Диссертация (1154329), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Контрольная группа получала инъекцию 200 мкл физраствора.Опытная группа получала Каспазол в дозе 133 мг/кг (в пересчете на EGCG),68вводимый через желудочный зонд в физрастворе, контрольная – физраствор,начиная со дня инъекции сульфида никеля. У экспериментальных животныхпосле 3 месяцев воздействия под анестезией кетамином (50 мг/кг) и ксилазином(12 мг/кг) удаляли матку, и выполняли соскоб эндометрия и эпителия шейкиматки, после чего ткань гомогенизировали и проводили исследование методомметил-чувствительной ПЦР.2.4.3. Изучение влияния на метаболизм эстрогеновЭксперимент проведен на 50 мышах (по 25 в группе) линии Balb/c-nude сксенографтами рака эндометрия линии CRL-1622 (KLE).
Исследуемый препаратвводился внутрижелудочно ежедневно в дозе 133 мг/кг (30 дней). В контрольнойгруппе животные получали плацебо - воду. В исследовании Соотношениеметаболитов эстрогенов 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в моче животных определялось спомощьюиммуноферментногоанализа.Дляопределенияметаболитовэстрогенов использовался набор для иммуноферментного анализа ESTRAMET2/16 («Immunacare», США).2.5. Клинические исследования2.5.1. Изучениебалансафакторовроставканцерогенезевпредстательной железе2.5.1.1. Методика изучения ростовых факторовПеред выполнением биопсии пациенту производилось пальцевоеректальное исследование.
Биопсию выполняли через трансректальный доступподконтролемультразвуковогоисследованияректальнымдатчиком.Производилось назначение антибиотиков фторхинолонового ряда в течение 5-7дней, начиная с дня выполнения биопсии. Для анестезии выполняласьперипростатическую блокаду под контролем ТРУЗИ раствором лидокаина. Длязабора материала применяли иглы диаметром 16-18 G, длина биопсийногостолбика (фрагмента) составляла 18-20 мм. При биопсии получали не менее 1269столбиков, при этом использовали технику систематической мультифокальнойбиопсии с латерализацией. Было получено по 6 столбиков из каждой долипредстательной железы (по 2 биоптата из апикальной, средней и базальнойчастей периферической зоны). Обработка биопсийного материала включала всебя маркировку, фиксацию в забуференном растворе формалина, проводку изаливку в парафин (каждый столбик – в отдельный блок, чтобы обеспечитьвозможность идентификации участка простаты, из которого он получен),изготовление срезов и из части срезов - гистологических препаратов с окраскойгематоксилин-эозином.Иммуногистохимический анализ для оценки экспрессии факторов ростапроводилсянанеокрашенныхсрезах.ОпределяласьэкспрессияIGF(инсулиноподобного фактора роста), EGF (эпидермального фактора роста) иTGF-b (трансформирующего ростового фактора бета), до и после назначенияисследуемого препарата или плацебо.
Уровень экспрессии изучаемых ростовыхфакторов определялся в процентах, и вычислялись его изменения к концу курсаприменения препарата. Для проведения иммуногистохимической окраскииспользовались антитела к IGF, EGF и TGF-b (Santa Cruz Biotechnology, США).2.5.1.2. Дизайн клинического исследованияИсследование проводилось на базе НИИ урологии (г. Москва), ивключало в себя 34 пациента.
Исследование проведено как двойное слепоеплацебо-контролируемое в двух параллельных группах. Под наблюдениемнаходилось 34 пациента с ПИН, которые были рандомизированы в две группы.Первая группа (18 пациентов) принимала индол-3-карбинол (400 мг/сут) иэпигаллокатехин-3-галлат (160 мг/сут), группа 2 (16 пациентов) принималаплацебо. Проводилась оценка субъективных (по шкалам I-PSS и QOL) иобъективных (урофлоуметрия, УЗИ простаты, PSA, морфология биоптатовпростаты) показателей.702.5.2. Изучение метилирования генов-онкосупрессоров в предраковыхпроцессах в эндометрии и шейке матки2.5.2.1.
Методика изучения уровня метилирования геновДля обнаружения CpG-островков метилированных генов использовалсяметод метилчувствительной ПЦР. ДНК из образцов после гидролиза метилчувствительнымирестриктазамиHpaIIиHhaI(«Fermentas»,Латвия)использовали для амплификации с соответствующим изучаемым генампраймерами. Для исключения возможной гомозиготной делеции исследуемыхгенов ПЦР дополнительно проводилась на негидролизованной ДНК.ПЦРпроводили по стандартной схеме при помощи термоциклера РНС-2 («Тесhne»,Великобритания).2.5.2.2. Дизайн клинического исследования метилирования геновoнкосупрессоров в эпителии шейки маткиИсследoвание проведено на клинической базе кафедры акушерства игинекологии №1 ПМГМУ им.
И.М.Сеченова (г. Москва), и включало в себя 102пациентки с фоновыми и предракoвыми процессами шейки матки (CIN I-II).Данные пациентки входили также в более крупное исследование влиянияметилирования генов на риск развития рака шейки матки [Евтина И.П., 2011;Сидорова И.С., 2011]. Исследование проведено как открытое когортное в 3параллельных группах.
Наблюдение и терапия проводились как амбулаторно,так и стационарно. Критерями включения служили возраст (репродуктивный) иморфологическое подтверждение патологии шейки матки.Эпигаллокатехин-3-галлат (МираксБиоФарма», г. Москва) назначалсяпациенткам всех групп в дозе 180 мг/сут (на протяжении 6 месяцев).
