Автореферат (1154739), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Затеминкубировали смесь при +4°С в течение 2 часов. Полученный раствор равномернораспределяли на дне лунки 24-луночного планшета с площадью поверхности около 2 см2,помещали планшет в CO2-инкубатор и инкубировали при +37℃ в течение 30 минут, пока несформируется гидрогель. Приготовленный гидрогель в планшете высушивали в асептическихусловиях при температуре +37°C до полного высыхания. Процесс сушки считали полностьюзавершенным, когда гидрогель переходил в форму жесткого стеклоподобного материала.Контрольные мембраны готовили по такому же протоколу, добавляя вместо КС МСК жировойткани соответствующее количество среды DMEM-LG.Все операции на кроликах проводили в условиях общего наркоза.
Для наркозаиспользовали смесь препаратов Золетил 100 производства Virbac S.A. и XylaVET professional9(ксилавет инъекционный) производства Pharmamagist Kft в соотношении 2:1. Рабочий раствордоводили до концентрации Золетила 30 мг/мл добавлением физиологического раствора.Полученный раствор вводили в концентрации 1мл/кг внутримышечно.Для профилактики инфекционных осложнений вводили антибиотик (амоксиклав 200 мгвнутривенно, однократно).Методика подшивания коллагеновой мембраны к стенке мочевого пузыря. Послесоответствующей подготовки операционного поля проводили нижне-срединную лапаротомиюи в рану выводили мочевой пузырь. При необходимости для полной мобилизации мочевогопузыря пересекали соединительнотканные связки, соединяющие пузырь с боковыми стенкамибрюшной полости, а также отделяли перивезикальную жировую ткань.
На наружнойповерхности мочевого пузыря выбирали бессосудистый участок и подшивали коллагеновуюмембрану отдельными узловыми швами атравматической нитью «Vicryl» 4/0. Обычнонакладывали 6 узловых швов на равном расстоянии. После этого мочевой пузырь погружали вбрюшную полость и ушивали лапаротомную рану, используя непрерывный обвивной шов дляушивания мышечной стенки и отдельные узловые швы на кожу атравматической нитью«Vicryl» 2/0.Методика замещения коллагеновой мембраной дефекта стенки мочевого пузыря.
Послевведения в наркоз катетеризировали мочевой пузырь по уретре для эвакуации мочи иопределения исходной функциональной емкости мочевого пузыря. В бессосудистой зонеиссекали участок стенки органа размером примерно 2х2 см, что соответствовало размерамколлагеновой мембраны. Мембрану вшивали в область дефекта непрерывным обвивным швомс использованием атравматической нити «Vicryl» 4/0. Мочевой пузырь помещали в брюшнуюполость и ушивали лапаротомную рану 2-рядным швом: непрерывный обвивной шов намышечную стенку и отдельные узловые швы на кожу с использованием атравматической нити«Vicryl» 2/0.
Мочевой пузырь дренировали уретральным катетером.Методика резекции мочевого пузыря с его ушиванием. В этих опытах производилирезекцию мочевого пузыря как в предыдущих сериях, но образовавшийся дефект ушивалинепрерывным обвивным швом атравматической нитью «Vicryl» 4/0.
Дальнейший ход операции— как в других сериях.Методика пластики уретры трубчатым коллагеновым протезом. В опытах с пластикойуретры выполняли ее катетеризацию полиэтиленовым катетером. Рассекали кожу препуция ислизистую оболочку полового члена и выделяли уретру, которую брали на держалку. Катетервременно удаляли. Подготавливали трубчатый коллагеновый протез, после чего уретрупересекали. В образовавшийся после расхождения краев дефект помещали коллагеновыйимплантат, который анастомозировали на вновь введенном катетере с краями уретры,10используя отдельные узловые швы атравматичной нитью «Vicryl» 4/0.
Кожную рану ушивалиотдельными узловыми швами нитью «Vicryl» 4/0.Оценка результатов пластики мочевых путей. В заданные сроки животных вновьвводили в наркоз. В опытах с цистоплатикой выполняли лапаротомию, проводилимакроскопическую оценку состояния мочевого пузыря и окружающих тканей, выполнялифункциональные исследования и в конце эксперимента удаляли мочевой пузырь длягистологического исследования. В опытах с уретропластикой после визуального осмотраобласти операции выполняли уретрографию или фистулографию, после чего удаляли уретру симплантатом для гистологического исследования.В опытах с цистопластикой при визуальном осмотре области операции обращаливнимание на выраженность спаечного процесса мочевого пузыря с окружающими тканями,наличие экссудата в брюшной полости, внешний вид мочевого пузыря (степень гиперемии,отечность, ригидность стенки), а также коллагеновой мембраны.
