Диссертация (1154873), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В условияхгипоксии выражены преимущества малата в скорости окисления над другимисубстратами цикла Кребса, когда в дыхательной цепи тормозится транспортэлектроновиотмечаетсяростпродукциисукцинатаиактивностисукцинатдегидрогеназы.Следовательно, восстановление содержания малата в клетке за счетэндогенных и экзогенных источников, должно оказывать позитивное влияниена восстановление аэробных механизмов энергосинтеза в критическихситуациях, сопровождающихся развитием гипоксии и ростом потребности всубстратах цикла трикарбоновых кислот.Следуетотметить,чтомалатвсоставекровезаменителейрассматривается в основном как источник резервной буферной емкости,особенно в ситуациях, требующих проведения массивной инфузии, когдавозрастает риск развития нарушений водно-электролитного баланса икислотно-основного состояния [139, 218, 219, 232].Из 1 моля ацетата, глюконата или лактата при окислении образуетсятолько 1 моль бикарбоната, тогда как из 1 моля малата – 2 моля бикарбоната,а из 1 моля цитрата – 3 моля бикарбоната.
При переизбытке вводимыхметаболизируемых анионов вероятным последствием будет инфузионноиндуцированный алкалоз, который значительно повышает риск летальногоисхода [233]. Однако в связи с участием малата в различных метаболическихреакциях даже значительный переизбыток экзогенно вводимого малата неприводит к метаболическому алкалозу.Малат, входящий в состав стерофундина изотонического, в течение 1–1,5 часов метаболизируется, пополняя емкость гидрокарбонатной буфернойсистемы крови.
Малат повышает активность ацетата как буфера в данномпрепарате, так как по сравнению с лактатом для полного метаболизма малатанеобходимо в 2 раза меньше кислорода [175, 233].33Применение малатсодержащих растворов по-прежнему мало изучено иописано в литературных источниках. В зарубежных источниках приводятсяпримеры недостаточного представления врачей о применяемых в клиническойпрактикеполиионныхрастворах,обихсоставе,осложнениях,терапевтических, а также нежелательных эффектах [181]. Нет данных оборганопротективном действии малатсодержащих растворов, в том числе напеченьипочкипримассивнойкровопотере.Описанлишьгепатопротекторный эффект малатсодержащего раствора стерофундина-Г-5при механической желтухе [126]Проводимыевпоследниегодыисследованияэффективностималатсодержащих инфузионных сред у больных с острой массивнойкровопотерей, в комбустиологии показывают их значимые преимуществаперед растворами, содержащими только ацетат в качестве субстрата буфернойемкости.
Это проявилось в сокращении сроков купирования гиповолемии,нарушений гемодинамики, восстановления транспорта и потреблениякислорода, нарушений метаболизма, водно-электролитного баланса икислотно-основного состояния [5, 22, 34, 151, 205].При длительной гипоксии меняется направление реакций циклаКребса – сукцинат накапливается за счет окисления фумарата. За счет этогосохраняется сопряженная регенерация окисленного НАД из НАДН, иэнергопродукциявНАД-зависимомзвенеокислительногофосфорилирования. При ликвидации гипоксии направление реакций циклатрикарбоновых кислот восстанавливается, а избыток сукцината быстроокисляетсядлявосстановленияэнергодефицита.Вэтихусловияхвосстанавливается окисление фумарата после его превращения в малат.Применениеантигипоксантовдолжнобытьсвоевременным,обоснованным изученными механизмами антигипоксического действия,особенностямифармакодинамикиифармакокинетики,доказательной медицины и фармакоэкономической эффективности.данными34Выбор малатсодержащих инфузионных растворов среди другихкровезаменителей связан с развитием недостатка эндогенного малата, егоэнергонезависимой доставкой из сосудистого русла в клетку, длительносохраняющейсявусловияхгипоксиивысокойактивностьюмалат-аспартатного челночного механизма энергообразования при дефицитекислорода и его повышенным потреблением в процессах перекисногоокисления.Однаковлитературевнастоящеевремяотсутствуетанализэффективности применения малатсодержащего раствора стерофундинаизотонического для профилактики повреждений печени и почек при остройкровопотере в эксперименте.
