Автореферат (1154739), страница 4
Текст из файла (страница 4)
Различияпризнавали статистически значимыми при p<0,05.Апробация диссертации состоялась на заседании кафедры андрологии и урологииФакультета фундаментальной медицины МГУ имени М.В. Ломоносова; заседании кафедрыурологии и оперативной нефрологии с курсом онкоурологии федерального государственногоавтономного образовательного учреждения высшего образования «Российский университетдружбы народов» Министерства образования и науки РФ. Работа выполнена при финансовойподдержке Министерства образования и науки РФ (соглашение о субсидии №14.607.21.0045 от22 августа 2014 г., уникальный идентификатор прикладных научных исследований (проекта)RFMEFI60714X0045).По материалам диссертации опубликованы 4 печатные работы в рецензируемыхизданиях, рекомендованных ВАК РФ.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫРезультаты исследования и их обсуждение.
На первом этапе исследования проведенасравнительная оценка биосовместимости препаратов коллагена I типа, выделенного из тканейразличных животных — крупного рогатого скота (бычий коллаген) или свиней (свинойколлаген). Для первоначальной оценки воспалительной реакции на инородное тело ичужеродный (ксеногенный) белок, вызываемой коллагеновым имплантатом, мы использовалиупрощенную модель, заключающуюся в подшивании коллагеновой мембраны к наружнойповерхности мочевого пузыря. В ходе рассчитывали получить информацию о реакции какокружающих тканей, так и стенки самого мочевого пузыря при минимальном риске развития13осложнений.В экспериментах с мембраной из бычьего коллагена уже через 3 суток выявлялиразвитие спаечного процесса между стенкой мочевого пузыря и окружающими тканями.
Саммочевой пузырь выглядел гиперемированным с повышенным тонусом. Подшитая мембранавыглядела набухшей, но была плотно связана со стенкой мочевого пузыря. Через 7 сутоквоспалительные изменения нарастали. У 1 из кроликов даже выявили поверхностный некрозстенки мочевого пузыря в области имплантированной мембраны. Лишь к 14-м суткамвыраженность воспалительных изменений уменьшалась. Подшитая мембрана выгляделанабухшей, уменьшенной в размерах (частичная резорбция).Гистологическое исследование выявило массивную лейкоцитарную инфильтрациюстенки мочевого пузыря, прилежащей к имплантату, уменьшающуюся лишь к 14-му дню послеимплантации. Адвентициальная оболочка под мембраной утолщена. Имплантированнаямембрана постепенно резорбировалась, через 14 суток была окружена соединительно-тканнойкапсулой (Рисунок 1).АБВРисунок 1 — Гистологические изменения в стенке мочевого пузыря после подшивания к егонаружной поверхности мембраны из бычьего коллагена.
А – через 3 дня, Б – через 7 дней,В – через 14 дней. Окраска гематоксилином и эозином, х100В опытах с подшиванием мембраны из свиного коллагена воспалительная реакция навсех сроках наблюдения была менее выражена. Спаечный процесс между стенкой мочевогопузыря и окружающими тканями был слабо выражен даже через 14 суток, стенка мочевого14пузыря не была гиперемирована, имела нормальный тонус. Гистологически через 3 сутокотмечена нерезко выраженная лейкоцитарная инфильтрация стенки мочевого пузыря в областиподшитой мембраны, через 7 суток воспалительная реакция сохранялась, но отмечалипостепенное замещение мембраны соединительной тканью, к 14-м суткам мембрана былазначительно дезинтегрирована и частично замещена соединительной тканью, исходящей изадвентициальной оболочки мочевого пузыря.
К этому сроку воспалительная лейкоцитарнаяинфильтрация практически отсутствовала (Рисунок 2).АБВРисунок 2 — Гистологические изменения в стенке мочевого пузыря после подшивания к егонаружной поверхности мембраны из свиного коллагена. А – через 3 дня, Б – через 7 дней,В – через 14 дней. Окраска гематоксилином и эозином, х100Сравнение результатов имплантации мембран из бычьего и свиного коллагенасвидетельствует о более высокой биоинертности мембран из свиного коллагена, чтопроявлялось в меньшей степени воспалительной реакции как в самой стенке мочевого пузыря,так и в окружающих тканях (что влияет на выраженность спаечного процесса). При этом вопытах с использованием данных мембран отмечали более выраженную резорбцию мембран изамещение коллагена врастающей соединительной тканью из адвентиция мочевого пузыря.В следующей серии опытов изучали способность мембран из бычьего и свиногоколлагена интегрироваться в стенку мочевых путей (в частности мочевого пузыря) призамещении части стенки этими мембранами.