Частoтаметилирования генов-oнкосупрессоров oпределялась дo лечения и через 6месяцев пoсле егo окoнчания (через 12 месяцев от начала лечения) в эпителиишейки матки. Пациенткам также проводилось цитологическое исследование71мазков, расширенная кольпоскопия, морфологическое исследование биоптаташейки матки и УЗИ органов малого таза.2.5.2.3. Дизайн клинического исследования метилирования геновoнкосупрессоров в эндометрииИсследoвание проведено на клинической базе кафедры акушерства игинекологии №1 ПМГМУ им. И.М.Сеченова (г. Москва).
В исследованиевлияния EGCG на метилирование генов в эндометрии была включена 21пациентка с различной степенью неопластических изменений эндометрия, изчисла больных, входивших в состав более крупного исследования уровняметилирования генов при различных заболеваниях эндометрия [Власов Р.С.,2011; Сидорова И.С., 2011]. Исследование проведено как открытое когортное в3 параллельных группах.
Наблюдение и терапия проводились как амбулаторно,так и стационарно. Критерями включения были репродуктивный возраст иморфологически установленная гиперплазия эндометрия. Пациентки былиразделены на три группы: группа 1 (с простой гиперплазией эндометрия безатипии, 9 пациенток), группа 2 (с комплексной гиперплазией эндометрия безатипии, 5 пациенток), и группа 3 (с комплексной гиперплазией эндометрия сатипией, 7 пациенток). В первых двух группах все пациентки получали терапиюгестагенами или агонистами ГнРГ; в том числе 9 пациенток первой и 5 пациентоквторой группы получали дополнительно эпигаллокатехин-3-галлат.
EGCGназначался в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев. В 3-й группе у пациентокс реализованной репродуктивной функцией была произведена экстирпацияматки. У оставшихся 7 пациенток была произведена абляция эндометрия споследующейгормонотерапиейгестагенамиилиагонистамиГнРГиназначением EGCG в дозировке 180 мг/сут в течение 6 месяцев.2.5.3.
Изучениеметаболитовэстрогеновзаболеваниях молочной железы72придиспластических2.5.3.1. Методика изучения метаболитов эстрогеновПроводился анализ мочи на метаболиты эстрогенов – 2-ОНЕ1 и 16αОНЕ1. Для определения метаболитов эстрогенов использовался набор дляиммуноферментного анализа ESTRAMET 2/16 («Immunacare», США).2.5.3.2. Дизайн клинического исследованияИсследование проведено как многоцентровое двойное слепое плацебоконтролируемоев двухпараллельныхгруппах.Дляоценкивлияниядииндолилметана на соотношение метаболитов эстрогенов у женщин сдоброкачественнойдисплазиеймолочнойжелезыбылиспользованметаболический предшественник ДИМ – индол-3-карбинол.
По имеющимсяданным, при попадании в желудок он практически полностью метаболизируетсявкислойсредедорандомизированноеДИМ.Дизайнисследованияплацебо-контролируемое.-двойноеКритериислепоевключения:циклическая масталгия (мастодиния) на фоне доброкачественной дисплазиимолочной железы (мастопатия); женщины в возрасте 20-45 лет, с регулярнымменструальным циклом (26-30 дней).Критерииневключения:доброкачественныеизлокачественныеновообразования; острые воспалительные заболевания молочных желез; гипер-,гипотиреоз; гиперпролактинемия; хронические заболевания других органов исистем.Продолжительность исследования: период скрининга до 45 дней; периодлечения пациентки в течение 6 менструальных циклов, 5 визитов к врачу.
Висследование включено 44 пациентки, в возрасте 20-45 лет. Группы наблюдения:группа 1 – прием препарата Индинол Форто (производства МираксБиоФарма,Россия), содержащего 200 мг индолкарбинола в капсуле, по 200 мг 2 раза (400мг) в сутки (22 пациенток); группа 2 – прием плацебо по 1 капсуле 2 раза в сутки(22 пациентки).73Изучался анамнез, проводились тесты на инфекционные заболевания,пальпация молочных желез, гинекологический статус, тесты на беременность,УЗИ органов малого таза, УЗИ молочных желез в первую фазу цикла, общийанализ крови, общий анализ мочи, определение печеночных ферментов, уровнейрепродуктивных гормонов, анализ мочи на метаболиты эстрогенов – 2-ОНЕ1 и16α-ОНЕ1.2.6.
Статистическая обработка данныхДля обеспечения большей мощности статистического анализа прианализе показателей, описываемых интервальными показателями с нормальнымтипомраспределения,использовалисьпараметрическиеметоды.Рассчитывались среднее арифметическое и стандартная ошибка среднего. Длясравнения показателей в группах использован одномерный t-критерийСтьюдента для независимых выборок. Сравнение между группами дляпоказателей с бинарным типом шкалы проводили с помощью критерия 2. Расчет95% доверительных интервалoв для показателей с бинарным типoм шкалыпрoизведен по Клoпперу-Пирсону.
Статистическая oбработка данных проведенав пакете программ SPSS® Statistics v. 20 (IBM Corporation, США), воперационной среде Microsoft Windows XP Professional. Для запланированныхсравнений эффективности значимость рассчитывалась как двусторонняя.74ГЛАВА 3. ОТБОР СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕГО ИЗУЧЕНИЯПРОЦЕССОВ РАННЕГО КАНЦЕРОГЕНЕЗА И СОЗДАНИЯ СРЕДСТВ ИХКОРРЕКЦИИКак показал анализ доступной медицинской литературы, наиболееперспективными в настоящее время для целей химиопрофилакти можнопризнать соединения индольного ряда (индол-3-карбинол и дииндолилметан) икатехинового ряда (эпигаллокатехин-3-галлат, эпикатехин-3-галлат).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