Не описана роль таких микробных факторовэндотоксикоза,каклипополисахаридграмотрицательныхбактерийипресепсин на динамику повреждений указанных выше жизненно важныхорганов. Это легло в основу проведения данного научного исследования.35Глава 2МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.2.1. Характеристика экспериментального исследованияИсследованиеисследовательскойобразовательноговыполнялосьлабораторииучреждениянабазеЦентральнойФедеральноговысшегообразованиянаучно-Государственного«Нижегородскаягосударственная медицинская академия» Министерства здравоохраненияРоссийскойФедерации.Исследованиеимелопроспективныйрандомизированный характер. Выбор метода коррекции гиповолемииосуществлялся методом «конвертов» после кровопотери.Эксперименты проводились на 120 половозрелых крысах самцах линииWistar, массой 220–250 г.
Содержание животных, оперативные вмешательстваи вывод из эксперимента осуществляли в соответствии с нормативами,данными в руководстве Guide for care and use of laboratory animals (ILARpublication, 1996, National Academy Press), и с требованиями ПриказаМинздрава России от 19 июня 2003 г. № 267 «Об утверждении правиллабораторной практики в Российской Федерации». Животные содержались ввиварии при свободном доступе к пище и воде и естественной смене дня, иночи. Эксперименты проводились в условиях спонтанного дыхания итемпературы окружающей среды 24–250C. В зависимости от выбранногопрепарата для коррекции гиповолемии были выделены контрольная и опытнаясерии экспериментов, включающие по 60 животных. В контрольной сериииспользовался раствор рингера, а в опытной серии – раствор стерофундинаизотонического.Наркоз осуществлялся внутрибрюшинным введением нембутала в дозе45 мг/кг. С целью инвазивного контроля гемодинамики, забора и реинфузиикрови, введения исследуемых инфузионных растворов в начале экспериментакатетеризировались хвостовая артерия и вена.
Катетеризация осуществляласьпосле выделения сосудистого пучка и подведения лигатур выше и ниже местапредполагаемой катетеризации. Введение катетеров 30 G в вену и артерию36проводилось после рассечения стенки сосуда с помощью сосудистых ножниц.Установленный катетер ежечасно промывали с помощью 0,1 мл растворанефракционированного гепарина (50 ЕД/мл). Подключался монитор дляинвазивного измерения артериального давления.Эксперимент проводился в несколько этапов:1.Исходное состояние.
Проводилась наркотизация животного,катетеризация сосудов под местной анестезией раствором новокаина 2% –1 мл и забор крови на исследование.2.Производилась фиксированная кровопотеря из хвостовой артериив объеме 30% ОЦК со скоростью 2 мл/мин. Модель острой фиксированной пообъему кровопотери позволяет оценить динамику постгеморрагическихповреждений внутренних органов, эффективность применяемых компонентовлечения [155, 182, 100]. ОЦК крысы рассчитывался как 6,5% от массы тела.Кровь забирали в шприц, содержащий 0,5 мл раствора гепарина (50 ЕД/мл).3.Период гиповолемии поддерживался в течение 1 часа послекровопотери.4.Периодкоррекциигиповолемии.Вконтрольнойсерииэкспериментов (60 животных) через 1 час после артериальной кровопотерикоррекция гиповолемии проводилась с помощью раствора Рингера в объеме200% от объема кровопотери следующим образом: ½ часть расчетной дозыраствора Рингера вводилась болюсно в течение 5 минут, затем в течение 55минут с помощью инфузомата вводилась оставшаяся половина расчетнойдозы препарата.
В опытной серии (60 животных) коррекция гиповолемиипроводилась с помощью раствора стерофундина изотонического (B/Braun,Германия) в таком же объеме и по такой же схеме, как и в контрольной серии:через 1 час после кровопотери вводили ½ часть расчетной дозы препаратаболюсно с помощью шприца в течение 5 минут, затем в течение 55 минутинфузоматом вводили оставшуюся дозу препарата.5.Период реинфузии, который начинался с момента окончаниявведения кристаллоидных препаратов и продолжался в течение 1 часа.37Реинфузия проводилась с помощью инфузомата и составляла 70% от объемакрови, забранной на 2-м этапе эксперимента.
