Диссертация (1154882), страница 9

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 9)

Исследователь убеждается вотсутствии противопоказаний для проведения основной манипуляции наследующем визите.Визит 1 (манипуляция) Продолжительность Визита 1 зависит от времени,необходимогоназаборжировойтканиивыделениеаутологичныхрегенеративных клеток, а также продолжительности самой манипуляции(интраартикулярное введение аутологичных регенеративных клеток жировойткани).До проведения премедикации проводится физикальное обследование(пульс, артериальное давление, наличие сопутствующих заболеваний).

Затемвыполняется процедура получения жировой ткани и выделение регенеративныхклеток.52Забор биоматериала. Жировая ткань забирается методом стандартнойшприцевой туменесцентной липосакции. Липосакция проводилась в условияхчистойперевязочной.Областьзаборажировойтканипредварительноинфильтрировалась раствором Кляйна содержащим адреналин, лидокаин ифизиологический раствор через инфильтрационную канюлю диаметром 2 мм,длиной 30 см.

Время экспозиции жировой ткани в туменесцентной жидкостисогласно стандартным рекомендациям составляло 30-40 минут. В качестведонорских зон чаще всего выбирались передняя брюшная стенка, фланковыеобласти и бедра. Липосакцию выполняли канюлей длиной 250 мм, диаметром2,5 мм, с 14 отверстиями диаметром 1,5 мм. Липоаспират собирался встерильные шприцы объемом 50 мл, в которых производилось его отстаиваниедо полного разделения на фракции. Объем жировой ткани составлял 150 (110150) мл. После удаления жидкой фракции шприцы с жировой тканьюупаковываливстерильныепакеты,ипомещаливтранспортныйтермоконтейнер вместе с сопроводительной документацией. Транспортировкуосуществляли при комнатной температуре в течение 30 минут.Получение аутологичных регенеративных клеток жировой ткани.

Вусловиях ламинарного шкафа жировую ткань переносили из шприцев встерильную одноразовую емкость и промывали 3 раза раствором Хартмана(Hemofarm, Сербия).Для ферментативной обработки в емкость добавляли 0,15% растворколлагеназы 2 типа (Sigma, США) в количестве, равном объему отмытойжировой ткани. Емкость закрывали крышкой и инкубировали на шейкере втечение 30 минут при 370С. В дальнейшем полученную суспензию клетокфильтровали через сито с диаметром пор 100 мкм, переносили в стерильныепробирки и 3 раза отмывали от коллагеназы раствором Хартмана споследующим центрифугированием в течение 7 минут при 300g. Затемклеточный осадок растворяли в 5 мл раствора Хартмана и отбирали 0,5 мл дляпаспортизации образца.

Оставшиеся 4,5 мл суспензии клеток переносили встерильный шприц, который маркировали и помещали в стерильную53вторичную упаковку. Полученный клеточный продукт транспортировали втечение 30 минут в термоконтейнере при комнатной температуре.ВнутрисуставноеположениипациентавведениеСВФ.Манипуляциюлежаспине.Посленапроизводилитрехкратнойвобработкиоперационного поля (области коленного сустава, нижней трети бедра и верхнейтретиголени)растворамиантисептиков(йодинол,спирт),выполнялианестезию кожи и подкожной клетчатки в нижне-латеральной областиколенного сустава 2,0 мл 0,5% раствора новокаина.

Далее через прокол нижнелатеральным доступом иглой 20G (0,9*70 мм.) в наружный отдел полостиколенного сустава производили введение 4,5 мл суспензии СВФ. ПослеудаленияиглынакладывалиДополнительнуюасептическуюиммобилизациюнеификсирующуюпроводили.Пациентповязки.соблюдалограничительный режим физической активности в течении 7 дней с моментавведения, далее вел привычный для него образ жизни.Паспортизация образца СВФ. Паспортизация образцов производилась всоответствии с разработанной Стандартной операционной процедурой ивключалавсебяобязательноеописаниеобщегочислаклеток,жизнеспособности и субпопуляционного состава.Подсчет клеток проводили по стандартной методике с использованиемгемоцитометраиокраскойтрипановымсинимдляопределенияжизнеспособности.

Общее число ядросодержащих клеток составляло 36 (22-54)млн, жизнеспособность более 92%. Количество выделенных клеток на единицуобъема жировой ткани составило 0,273(0,207-0,400) млн/мл.Для определения субпопуляционного состава полученных клеточныхпродуктовсуспензиюклетококрашивалифлюорохромномеченымиантителами к поверхностным маркерам (CD3, 4, 14, 31, 34, 45, 90, 105, 146, все Becton Dickinson, США) в соответствии с инструкциями производителя. Затемпроводили иммунофенотипирование образцов на проточном цитометре BDFACS CantoII (Becton Dickinson, США).54Визит 2 (через 1 неделю), Визит 3 (через 4 недели), Визит 4 (через 8недель), Визит 5 (через 12 недель), Визит 6, заключительный (через 24 недели)после интраартикулярного введения аутологичных регенеративных клетокжировой ткани)На каждом визите проводится физикальное обследование (пульс,артериальное давление, наличие сопутствующих заболеваний), с цельювыявить наличие возможных нежелательных явлений и нежелательныхреакций,выполняетсяобщийанализкрови,общийанализмочи,биохимический анализ крови, заполнение вопросника по оценке качестважизни SF-36, вопросника по оценке состояния коленных суставов по шкалеKOOS и KSS, вопросника по ВАШ, вопросника.

