Главная » Просмотр файлов » Автореферат

Автореферат (1154739), страница 2

Файл №1154739 Автореферат (Заместительная пластика мочевых путей препаратами из коллагена I типа) 2 страницаАвтореферат (1154739) страница 22019-09-14СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Сравнить выраженность воспалительной реакции стенки мочевого пузыря иокружающих тканей при подшивании к его стенке мембран, изготовленных из коллагена I типа,выделенного из тканей свиньи и крупного рогатого скота.2. Провести сравнительную оценку способности свиных и бычьих коллагеновыхмембран инкорпорироваться в состав стенки мочевых путей после заместительной пластики.3. Оценить гистологические изменения в зоне имплантации свиных и бычьихколлагеновых мембран, как в прилежащих отделах стенки мочевого пузыря и уретры, так и вимплантатах.4.

Изучить влияние включения в состав коллагеновых мембран кондиционированнойсреды культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека нарегенерацию новообразованной стенки мочевого пузыря после его резекции.5. Оценить выраженность васкуляризации и клеточный состав имплантированных вмочевой пузырь коллагеновых мембран, содержащих и не содержащих кондиционированнуюсреду культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека.6. Сравнить функциональное состояние резецированного мочевого пузыря после6заместительной цистопластики коллагеновой мембраной, содержащей и не содержащейкондиционированную среду культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировойткани человека, а также при простом ушивании резецированного мочевого пузыря.Научная новизна.

Получены приоритетные данные о биологических свойствах мембраниз коллагена I типа выделенных из тканей свиней и крупного рогатого скота. Выявленыпреимущества использования мембран из свиного коллагена. Доказано, что включение в составколлагеновой мембраны кондиционированной среды культивирования мезенхимальныхстволовых клеток человека способствует более полноценной эпителизации имплантата,ускорениюегореваскуляризации,более полноценнойрегенерациимышечногослояновообразованной стенки мочевого пузыря и препятствует инкрустации солей мочи нанеэпителизированной внутренней поверхности. Выявлено более полноценное восстановлениефункционального объема органа и его комплаентность, оцененные методом инфузионнойцистометрии, при включении в состав мембраны кондиционированной среды культивированиямезенхимальныхклиническогостволовыхпримененияклетокжировойколлагеновоготканиимплантатачеловека.дляДоказанавозможностьзаместительнойпластикимочеточника.Теоретическая и практическая значимость.

Доказана эффективность использованияметодики цистопластики для изучения пригодности различных коллагеновых биоматериаловматериалов для заместительной пластики мочевых путей. Определен оптимальный видколлагена, вызывающий минимальную воспалительную реакцию окружающих тканей, которыйможет быть рекомендован для изготовления материала для цистопластики. Обоснованацелесообразность включения в состав коллагеновых мембран кондиционированной средыкультивирования мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека для обеспеченияполноценной регенерации стенки мочевого пузыря и сохранения ее функции.

Проведенаапробация заместительной пластики мочевых путей в клинике с использованием биопротезамочеточника из коллагенаI типа. Сформулированы рекомендациипо дальнейшимисследованиям возможности использования коллагеновых материалов для расширяющейцистопластики, в том числе и в клинической практике.Методология и методы исследования. Экспериментальные исследования проведены на48 Ново-Зеландских кроликах-самцах массой 3-3,5 кг. Животных содержали в стандартныхусловиях вивария на рационе из специального комбикорма с неограниченным доступом к воде.Проведено 6 серий экспериментов:1-я серия – сравнительная оценка биосовместимости препаратов коллагена I типа,изготовленного из тканей крупного рогатого скота (бычий коллаген) и свиней, на модели ихподшивания к наружной стенке мочевого пузыря (12 экспериментов);72-я серия – сравнительная оценка способности к интеграции в ткань мочевого пузырямембран, изготовленных из бычьего или свиного коллагена I типа, после замещения имидефекта его стенки (18 экспериментов);3-я серия – изучение возможности заместительной пластики уретры трубчатымпрепаратом коллагена I типа (4 эксперимента);4-я серия – оценка возможности использования нативных мембран из свиного коллагенаI типа для заместительной пластики мочевого пузыря после его резекции (5 экспериментов);5-я серия – оценка коллагеновых мембран, содержащих кондиционированную средукультивирования мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани человека, в качествематериаладлязаместительнойпластикимочевогопузыряпослеегорезекции(5экспериментов);6-я серия – резекция мочевого пузыря с его ушиванием (4 эксперимента).Из эксперимента животных выводили на 3-и, 7-е, 14-е, 21-е и 30-е сутки после операции.Коллагеновые мембраны были приготовлены по следующей методике.