Для этого резецировали участок стенки мочевого15пузыря в области тела размером 2х2 см и замещали образовавшийся дефект одним из видовколлагеновой мембраны. При использовании обоих видов мембран все оперированныеживотные выжили. Не отмечено ни одного случая недостаточности швов, соединяющихколлагеновую мембрану со стенкой мочевого пузыря, и потери герметичности мочевогопузыря. Все животные были выведены из эксперимента в плановые сроки.В опытах с имплантацией мембраны из бычьего коллагена через 7 суток после операциивыявили выраженный спаечный процесс между мочевым пузырем и окружающими тканями.Мочевой пузырь выглядел резко гиперемированным с повышенным тонусом. Слизистаяоболочка вокруг вшитой мембраны была резко отечна. Большая часть внутренней поверхностимембраны была покрыта белково-солевым налетом.
Через 14 суток стенка мочевого пузырятакже выглядела воспаленной с повышенным тонусом. У одного животного из-за спаек междупетлями тонкой кишки и мочевым пузырем развилась частичная кишечная непроходимость.Выраженный отек слизистой оболочки вокруг имплантированной мембраны сохранялся,однако,оначастичнопокрывалавнутреннююповерхностимембраны.Оставшаясянеэпителизированная часть мембраны была покрыта белково-солевым налетом.
Через 21 суткикартина мало изменилась, за исключением уменьшения выраженности отека слизистой иплощади неэпителизированного участка внутренней поверхности вшитой мембраны.Гистологическое исследование, проведенное через 14 дней после имплантациимембраны, выявилорезко выраженнуювоспалительнуюреакциювокруг мембраны,проявляющуюся в массивной лейкоцитарной инфильтрации прилежащих тканей и выраженномполнокровии сосудов.
Через 21 день воспалительная реакция стихала. Края имплантатачастично покрывались нарастающим со стороны собственных тканей уротелием, однакозначительная часть мембраны оставалась неэпителизирована. Происходило частичноезамещение мембраны соединительной тканью (Рисунок 3).АБРисунок 3 — Гистологические изменения стенки мочевого пузыря в зоне вшивания мембраныиз бычьего коллагена через 14 дней (А) и через 21 день (Б) после операции.Окраска гематоксилином и эозином, х10016В опытах с вшиванием мембраны из свиного коллагена через 7 суток после операциимочевой пузырь выглядел малоизмененным без признаков выраженного воспалительногопроцесса.
Слизистая оболочка вокруг мембраны мало изменена с нерезко выраженным отеком.Внутренняя поверхность мембраны уже на этом сроке частично покрыта слизистой, площадьнеэпителизированного участка, выстланного белково-солевым налетом, меньше, чем в опытах смембраной из бычьего коллагена. К 14-м и 21-м суткам отмечали дальнейшее прогрессивноеуменьшение площади внутренней поверхности мембраны, не покрытой слизистой оболочкой.Макроскопических признаков воспалительной реакции не выявляли.При гистологическом исследовании уже через 7 суток обнаружено нарастание уротелиянаповерхностиимплантированноймембраныпринезначительнойвыраженностивоспалительной лейкоцитарной инфильтрации прилежащих отделов стенки мочевого пузыря.Через 14 суток происходило выраженное замещение коллагеновой мембраны соединительнойтканью; оставались лишь небольшие участки внутренней поверхности мембраны, лишенныеуротелия.
Через 21 день после имплантации в стенке мочевого пузыря оставались лишьотдельные очаги воспалительной инфильтрации. Имплантированная мембрана была почтиполностью дезинтегрирована и замещена соединительной тканью, исходящей из стенкимочевого пузыря. Внутренняя поверхность имплантата была почти полностью эпителизирована(Рисунок 4). При этом ни в одном из экспериментов мы не выявили врастания гладкомышечныхклеток в имплантат.АБВРисунок 4 — Гистологические изменения стенки мочевого пузыря в зоне вшивания мембраныиз свиного коллагена через 7 (А), 14 (Б) и через 21 день (в) после операции.Окраска гематоксилином и эозином, х10017Функциональные исследования с определением максимальной емкости мочевого пузыря(определяли по объему физиологического раствора, введенного через уретральный катетер, доначала подтекания жидкости помимо катетера) также выявили определенные различия междугруппами опытов с использованием разных видов мембран.
При определении этого показателячерез 7 дней после операции выявили его снижение в обеих группах до примерно одинаковыхзначений (34±1 и 37±2 мл при использовании мембран из бычьего и свиного коллагена,соответственно) при норме 48±2 мл (Рисунок 5).Рисунок 5 — Динамика максимальной емкости мочевого пузыря (мл) после его резекциии имплантации мембраны из бычьего и свиного коллагенаЧерез 14 и 21 день в опытах с бычьей коллагеновой мембраной емкость мочевого пузырявозросла незначительно, составив 36±1 и 39±1 мл, соответственно (различия достоверны толькопри сравнении результатов через 7 и 21 день), тогда как в опытах со свиной коллагеновоймембраной уже через 14 дней происходило достоверное увеличение максимальной емкостимочевого пузыря — до 43±1 мл с дальнейшим постепенным возрастанием до 45±1 мл (p<0,05).Сравнение результатов экспериментов с использованием мембран из свиного и бычьегоколлагена позволяет сделать определенный вывод о преимуществах мембран из свиногоколлагена для уропластики.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
