Диссертация (1155054), страница 2
Текст из файла (страница 2)
- Британская фармакопея7C. roseusChol- Катарантуса розового (Catharanthus roseus (L.) G. Don)- холестерин (cholesterol)E.Ph. - Европейская фармакопея (European Pharmacopeia)EPR-эффект- эффект повышенной проницаемости и удерживанияEry- эритроцитыFA- фолиевая кислота (folic acid)J.Ph.- Японская фармакопея (Japanese Pharmacopeia)PBS- Натрий-фосфатный буфер (phosphate buffered saline)USP-NF- Фармакопеи США (USP) и национальный формуляр (the United StatesPharmacopeia and the National Formulary)VCR - винкристин (vincristine, син: leurocristine)VLB- винбластин (vinblastine, син: vincaleucoblastine)VNB - винорелбин (vinorelbine)8ВВЕДЕНИЕАктуальность темы. Противоопухолевые препараты растительного происхождения винкристин и винбластин (VCR и VLB), которые относятся к терпено-индольным алкалоидам (ТИА), обладают высокой цитостатической активностью. Их низкое избирательное действие на опухоль приводит к воздействию лекарственных средств (ЛС) на многие здоровые органы и ткани в организме пациента.
В противоопухолевой химиотерапевтической практике VCR и VLB применяются в моно- и комбинированных режимах и схемах при лечении различныхраковых заболеваний. Несмотря на их эффективность, имеется ряд побочныхэффектов, которые ограничивают применения этих препаратов. Цели современной фармацевтической науки и производства направлены на улучшение фармакокинетического профиля ТИА препаратов для: уменьшения побочного действия, создания целенаправленной доставки ТИА препаратов через контролируемые системы доставки ЛС (СДЛС), использование нанотехнологий в созданииновых видов лекарственных форм (липосомальные формы, мицеллы, микрочастицы, наночастицы) и др.
Актуальным направлением исследований являетсяпоиск и разработка путей уменьшения нежелательных эффектов ТИА препаратов в организме, а также улучшение переносимости и эффективности химиотерапии.Степень разработанности темы исследования. В течение последних нескольких десятилетий технология, контролирующая доставку ЛС, существеннопродвинулась, что приводит к развитию различных способов для улучшения качества доставки ЛС. При этом очень важное значение имеет разработка методикдля их стандартизации и контроля качества.
В литературе в настоящее время отражены основные аспекты теории и практики направленного транспорта лекарственных веществ, рассмотрены поколения лекарственных форм, с помощью которых осуществляется доставка лекарственных веществ к органу-мишени.
Одними из самых эффективных и доступных для применения (безопасность, техническая простота, быстрое достижение клинических результатов при относитель9но низкой себестоимости проводимых процедур) представляются методынаправленного транспорта ЛС, предполагающие использование аутологичныхклеток крови в качестве переносчиков препаратов. Большинство рассмотренныхметодов пока находится на стадии разработки и некоторые методы постепеннонаходят практическое применение за рубежом в медицине и др.
областях. Cуществует возможность использования клеточных носителей (КН) в качестве системы доставки VCR и VBL. В научных публикациях пока отсутствуют данные оприменении КН для инкапсулирования VCR и VBL. Поэтому актуальны исследования, посвящённые возможности применения КН для уменьшения побочныхэффектов, улучшения эффективности и разработки лекарственных форм доставки VCR и VBL в патологические очаги.Цель исследования. Цель работы – получение, стандартизация и изучениесвойств эритроцитарных носителей, инкапсулированных терпено-индольнымиалкалоидными противоопухолевыми препаратами.Задачи исследования:1.
Разработать спектрофотометрическую методику качественного и количественного определения VCR и VLB в субстанциях и лекарственных формах.2. Получить стабильные инкапсулированные эритроцитарные формы VCR иVLB с применением модифицированного метода гипотонического лизиса спредварительным набуханием.3. Разработать методику количественного определения VCR и VLB в клеточных формах после предварительной очистки биоматериалов с помощью гельхроматографии, позволяющую стандартизовать их по содержанию действующего вещества.4. Исследовать возможности увеличения эффективности «загрузки» противоопухолевых препаратов VCR и VBL при получении иммобилизованных клеточных форм данных лекарственных веществ.5.
Изучить особености морфологии и физико-химических свойств ЭН после загрузки их ТИА.106. Установить устойчивость клеточных форм VCR и VLB при хранении, а также степень десорбции и кинетику высвобождения ТИА в аутологичной плазме иизотоническом буфере.7. Определить оптимальные условия и сроки хранения полученных клеточныхэритроцитарных форм VCR и VLB.Научная новизна. Разработанной модифицированной методикой гипоосмотического лизиса были впервые получены клеточные (эритроцитарные) формы противоопухолевых алкалоидов VCR и VLB.
