Автореферат (1154739), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Этот материал обладает более выраженной биоинертностью,вызывает менее выраженную воспалительную реакцию при его имплантации в мочевые пути,по сравнению с бычьим коллагеном, как в самих органах мочевой системы, так и в прилежащихокружающих тканях. При имплантации свиной коллагеновой мембраны в мочевой пузырьпроисходит более быстрая ее эпителизация и замещение собственными тканями мочевогопузыря. Однако при этом на всех сроках наблюдения не происходит регенерации мышечнойоболочки новообразованной стенки мочевого пузыря (как и в опытах с бычьей коллагеновоймембраной).
Функциональная емкость мочевого пузыря лучше восстанавливается прииспользовании свиной коллагеновой мембраны.18В то же время и мембрану из бычьего коллагена также можно считать приемлемымпластическим материалом, но не лишенным недостатков в виде недостаточной биологическойинертности.В связи с полученными данными, в дальнейших экспериментах для заместительнойпластики мочевых путей мы использовали препараты коллагена, изготовленные из тканейсвиньи, учитывая их лучшие биологические свойства.Оценку возможности заместительной пластики мочевых путей коллагеновым протезоммы начали с попытки уретропластики. Трубчатый коллагеновый протез вшивали в дефектпенильного отдела уретры кролика, образовавшийся после ее пересечения.
Хотя техническиоперация по уретропластике выполнялась успешно, тем не менее, функциональные результаты,к сожалению, оказались неоптимальными. У всех 4 животных этой серии опытов не удалосьобеспечить дренирования мочевого пузыря уретральным катетером в течение срока,необходимого для герметизации анастомозов. Кролики самостоятельно удаляли катетер или вближайший период после выхода из наркоза, или в течение суток, несмотря на фиксациюкатетера к головке полового члена и к коже препуция. В результате развивались мочевыезатеки, приводящие к нагноению и рубцеванию тканей. В 2 опытах в результате этогопроизошло гнойное расплавление имплантата, а у 2 животных все же удалось избежатьгнойных осложнений, но у них произошла облитерация дистального анастомоза сформированием мочевого свища.
Однако макро- и микроскопическое исследование имплантатачерез 1 месяц после операции выявило, что он сохранил проходимость (результатыфистулографии), полностью заместился соединительной тканью, а его внутренняя поверхностьбыла полностью выстлана эпителием, хотя он и выглядел атрофичным (Рисунок 6).Таким образом, результаты этой серии экспериментов показали, что трубчатыйколлагеновый имплантат хорошо приживается в тканях при замещении им участкамочеиспускательногопрорастающейизканала.Онсобственныхполностьютканей,замещаетсяокружающихсоединительнойимплантат,итканью,постепеннореваскуляризируется. Однако технические сложности в обеспечении адекватного дренированиямочевых путей не позволили получить желаемого результата. В связи с этим дальнейшиеисследования мы проводили на технически более простой модели — заместительной пластикемочевого пузыря после его резекции.Цельюэтогоразделаисследованийсталоизучениехарактерарегенерацииновообразованной стенки мочевого пузыря после его замещения мембраной из свиногоколлагенаIтипа,содержащейкультивирования МСКжировойилинесодержащейткани человека,акондиционированнуютакжесредуопределение показателейфункционального состояния мочевого пузыря после цистопластики этими мембранами.19АБВРисунок 6 — Внешний вид (А), гистологическая картина (Б) коллагенового имплантата ирезультаты фистулографии (В) через 1 месяц после уретропластикиКонтролем к этим исследованиям служили опыты с резекцией мочевого пузыря беззаместительной цистопластики.
Предпосылками к этим исследованиям стали данныелитературы и полученные нами в предыдущих сериях результаты, свидетельствующие озамещенииколлагеновогоимплантатапреимущественносоединительнойтканьюбезрегенерации мышечной оболочки, что может существенно влиять на функциональноесостояние реконструированного мочевого пузыря, а также данные литературы о том, чтовключение в состав коллагеновой матрицы факторов роста, стволовых клеток или продуктов ихсекреции стимулирует регенерацию гладкомышечных клеток.
Оценку характера регенерацииновообразованной стенки и функциональных показателей проводили через 1 месяц послеоперации.Результаты опытов показали, что через 1 месяц в обеих сериях имплантированнаямембрана была полностью интегрирована в ткань мочевого пузыря. Внутренняя ее поверхностьбыла полностью выстлана новообразованной слизистой оболочкой. При этом в серии сцистопластикой стандартной коллагеновой мембраной гистологически выявляли субтотальное20замещение имплантата соединительной тканью с врастанием отдельных кровеносных сосудов.В ткани, заместившей коллагеновую мембрану, выявляются лишь единичные гладкомышечныеклетки.
Прилежащие к зоне имплантации мембраны ткани выглядят неизмененными,воспалительной инфильтрации не обнаружено (Рисунок7).АБРисунок 7 — Гистологическая картина через 1 месяц после заместительной цистопластики сиспользованием стандартной мембраны из свиного коллагена.А – общий вид, окраска гематоксилином и эозином (х100),Б – единичные гладкомышечные клетки, окрашенные соединительной тканью, заместившейколлагеновую мембрану (х400)Вопытахсзаместительнойцистопластикоймембраной,содержащейсредукультивирования стволовых клеток, гистологическое исследование препарата из областиимплантированной коллагеновой мембраны выявило ее почти полное замещение тканьюмочевого пузыря. Люминальная поверхность имплантата выстлана слизистой оболочкой,состоящейизполноценнойуротелиальнойвыстилки(многоряднымэпителием)иподслизистого слоя, содержащего полнокровные сосуды. Новообразованная стенка мочевогопузыря содержит комплексы гладкомышечных клеток в значительном количестве, междукоторыми имеются тонкие прослойки соединительной ткани.