После удаления и вскрытиямочевого пузыря отмечали степень гиперемии и отечности слизистой оболочки, прилегающей кимплантированной мембране, визуально оценивали площадь мембраны, не покрытойуротелием, а также отмечали наличие или отсутствие инкрустации мембраны солями иобразование конкрементов. В опытах с уретропластикой оценивали состояние наружныхтканей, наличие мочевых свищей.Для оценки состояния нижних мочевых путей в ряде исследований выполнялиуретроцистографию с 76% верографином. В опытах с уретропластикой при выявлениимочевого свища выполняли фистулографию.Функциональные исследования проводили как на интактном мочевом пузыре до началаманипуляций на нем, так и через 1 месяц после цистопластики.
Исследования начинали сопределения функциональной емкости мочевого пузыря. Для этого мочевой пузырьпунктировали в области верхушки внутривенным кубитальным катетером G20 и через негоопорожнялимочевойпузырь.Послеэтогомочевойпузырьпостепеннонаполнялифизиологическим раствором до начала подтекания жидкости по уретре или до начала активногомочеиспускания.
Объем введенного при этом раствора считали функциональным объемоммочевого пузыря. В процессе наполнения мочевого пузыря регистрировали также динамикувнутрипузырногодавления.Этиданныеиспользовалидлярасчетапоказателя«объем/давление», характеризующего комплаентность мочевого пузыря.Для дальнейших исследований к поверхности мочевого пузыря подшивали 2хлорсеребряных электрода по обе стороны от имплантированной мембраны.
С помощью этихэлектродов на специально разработанной высокочувствительной аппаратуре регистрировалималые колебания биоимпеданса и анализировали с помощью Фурье-преобразования их11частотный спектр с помощью оригинального программного обеспечения. При одновременнойрегистрации внутрипузырного давления через катетер, соединенный с электроманометром, спомощью этой методики можно оценивать состояние кровообращения в изучаемой областистенки мочевого пузыря, а также функциональное состояние детрузора, в том числе еговозбудимость и спонтанную активность, не связанную с актом мочеиспускания, что являетсяпризнаком детрузорной гиперактивности.Методика исследования, аппаратный комплекс и программное обеспечение разработаныв НИИ урологии и интервенционной радиологии им. Н.А.
Лопаткина совместно с НПФ «Биола»и их информативность доказана в исследованиях функционального состояния мочевого пузыряи предстательной железы при различных патологических состояниях (Мудрая И.С. и соавт.,2011; Кирпатовский В.И. и соавт., 2012, 2013, 2015; Ибрагимов А.Р. и соавт., 2011).В результате получили динамику записи базальных значений и микроколебанийимпеданса мочевого пузыря, а также базальных значений и спонтанных колебанийвнутрипузырного давления. Спектральный анализ микроколебаний биоимпеданса позволяетполучить их амплитудный спектр, содержащий кардиальный пик С1, регистрируемый начастоте сердцебиения.
Амплитуда этого пика характеризует состояние микроциркуляции висследуемой зоне. Его значения выражали в мОм.Измерения регистрируемых параметров проводили как на фоне опорожненного мочевогопузыря, так и в условиях его максимального наполнения.Для гистологического исследования образцы ткани мочевого пузыря фиксировали внейтральном 9% формалине с последующей стандартной обработкой в батарее спиртоввосходящей концентрации и заливкой в парафин. Парафиновые срезы окрашивалигематоксилином и эозином.Завершением работы стала клиническая апробация использования коллагеновоготрубчатого протеза для заместительной пластики мочевых путей, в частности, сегментамочеточника.
Описание этого клинического наблюдения приводится в главе с изложениемрезультатов проведенных исследований.Положения, выносимые на защиту:1. Мембраны из свиного коллагена I типа обладают хорошей биосовместимостью,способны интегрироваться в окружающие тканиимогутбытьиспользованы длязаместительной пластики мочевых путей, в частности мочевого пузыря.2.Включениевсоставколлагеновоймембраныкондиционированнойсредыкультивирования мезенхимальных стволовых клеток человека способствует ускорениюрегенерацииновообразованнойстенкисболееполноценнойэпителизациейиреваскуляризацией коллагенового имплантата, а также более полноценной регенерации12мышечной оболочки.3.
Использование коллагеновых мембран с включенной в их состав кондиционированнойсредой культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека дляпластикимочевогопузыряпослеегорезекцииспособствуетболееполноценномувосстановлению функции органа по сравнению с мембранами без кондиционированной среды ипо сравнению с резекцией мочевого пузыря без цистопластики.4.Клиническаяапробацияпластикимочевыхпутейколлагеновойматрицейсвидетельствует о перспективности этого направления исследований.Степень достоверности и апробация результатов работы. Полученные данныеподвергали статистической обработке с помощью компьютерных программ «Excel 2007» и«Statistica 8.0». Усредненные значения в исследуемых группах выражали в виде среднейарифметической ± ошибка средней (М±m). Достоверность различий между группамиопределяли с использованием критерия t Стьюдента и критерия Вилкоксона-Манна.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
