «сырой» электроэнцефалограммы (ЭЭГ).
Колебания (компоненты) ССП отражают специфические функции структур мозга, которые реализуют соответствующие психические функции, т.е. имеют определенное функциональноезначение. При записи слухового ССП звуковые стимулы двух тональностей подавали в случайном порядке согласно традиционной парадигме (odd-ball paradigm) смежстимульным интервалом 1 с через наушники одновременно на оба уха. Пациентам предлагали считать звуки более высокого тона, которые предъявлялись реже вслучайной последовательности (соотношение значимого/незначимого стимулов –1:4). Продолжительность подачи стимула – 50 мс; интенсивность стимула (значимого и незначимого) – 80 дБ (SPL); частота наполнения для незначимого стимула –1000 Гц, для значимого стимула – 2000 Гц.
Нижняя полоса пропускания частот усилителя – 0,5 Гц, верхняя полоса пропускания – 75 Гц, эпоха анализа – 950 мс. Усреднялось 100 ответов. Анализировали: компоненты N100, P200, N200, P300 ССП. Уэтих компонентов измеряли пиковые латентности, амплитуду и их межполушарнуюразницу. При описании ЛП компонентов N200, P300 ССП незначительными изменениями считали показатели, не превышающие 255 мс для компонента N200 и 355 мсдля компонента Р300; умеренными – 280 мс для компонента N200, 380 мс – для компонента Р300; выраженными изменениями считали показатели, превышающие 285мс для компонента N200 и 385 мс для компонента Р300 [454, 493, 494].Тест связи чисел: Психометрическое тестирование используется для выявления латентной печеночной энцефалопатии и объективизации психических нарушений при ПЭ I и II стадии.
Выделяют тесты, направленные на определениебыстроты познавательной деятельности (тест связи чисел и тест число-символ), итесты для определения быстроты и точности тонкой моторики (тест линий и тестобведения пунктирных фигур).С помощью приведенного ниже теста связи чисел оценивается способность ксовершению когнитивных движений.
При выполнении теста необходимо последовательно соединить линией числа от 1 до 25, без отрыва руки, как можно быстрее и94стараясь не совершать ошибок. Балльной оценкой теста является время, затраченноена его выполнение, включая время, необходимое на исправление ошибок [75].- Батарея тестов для оценки лобной дисфунции:1. Концептуализация (функция обобщения).2.
Беглость речи.3. Динамический праксис.4. Простая реакция выбора.5. Усложненная реакция выбора.6. Исследование хватательных рефлексов.Максимальный показатель данного теста – 18 баллов [398, 449].При исследовании нами также были использованы следующие нейропсихологические тесты [145].- таблицы Шульте: таблицы, разработанные немецким психиатром Вальтером Шульте в середине ХХ века, представляют собой набор из карточек с изображёнными вразброс цифрами. Задача испытуемого – назвать все элементы в правильном порядке, показав на них указкой или, если удобно, зачеркнув карандашом.
Традиционныйвариант стимульного материала представляет собой 5 таблиц 60 х 60 см, выполненныхна плотной бумаге. Каждый лист должен быть поделён на 25 квадратов со вписаннымив них числами от 1 до 25. Диагностика помогает исследовать: устойчивость внимания;эффективность самостоятельной работы; психическую устойчивость; скорость ориентировочно-поисковых движений взгляда; объём внимания. Методика направлена натренировку и расширение периферического зрения.– тест Мюнстерберга – психодиагностический тест, направленный на определение избирательности и концентрации внимания, а также высокой помехоустойчивости.
По методике: среди буквенного текста имеются слова. Задача какможно быстрее считывая текст, выделить эти слова. Время работы — 2 минуты.Для оценки динамики функциональной активности структур и систем головного мозга обследовано 56 больных с оНТ. Основную группу составили 40 человек (возраст 37 (16; 61)), для лечения которых использовали ЭП (10 человек), а также комбинацию ЭП с МДМ (10 человек), ГБО (10 человек), а также МДМ и ГБО (10 человек).95Группу сравнения составили 16 человек (возраст – 36 (26; 65)), которые получали только базовую терапию.Исследования проводили в реабилитационном периоде отравления до начала лечения и после его окончания.2.2.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
