Диссертация (1155054), страница 4
Текст из файла (страница 4)
фрагмент катарантина (индольный фрагмент)Б. фрагмент виндолина (индолиновый фрагмент)В результате содержания индольного фрагмента в структуре молекулы ТИА C.roseus обладают слабоосновными и в то же время слабокислыми химическимисвойствами. В фармацевтическом производстве VCR и VLB используются в видесолей. Изолируемые VCR сульфат и VLB сульфат являются белыми или слегкажелтоватымикристаллическими,оченьгигроскопичнымипорошками(B.Ph.2013; E.Ph.8.; J.Ph. XVII) (таблица 1.2).Оптические свойства VCR и VLBВ соответствии с химической структурой VCR и VLB являются оптическиактивными веществами.
Определение физико-химических констант, таких как угол вращения плоскости поляризация ([ ] ), показатель преломления, УФспектр и ИК- спектр поглощения могут давать информацию, которая является20дополнительным доказательством идентичности и чистоты образцов (таблица1.3).Таблица 1.2. Химические свойства VCR сульфата и VLB сульфатаФизикохимические свойстваЭлементныйcоставОписаниеРастворимостьМ.м (г/моль)pH раствораVCR сульфатVLB сульфатC- 59,86%; H- 6,33%; N- 6,07%; SC - 60,78%; H - 6,65%; N 3,47%; O- 24,27%6,16%; S - 3,53%; 0 - 22,88%Белый или слегка желтоватый кристаллический порошокОчень легко растворимы в вводе, практически не растворимы в спиртах923,05909,06(50 мг /10 мл дис.
воды) 3,5 – 4,5(50 мг /10 мл дис.воды ) 3,5 – 5,0Таблица 1.3. Физико-химические свойства VLB и VCRФизико-химические константы[ ]Тпл С0Константы диссоциации pKaVLB sulfate- 280 ~ - 350(C= 1,01, метанол)(J.Ph XVII. pp. 1762)284-2857,4VCR sulfate+ 8,50(C= 1.01, метанол)+28.50 ~ +35.50 - (0,2 г в10 мл H2O, L-100 мм)(J.Ph XVII.
pp. 1764)273-2817,4 (в 33% ДМФА)Американская, Британская, Европейская, Японская и международная фармакопеи рекомендуют использовать УФ- и ИК-спектральные характеристики чистыхсубстанций VCR сульфата и VLB сульфата для идентификации и установленияподлинности препаратов (B.Ph. 2015, pp.1158-1159; E.Ph 8, pp.3536-3537; J.PhXVII,pp.1762-1765l;Ph.Int.72017,http://apps.who.int/phint/2017/index.html#d/b.6.1.357).1.2.3.
Методы качественного и количественного определения ТИА препаратов из C. roseus1.2.3.1. Методы выделения и идентификации ТИАВ настоящее время бисиндольные алкалоиды Катарантуса в основном получают экстракцией и очисткой листьев C. roseus. Для изолирования C. roseus21алкалоидов используют различные методы.
Некоторые методы экстракции былиинтенсивно оптимизированы, а несколько методов были запатентованы. Например, надземные части C. roseus могут экстрагировать водой, затем полученныйводный экстракт концентрируют, а далее экстракция проводится органическимрастворителем, например, этилацетатом [111; 243]. Полученный концентрат богат катарантином, виндолином и ангидровавинбластином. В промышленноммасштабе в основном применяются два различных направления, один из них —это использование обычной схемы методом экстрагирования и изолирования,второй – это использование полусинтетических или биомиметических реакций,сопряжением мономеров в качестве исходного материала [29;31;39].
В последние годы вырос в популярности новый метод экстракции, называемый кавитационной экстракцией с отрицательным давлением (NPCE- Negative-PressureCavitation Extraction) [25]. NPCE более эффективен при постоянных низких температурах и интенсивностях, чем классические экстракционные технологии, такие как экстракция путем мацерации, тепло-рефлюкс экстракции и ультразвуковая экстракция [25].VCR в виде солей получают добавлением водной или этанольной сернойкислоты к раствору VCR в этаноле или ацетоне. Полученную смесь выпариваютв вакууме и остаток кристаллизуют из абсолютного этанола с получением кристаллов VCR сульфата.1.2.3.2. Методы анализа ТИА (VCR и VLB)1.2.3.2.1. Методы установления подлинностиВ фармацевтическом производстве VCR и VLB экстрагируют в виде их солей.