Разработаны новые УФспектрофотометрические методики идентификации и количественного определения эритроцитарных форм VCR и VLB в субстанциях и лекарственных формах. Установлены биофармацевтические характеристики ТИА препаратов (способность связываться с компонентами плазмы и форменными элементами крови). Установлены оптимальные условия изолирования изучаемых алкалоидов избиологического материала. Изучены эффективность включения ТИА (VCR иVLB) в эритроцитарные носители и влияние различных факторов на данный показатель.
Исследованы физико-химические параметры ТИА инкапсулированныхэритроцитов после процесса инкапсулирования. Определены характеристикивысвобождения инкапсулированных препаратов из эритроцитов, оптимальныеусловия и сроки хранения полученных клеточных носителей.Теоретическая значимость работы. Полученые клеточные формы алкалоидов VCR и VLB представляют интерес для противоопухолевой терапии какперспективные лекарственные системы для внутривенного введения. Применение таких систем значительно снижает их расход для достижения необходимоготерапевтического эффекта вследствие улучшенной фармакокинетики, а такжепотенциально снижает риск побочных эффектов за счет направленной доставкисубстанций, обладающих цитостатическими свойствами.
Экспериментальнообоснована возможность использования эритроцитарных носителей в качествесистемы доставки изучаемых лекарственных веществ (VCR и VLB). Определеныоптимальные условия для инкапсулирования ТИА препаратов в эритроцитах.11Практическая значимость. Полученные клеточные носители с загруженными ТИА препаратами потенциально обладают возможностью для клинических применений. Масштабное производство лекарственных форм на основеТИА инкапсулированных эритроцитарных носителей возможно с применениемразработанной методики с системой «EryDex» (от компании «EryDel SPA», Италия) для применения в клинике. Возможность получения лиофилизированныхформ ТИА инкапсулированных ЭН для продления срока годности ЭН.
Существуют определенные возможности для пролонгированного действия ТИА препаратов за счет более длительного времени поддержания высокой концентрациив плазме (до 6 ч, по сравнению со свободным в\в введением препаратов (1-1,5 ч).Основные положения, выдвигаемые на защиту:- Результаты качественного и количественного определения VCR и VLB в субстанциях и лекарственных формах с применением разработанной спектрофотометрической методики;- Результаты изучения возможности получения стабильных эритроцитарныхформ, инкапсулированных VCR и VLB, с применением модифицированного метода гипотонического лизиса с предварительным набуханием;- Результаты количественного определения VCR и VLB в полученных клеточных формах препаратов после предварительной очистки биоматериалов с помощью гель-хроматографии с применением разработанной методики;- Результаты исследования возможности увеличения эффективности «загрузки»противоопухолевых препаратов VCR и VBL в клеточные носители при использовании сред для инкубации, модифицированных различными агентами (ПЭГи,ДМСО и АТФ);- Результаты оценки морфологии и физико-химических свойств, полученных вработе эритроцитарных носителей после загрузки их ТИА;- Результаты изучения устойчивости клеточных форм VCR и VLB при хранении,степени десорбции и кинетики высвобождения ТИА в аутологичной плазме иизотоническом буфере;12- Обоснование оптимальных условий и сроков хранения полученных клеточныхэритроцитарных форм VCR и VLB.Методология и методы исследования.
Теоретическую основу исследования составили труды российских (Шварцбург Б.И, Кленнин В.И, Ивонин А.Г.,Петровна Г.Т., Кулапина О.И., Шейко Л. М и др.) и зарубежных (Mauro Magnanni, Ihler G. M., Pierigè F., Sun Y., Eva P., Hisiger S., Owellen R. J., Sethi V. S., VillaC. H. et al.) исследователей, развивающих различные подходы к получению истандартизации новых систем адресной доставки ЛС с большим количеством системных побочных эффектов.
Методология исследования заключалась в разработке эффективного, экономичного и экспрессного метода для исследованияТИА препаратов в биоматериале, определении экономически выгодного способаувеличения эффективности инкапсулляции исследуемых ЛС в клеточные носители, демонстрации возможности использования эритроцитарных форм в качестве системы доставки ТИА (VCR и VLB), а также рекомендаций по условиямхранения и срокам годности полученных новых клеточных форм известных противоопухолевых препаратов.
При выполнении работы были использованы методы сравнительного, документированного анализа; комплекс физико-химическихметодов, технологических испытаний; математические методы анализа и обработки результатов.Достоверность научных положений и выводов. Все полученные результаты и выводы, сделанные из них, основаны на достаточном количестве экспериментальных исследований. В работе использовалось сертифицированное оборудование, на которое выданы действующие свидетельства о поверке. Разработанные методики валидированы. В исследовании использован достаточный объем литературных источников отечественных и иностранных авторов.Апробация работы. Основные результаты исследования доложены наконференциях: 6-ая международная научно-методическая конференция «Фармобразование-2016»(Воронеж,2016),7-аямеждународнаянаучно-методическая конференция «Фармобразование - 2018» (Воронеж, 2018),13VIII Всероссийскаясмеждународнымучастиемконференция«Физико-химические процессы в конденсированных средах и на межфазных границах —ФАГРАН-2018» (Воронеж, 2018).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