Коллагеновый матрикс почтиполностью резорбирован. Гладкомышечные клетки активно врастают в оставшийся коллаген. Вновообразованной стенке происходит активные ангиогенез (Рисунок 8).Таким образом, при использовании мембран, обогащенных культуральной средойстволовыхклеток,происходитболеебыстраяиболееполноценнаярегенерацияновообразованной стенки мочевого пузыря, замещающей постепенно резорбирующийсяимплантат.
При этом формируется практически полноценная новообразованная стенкамочевогопузыря,содержащаявсеслои—полнуюэпителиальнуюваскуляризированный подслизистый слой и выраженную гладкомышечную оболочку.выстилку,21АБВРисунок 8 — Гистологическая картина мочевого пузыря через 1 месяцпосле цистопластики с использованием коллагеновой мембраны, содержащейкондиционированную среду культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировойткани человека. А – формирование полноценной слизистой оболочки. Окраска гематоксилиноми эозином (х100), Б – регенерация гладкомышечных клеток в новообразованной стенкемочевого пузыря (х200), В – множественные новообразованные сосуды в регенерирующейстенке мочевого пузыря.Окраска гематоксилином и эозином (х200)Регенерация стенки мочевого пузыря после цистопластики стандартной коллагеновоймембраной приводит к существенно менее полноценному восстановлению структуры стенкиреконструированного органа.Таким образом, при использовании мембран, обогащенных культуральной средойстволовыхклеток,происходитболеебыстраяиболееполноценнаярегенерацияновообразованной стенки мочевого пузыря, замещающей постепенно резорбирующийсяимплантат.
При этом формируется практически полноценная новообразованная стенкамочевогопузыря,содержащаявсеслои—полнуюэпителиальнуювыстилку,васкуляризированный подслизистый слой и выраженную гладкомышечную оболочку.Регенерация стенки мочевого пузыря после цистопластики стандартной коллагеновой22мембраной приводит к существенно менее полноценному восстановлению структуры стенкиреконструированного органа.В качестве контроля к сериям с заместительной цистопластикой мы провели опыты спростой резекцией стенки мочевого пузыря и ушиванием образовавшегося дефекта.Гистологическое исследование, проведенное через 1 месяц, выявило типичные признакипослеоперационногозаживлениястенкиорганасобразованиемрубцаизрыхлойсоединительной ткани с регенерацией вокруг него пучков гладкомышечных клеток (Рисунок 9).Рисунок 9 — Гистологическая картина зоны резекции мочевого пузырячерез 1 месяц после операции (стрелкой указана зона рубца).Окраска гематоксилином и эозином (х400)Для более точной характеристики активности регенерационных процессов мы провеликоличественную оценку морфометрических параметров, характеризующих их интенсивность(Таблица 1).Результаты этого анализа показали, что по сравнению с опытами с ушиванием дефектастенки мочевого пузыря без цистопластики, использование стандартной коллагеновоймембраны сопровождается большей протяженностью деэпителизированных участков базальноймембраныновообразованнойслизистой,сохранениемзначительныхучастковнерезорбированного коллагена, меньшей плотностью новообразованных сосудов, а такжезначительно менее выраженной регенерацией гладкомышечных клеток в зоне операции.
В тожевремявопытахсзамещениемрезецированнойстенкимембранойсосредойкультивирования стволовых клеток отмечается почти полная резорбция имплантированноймембраны, наименьшие значения деэпителизированной внутренней поверхности стенки,наиболее выраженныйангиогенез иактивная регенерация гладкомышечныхклеток,значительно превышающая по интенсивности этот показатель в других сериях. Полученныеданные убедительно доказывают положительный эффект включения в состав коллагеновоймембраны стимуляторов регенерации, выделяемых стволовыми клетками в среду их23Таблица 1 — Морфометрические параметры регенерации стенки мочевого пузыря через1 месяц после его резекции в различных серияхСерия опытовОтносительнаязанятая площадьГМК клетоксреди рыхлойсоединительнойткани (мкм2)Относительная длинадеэпителизированнойбазальной мембраныв слизистой оболочкемочевого пузыря(мкм)Относительнаядлина участковнерассосавшегосяколлагена (мкм)Количествососудистыхпочек наединицеотносительнойплощадистенкимочевогопузыря.10,13±0,16Резекция без1,24±6,17281,82±13,26цистопластикиЦистопластика5,24±0,172316,07±31.14106,24±12,528,02±0,03мембраной безКСЦистопластика 246,25±12,11***164,05±22,18**27,08±9,27***15,27±0,17***мембраной сКСПримечание:КС – кондиционированная среда культивирования мезенхимальных стволовых клеток жировойткани человека.Достоверность различий: ** - p<0,01, *** - p<0,001культивирования, который даже превышает стимулирующий эффект сигнальных молекул,действующих при физиологической регенерации поврежденной стенки.Важным этапом в нашем исследовании было изучение вопроса, улучшает ли методиказаместительной цистопластики коллагеновыми мембранами функциональное состояниерезецированного мочевого пузыря наряду с ускорением регенерации его стенки, а еслиулучшает, то в какой степени.Посколькуфункциональнаяполноценностьорганазависитотсостоянияегокровоснабжения, мы изучили интенсивность микроциркуляции методом спектрального анализамикроколебаний импеданса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