Для качественного анализа VCR и VLB, так как они являются алкалоидами,можно использовать общие алкалоидные реакции (таблица 1.4).Цветные реакции для идентификации VCR и VLB К 1,0 мг VCR сульфата добавляют 0,2 мл свежеприготовленного 1% раствораванилина в хлористоводородной кислоте. Оранжевый цвет получается примерночерез 1 минуту (отличие от VLB сульфата – розовый цвет) [49; 265].22 0,5 мг VCR сульфата растворяют в смеси 5,0 мг 4-диметиламинобензальдегидас 0,2 мл ледяной уксусной кислоты, затем добавляет 0,2 мл серной кислоты и получается красновато-коричневый цвет. При добавлении 1,0 мл ледяной уксуснойкислоты цвет меняется на розовый [49; 265] (VLB сульфат также дает идентичный результат). VCR с 1,0 % раствором сульфата церия аммония в 85% фосфорной кислотеобразует синевато-фиолетовое окрашивание [128]. VCR с 1,0 % раствором сульфата железа (III) в 75%-ной серной кислоте образует синий цвет, который меняется на серо-синий.
При использовании 1,0 %сульфата железа (III) в 85% фосфорной кислоте образуется розовый цвет посленагревания на водяной бане в течение 10 минут [49; 265]. VLB c 1,0 % сульфатом железа (III) в 85% фосфорной кислоте образует пурпурный цвет. VCR и VLB с реактивом Драгендорфа образует оранжевым осадок [49; 265].Некоторые из вышеперечисленных реакций неспецифичны по отношениюк VCR и VLB (ванилин является реагентом для обнаружения фенолов, в то времякак 4-диметиламинобензальдегид чувствителен к ароматическим аминам). Результаты последующих исследований сорбционных свойств у алкалоидов из C.roseus исследователи использовали для разработки метода их идентификации наоснове тонкослойной хроматографии (ТСХ).Таблица 1.4. Некоторые цветные реакции для идентификации VCR и VLBНазвание C.roseus алкалоидаVLBVCRLeurosineVindolineCatharanthineReserpineIsoleurosine1% Аммоний церий(IV) сульфат + 85%H3PO4(После нагревания 10мин на водяной бане)ПурпурныйСине-фиолетовыйРозовыйФиолетовый (сильный)Индиго зеленыйНебесно-голубой желтыйМедныйРеагент1,0 % раствор сульфата железа (III) в75%-ной сернойкислотеСинийСиний сероголубойЖелтый зеленыйФиолетовый(сильный)Сине-фиолетовыйCиний зеленыйЗеленый синий1,0 % раствор аммонияжелеза (III) сульфата +85% H3PO4 (Посленагревания 10 мин наводяной бане)ФиолетовыйРозовыйБледно-желтыйСеро-голубойЖелтыйЛимонно-желтыйЖелто - оранжевый231.2.3.2.2.
Методы количественного определенияТитриметрические методыСуществуют литературные данные, которые демонстрируют возможностиприменения метода неводного титрования для количественного определенияVCR сульфата и VLB сульфата. В качестве титранта применяется 0,1 М растворхлорной кислоты (HClO4) в среде ледяной уксусной кислоты и индикатором является кристалический фиолетовый [49].Электро-химические методыВольтамперометрический метод определения VCR основан на ультрачувствительном вольтаметрическом измерении, на основе сочетания каталитических систем водорода с контролируемым межфазным накоплением катализатора.Объединив адсорбционную вольтамперометрию с каталитическим водородом,изменение платины (Pt) можно измерить с пределом обнаружения ~1×10-12 M.Поддерживающий электролит (1,08 M раствор H2SO4) состоит из 0,04% раствораформальдегида и 0,001% раствора гидразина.