По окончании реинфузии и заборакрови для лабораторного анализа хвостовая артерия перевязывалась, рана хвостаушивалась узловыми швами капрон №1. Животное помещалось в отдельную клеткупод наблюдение. На этом этапе завершался ранний постгеморрагический периодэксперимента.6.Выведение из эксперимента осуществляли через 1 и 3 суток послекровопотери с помощью внутривенного введения нембутала в дозе 150 мг/кгпосле забора крови на лабораторный анализ. В 1 и 3 сутки из экспериментавыводилось по 30 животных из контрольной и опытной серии с забором кровиналабораторноеисследование.Заборвнутреннихоргановдляморфологического исследования проводился у 12 животных контрольной иопытной серии соответственно в 1 и 3 сутки после кровопотери.Для контроля артериального давления и частоты сердечных сокращенийиспользовался датчик давления фирмы «Моторола» МРХ 5050DP иустройство аналогово-цифрового преобразователя L-card 14-440 (Россия).Полученные данные регистрировались с помощью программного комплекса«PowerGraf» V3.3.
Результаты изучения показателей гемодинамики не имелидостоверных отличий в контрольной и опытной сериях эксперимента.2.2. Методы исследованияКомплексное исследование лабораторных показателей венозной кровивыполнялось перед началом эксперимента, через 1 час после окончанияпериода реинфузии крови (через 4 часа после кровопотери), через 1 сутки и 3суток после кровопотери. При выведении животных из эксперимента через1 сутки и 3 суток после острой кровопотери после вскрытия брюшной полостипроводился забор крови из воротной вены для проведения лабораторныханализов.38Исследовали:1.
Клинико-биохимические показатели крови (гемоглобин, гематокрит,активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ), аланинаминотрансферазы(АлАТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), гаммы-глутамилтранспептидазы (ГГТП),содержание глюкозы, лактата, пирувата, билирубина, мочевины, креатинина)исследовались с использованием реактивов «Thermo scientific» (Финляндия)для биохимического анализатора «Konelab 60i» (Финляндия).2. В плазме и эритроцитах определяли уровень веществ низкой исредней молекулярной массы (ВНиСММ) [56]. С помощью спектрофотометраСФ-46 (ЛОМО, Россия) в ультрафиолетовой области (238-302 нм) определялиспектр поглощения безбелкового супернатанта крови. Для оценки динамикиисследуемого показателя сравнивали полученные результаты с исходнымизначениямиВНиСММ.Дополнительноисследовалидинамикувысокомолекулярной фракции ВНиСММ плазмы и эритроцитов на длинахволн 238–258 нм, отражающей содержание веществ, образующихся вкатаболических реакциях.4.Значениялипополисахаридаопределялидиагностическимнабором «МАЧ-endotox.spp.тест», выпускаемого ООО НПФ «РОХАТ»совместно с ГОУ «НЦССХ им.
А.Н. Бакулева» (Россия). Пресепсинопределяли с помощью набора «PATHFAST Presepsin» (Mitsubishi ChemicalMedience Corporation, Япония).5.Светооптическая микроскопия проводилась в гистологическихпрепаратах печени, почек и толстой кишки, которые фиксировались в 10%растворе нейтрального формалина в течение 72 часов, с последующимобезвоживанием в спирте с восходящей концентрацией и заливкой в парафин.На микротоме Leica SM 2000R выполнялись срезы толщиной в 7 мкм споследующим окрашиванием гематоксилин-эозином.Просмотрпрепаратов,регистрацияизображенийиподсчетморфометрических показателей в 10 полях зрения проводились намикровизоре μVizo-103 (ОАО «ЛОМО», Россия).
Выбор на срезе полей зрения39проводился с использованием метода случайных чисел [1]. Исследовалисьследующие показатели в препаратах печени: диаметр синусоидов, диаметрартерии и площадь ее сечения в триаде, диаметр вены и площадь ее сечения втриаде, диаметр и площадь сечения центральной вены.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