Ультразвуковое исследованиеколенного сустава проводится на 2, 3, 4 и 6 визите с целью контроля динамикиснижения воспаления в коленном суставе и количества внутрисуставнойжидкости. В дополнение ко всему на последнем визите проводится МРТ иРентгенография коленного сустава.Визит при преждевременном выбывании пациента из исследованияПри преждевременном выбывании пациента из исследования, на его последнемвизите, необходимо приложить усилия, чтобы собрать максимум информации,в соответствии с графиком Визита 6, а именно: физикальное обследование(пульс, артериальное давление, наличие сопутствующих заболеваний), с цельювыявить наличие возможных нежелательных явлений и нежелательныхреакций,выполняетсяобщийанализкрови,общийанализмочи,биохимический анализ крови, ультразвуковое исследование коленного сустава,МРТ коленного сустава, рентгенография коленного сустава, заполнениевопросника по оценке качества жизни SF-36, вопросника по оценке состоянияколенных суставов по шкале KOOS, вопросника по ВАШ, вопросника по KSS552.7 Оценка эффективности2.7.1Данные физикального обследованияКлиническоеобследованиепроводитсянакаждомвизите.Регистрируется общее состояние пациента.

С этой целью проводитсятщательный опрос, сбор жалоб. После этого определяется локальный статус.При осмотре пациента в вертикальном положении регистрируются изаносятся в ИРК следующие клинические параметры:Вальгусная деформацияВарусная деформацияGenu recurvatumЗадний подвывих голениПодколенная кистаПри осмотре пациента в горизонтальном положении регистрируются изаносятся в таблицу следующие клинические параметры:Общий осмотр (колено разогнуто)Изменения кожи – отмечается наличие или отсутствие гиперэмии, при ееналичии- степень выраженности.Припухлость (выпот, бурсы, жировые подушки) – отмечается наличие илокализация отечных областей, измеряется окружность конечности на уровнесредней трети надколенника.Атрофия квадрицепса – измерение окружности бедра на уровне среднейтрети, на 15-20 см.

выше верхнего полюса надколенника.Деформация (особенно сгибательная контрактура) - отмечается наличиеконтрактур и деформаций.56Пальпация (при разогнутом колене) – отмечаются особенности.Повышение температуры сустава - отмечается наличие областейгипертермии и их локализация.Болезненность бедренно-надколенникового сочленения – измеряется встепени выраженности: «отсутствует», «легкая», «умеренная», «сильная»,«очень сильная»Хруст, щелчки в коленном суставе при сгибании и разгибании –отмечается наличие.Пальпация во время сгибания – отмечаются особенностиПассивное разгибание – оценивается угол разгибания.Пальпация при согнутом колене - отмечаются особенностиБолезненность бедренно-большеберцового сочленения – наличие боли впроекции латеральной или медиальной суставной щели.

измеряется в степенивыраженности от «отсутствует», «легкая», «умеренная», «сильная», «оченьсильная»Болезненность периартикулярных тканей – отмечается локализация иизмеряется в степени выраженности от «отсутствует», «легкая», «умеренная»,«сильная», «очень сильная» (оценивается в области надмыщелков бедренной ибольшеберцовой костей)Энтезопатия коллатеральных связок – отмечается наличие или отсутствиеи локализация.Бурсит сухожилий Hamfstring мышц - отмечается наличие или отсутствиеСиндром подвздошно-большеберцового тракта отмечается наличие илиотсутствие и степень выраженности.Энтезопатия сухожилий Hamfstring мышц отмечается наличие илиотсутствиеПодколенная ямка (киста, болезненность) - отмечается наличие илиотсутствие и измеряется в степени выраженности от «отсутствует», «легкая»,«умеренная», «сильная», «очень сильная»572.7.2 Инструментальные методы исследованияДиагностические обследования будут проведены с использованиемимеющегося в клинике оборудования.

Желательно, чтобы МРТ, УЗИ ирентгенологичесские исследования у всех пациентов проводились спомощью одного и того же аппарата МРТ, УЗИ и рентген и с использованиемодних и тех же методик.МРТ. При проведении МРТ исследования использовался аппарат МРТмощностьюнеменее1.5ТЛ.Коленныйсуставописывалсясогласностандартному алгоритму. Он включал в себя оценку количества избыточнойжидкости в заворотах коленного сустава, наличие краевых остеофитов набедренной, большеберцовой костях и надколеннике, наличие субхондральногосклероза.

Оценка объема жидкости проводилась в режиме PD+FS. Взависимости от объема внутрисуставной жидкости пациенты были разделенына 3 группы. 1 группа – незначительное количество жидкости- отсутствиежидкости в боковых заворотах, толщина слоя жидкости в верхнем завороте до0.5см в саггитальной плоскости, диаметр кисты Беккера, содержащей жидкостьдо 10мм.

Характеристики

Список файлов диссертации