Адсорбция комплекса Ptформазона (катализатора) приводит к определенному каталитическому H-пикупри - 0,92 с пиковой полушириной 60 мВ. С применением данного метода, используя 0,25 М аммиачный буфер (рН 9,3), VCR и VLB можно определить науровне субнаномоля [49].Спектральные методыДля количественного определения некоторых алкалоидов C. roseus сушествуют колориметрические и флуориметрические методы. Колориметрическийметод определения VCR сульфата основан на цветных реакциях с реагентом, состоящим из пиридина (35,0 мл), концентрированной серной кислоты (1,0 мл), уксусного ангидрида (35,0 мл) и 0,05% ацетилхлорида, образуется розовый цветпри нагревании до 80 °С.
Полученный таким образом цвет раствора измеряетсяпри длине волны 574 нм на спектрофотометре. Этот метод можно применятьдля количественного определения неизвестного содержании VCR с применением24стандартных растворов VCR, концентрация которых предварительно известна[127; 128].1.2.4. Методы анализа C. roseus алкалоидов VCR и VLB in vivo и in vitroВ фитохимических исследованиях C. roseus применяются различные аналитические методы: ВЭЖХ [244], ВЭЖХ-УФ, ВЭЖХ-МС, ВЭЖХ-ЭХ,УЭЖХ, ТСХ,ГХ, спектральные методы (УФ, ИК), МГС, ЖХ/МС-ВР, Электрофорез и др.
длякачественного и количественного определения химических веществ. В данныймомент идентифицировано большинство веществ, которые содержатся в экстракте C. roseus и установлена их химическая структура.1.2.4.1. Физико-химические методы определения ТИА VCR и VLBХроматографические методы1.2.4.1.1. Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ)Бумажная хроматография была когда-то широко используема для анализафлавоноидов, алкалоидов и др. фитохимических соединений, но в настоящеевремя более предпочитаемым методом является ТСХ в виду его простоты и низкой себестоимости. Преимущества этого метода хорошо известны: короткоевремя разделения, аменабельность для обнаружения реагентов, а также возможность запуска нескольких образцов одновременно.
ТСХ также идеально подходит для предварительного определения химических веществ в растительных экстрактах перед анализом ВЭЖХ. Для улучшения разрешения хроматографирования ТИА методом ТСХ используют ВЭТСХ-пластины с силикагелем 60F254,RP-18 или, реже, пластины диоля.ТСХ применяется для идентификации и количественного определения алкалоидов C. Roseus, в том числе для VCR и VLB. В зарубежных фармакопеях:(USP, E.Ph., B.Ph., J.Ph. в поздних изданиях., Int.Ph.
2017) ТСХ рекомендованадля установления подлинности VCR и VLB. Кроме фармакопейной рекомендации существует много источников информации о применении метода ТСХ дляанализа VCR и VLB. Следующие системы ТСХ были использованы в разных источниках для идентификации и отделения VCR (таблица 1.5).25Таблица 1.5. Некоторые подвижные фазы, применяемые в ТСХ для обнаруженияТИАНеподвижная фазаПодвижная фазаЗначение RfИсточник0,5 н LiOH / оксидалюминияSilica gel HF 254Абсолютный спирт-ацетонитрил (5: 95)0,51[49]Толуол-хлороформ-диэтиламин (80: 40:6)Толуол-метанол-диэтиламид (8,75: 0,75:0,5)Эфир: метанол: метиламин (19: 2:1)-BPh. 19980,39[221]Сравнить состандартнымраствором-USP 2011Silica gel 60 F254Смесь Silica gelSilica gel R4Silica gel GТолуол-хлороформ-диэтиламин (80: 40:6)метанолН-Бутанол-ледяная уксусная кислотавода (4: 1: 1)Метанол: хлороформ (95:5)Этилацетат - абсолютный спирт (3: 1)Int.Ph.20170,390,16[49][49]0,160,18[49][49]Для разделения VCR с другими димерными алкалоидами Катарантуса была рекомендована методика двухступенчатого хроматографирования на пластинках оксида алюминия.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