Стерильныйпрозрачный нейтральный раствор коллагена I типа, выделенный из тканей животных(«ВИСКОЛЛ», производство ООО «Имтек», Россия), в объеме 1 мл помещали в стерильнуюкультуральную чашку с площадью поверхности 2 см2. Затем чашку перемещали в CO2инкубатор и инкубировали при +370 С до тех пор, пока не формировался гидрогель, который вдальнейшем подвергался сушке в асептических условиях при температуре от +200С до +250С втечение 7 дней. Процесс сушки считался полностью завершенным, когда гидрогель переходил вформу жесткого стеклоподобного материала. Полученные таким образом мембранырасфасовывали в индивидуальную стерильную упаковку с соответствующей маркировкой.Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) выделяли из подкожного жировогоотложенияздоровыхдоноровобоихполов,полученногоприпроведениималогохирургического вмешательства под местной анестезией или в ходе плановых хирургическихопераций.

Полученный в результате операции биоматериал в стерильных условияхламинарного бокса измельчали сосудистыми ножницами до консистенции суспензии мелких(размером не более 2 мм3) кусочков и смешивали с растворами ферментов коллагеназы I типа(200 ед/мл, «Worthington Biochemical», США) и диспазы (40 ед/мл, «Sigma», Германия) присоотношении объема ткани (в мл) к объему ферментативного раствора (в мл) 1:2. Образецинкубировали при 37°C в течение 30-45 мин при постоянном встряхивании. По окончанииинкубации добавляли равный объем среды роста МСК и центрифугировали при 200 g в течение8 мин.

Белесый поверхностный слой, состоящий из зрелых адипоцитов и кусочковферментативно необработанной ткани, удаляли с помощью вакуумного насоса, а осадок,состоящий из клеток стромы жировой ткани, клеток сосудистой стенки и крови,8суспендировали в стерильной деионизированной воде для лизирования эритроцитов. Чтобывосстановить осмотическое давление, добавляли соответствующий объем 10-кратногофосфатного буфера, а затем фильтровали через нейлоновые фильтры с размером пор 100 мкм(«BD Falcon Cell Strainer», США) и центрифугировали при 200 g 5 мин. Супернатант удаляли, аосадокресуспендироваливсреде,поддерживающейростнедифференцированныхмезенхимных прогениторных клеток человека (Advance Stem Cell Basal Medium, далее –AdvanceSM, «HyClone», США), содержащей 10% смеси факторов роста (Advance Stem CellGrowth Supplement, «HyClone») и 100 Ед/мл пенициллина/стрептомицина («HyClone»).Выделенные клетки высаживали на чашки Петри («Corning», США) в концентрации 5х10 4/см3 иинкубировали в СО2–инкубаторе (5% СО2; 95% воздуха) при 37°С.

На следующий день вчашках меняли среду для удаления не прикрепившихся клеток. Смену среды проводили каждые2-3 дня; при достижении 70-80% конфлюента клетки рассаживали в соотношении 1:3 сиспользованием раствора QTase (HyClone). Жизнеспособность клеток оценивали путем окраскиклеток раствором трипанового синего и подсчета количества живых и мертвых клеток спомощью счетчика клеток (Cell Counter, «Invitrogen», США).Для получения кондиционированной среды МСК жировой ткани 4-5 пассажа, достигшие80% конфлюента, промывали трехкратно раствором Хэнкса («ПанЭко», Россия).

К чашкамдобавляли среду DMEM-LG. Клетки культивировали в течение 7 дней, после чегокондиционированнуюсредусобирали,очищалиотклеточногодебрисапутемцентрифугирования в течение 10 мин при 300g, затем концентрировали в 50 раз с помощьюультрафильтрации через мембраны из регенерированной целлюлозы с указанным отсечением10 кДа в центрифужных картриджах («Millipore», США).Для получения биоматериала смешивали 2,5% свиной стерильный нейтральныйколлагеновый гель («ИМТЕК», Россия)с образцами концентрированной в 50 разкондиционированной среды (КС) МСК жировой ткани в соотношении по объему 4:1.

Характеристики

Тип файла
PDF-файл
Размер
1,39 Mb
Предмет
Высшее учебное заведение

Список файлов диссертации

Заместительная пластика мочевых путей препаратами из коллагена I типа
Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6384
Авторов
на СтудИзбе
307
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее