Диссертация (1154329), страница 15
Текст из файла (страница 15)
При этомизвестно, что индол-3-карбинол метаболизируется в организме человека,приемущественно образуя дииндолилметан, обладающий сходным спектромбиологической активности. В большинстве случаев дииндолилметан болееактивен,заисключениемцитохромоксидазнойсистемыспособностипечени,индуцироватьосуществляющие,вферментычастности,метаболизм эстрогенов. В связи с этим, в исследованиях гормональногоканцерогенеза оптимально использование индол-3-карбинола, тогда как дляцелей практического применения в здравоохранении более приемлемым можетоказаться дииндолилметан, обладающий большей удельной активностью.Отобранные на этапе анализа литературы соединения далее должны бытьпроверены на предмет допустимости применения на животных и человеке сточки зрения их токсичности, а также последующего использования дляисследований влияния на ранние стадии канцерогенеза.Изучение процессов раннего канцерогенеза в настоящее времяпрактически полностью проводится на животных моделях, причем вбольшинстве случаев in vitro.
Между тем, перенос полученных данных начеловека сопряжен с трудностями, поскольку процессы канцерогенеза могутотличаться у людей рядом особенностей. В соответствии с поставленнымизадачами исследования, был запланирован отбор агентов, перспективных с точкизрения возможности их применения как на лабораторных животных, так и в ходеклинических исследований на людях.75Кроме того, накопленный к настоящему моменту объем научной ипрактическойинформацииоднозначносвидетельствуетотом,чтохимиопрофилектика эффективна только на ранних стадиях неоплазии, когдапроцессы канцерогенеза не приняли необратимого характера и с ними можносправиться без использования тяжелых (с точки зрения их переносимости ивлияния на организм больного) методов терапии. В связи с этим детальноеизучение общей и специфической токсичности перспективных лекарственныхагентов является необходимым элементом их разработки.
Поскольку вклиническихисследованияхдопустимоиспользованиетолькоготовыхлекарственных форм, а не самих активных агентов, была запланированафармразработка и создание прототипов лекарственных форм на основедииндолилметана и катехинов. При этом первым этапом подтвержденияприемлемости прототипов лекарственных форм для целей настоящегоисследования явилось изучение их потенциальных токсических свойств,поскольку именно в ходе токсикологических экспериментов определяется какпринципиальная возможность, так и допустимые дозировки для использованияв рамках последующих доклинических и клинических исследований.3.1. Разработка прототипов лекарственных форм3.1.1.1. РазработкапрототипалекарственныхформдииндолилметанаИзвестно,чтовысокуюстепеньбиодоступностииливысокуюконцентрацию, необходимую для проявления противоопухолевых эффектов ворганах и тканях, при применении твердых лекарственных форм DIM достичьранее не удавалось.
Как показали проведенные в различных научных центрахклинические исследования дииндолилметана, максимальная однократная дозаDIM в твердых лекарственных формах у человека не превышает 300 мг, так какдальнейшее ее повышение ограничено развитием побочных эффектов [Heath E.I.,2010]. Максимальная концентрация DIM в плазме, которую удалось добиться76исследователям, составляет 236 нг/мл, то есть около 1 мкМ.Величиныконцентрации в 1 мкМ недостаточны для проявления всего спектрапротивоопухолевых эффектов дииндолилметана, что ограничивало возможностиего применения в качестве средства химиопрофилактики.Донастоящеговремениналичиевышеуказанныхнедостатковпрепятствовало созданию пероральных лекарственных форм на основе DIM.
Приэтом установленная в экспериментальных исследованиях зависимость успешнойтерапии от концентрации дииндолилметана в клетках-мишенях заставилапродолжитьпоискирешениязадачиповышенияегобиодоступности.Единственным известным на сегодня решением стала разработка жидкогополпродуктадляпроизводствалекарственныхформдииндолилметана,содержащего компоненты, существенно повышающие его биодоступность.Основным из них является полисорбат – вспомогательный компонент,обеспечивающий растворимость DIM и его последующую легкую эмульгацию всреде желудочного-кишечного тракта [Киселев В.И., 2010]. Однако, послеполучения данного полупродукта основной проблемой оставалась стабильностьDIM в растворе, поскольку он легко окисляется при контакте с кислородомвоздуха, в особенности при нагревании.
Для решения данной задачи нами былииспользованы два подхода: использование антиоксиданта и полная герметизациялекарственной формы. В качестве антиоксиданта в состав препарата был введенальфа-токоферола ацетат. Герметизация была обеспечена разработаннойтехнологиейзапайкижидкогополупродуктавгерметичныетвердыежелатиновые капсулы с замком, покрытые гидроксипропилметилцеллюлозой[Киселев В.И., 2014]. Таким образом, применение новых технологическихрешений позволило получить лекарственную форму дииндолилметана безнагревания содержимого капсул, не изменяя его первоначальных свойств, и пригарантииотсутствиякислорода.Разработанноерешениеобеспечилостабильность дииндолилметана в течение двух лет. Прототип новой пероральнойлекарственной формы дииндолилметана получил условное наименование77Инфемин (состав приведен в таблице 3).
Как показали доклиническиеисследования его фармакокинетики, данная формуляция обладает значительноулучшенной по сравнению с чистым DIM биодоступностью [Paltsev M., 2013].Таблица 3. Состав прототипа пероральной лекарственной формыдииндолилметана (Инфемин).КомпонентСодержание наодну капсулуДииндолилметан150 мгРыбий жир20 мгАльфа-токоферола ацетат5 мгПолисорбат 80575 мг3.1.1.2.
Разработка прототипа лекарственной формы соединенийкатехинового рядаОсновная доля данных, подтверждающих мультитаргетные свойстваэпигаллокатехин-3-галлата, была получена in vitro. При этом эпигаллокатехин3-галлата в экспериментах с клеточными линиями проявлял максимальнуюактивность при концентрации 10-50 мкМ [Khan N., 2006]. Известно, что припероральномприемеэпигаллокатехин-3-галлатамаксимальнаяегоконцентрация в плазме у человека не превышала 1 мкМ, а дальнейший ростдозировок приводил к развитию побочных эффектов, не вызываю прироста егосодержания в крови [Chow H.H., 2001].Исследования фармакокинетики эпигаллокатехин-3-галлата подтвердилинизкую биодоступностью соединений катехинового ряда. Биодоступностькатехинов не превышает 1% [Mereles D., 2011; Auger C., 2008].
При такой низкойбиодоступности пероральный прием катехинов не позволяет обеспечитьнеобходимого для развития лечебного эффекта уровня концентрации в тканях78мишенях. Попытки улучшения биодоступности путем создания различныхлекарственных формуляций пока не привели к значительному успеху [Siddiqui I.A., 2009; Landis-Piwowar K. R., 2007].Наиболее эффективное известное на сегодня решение этой задачизаключается во введении в состав прототипа лекарственной формы целевойдобавки, которая содержит блок-сополимер оксиэтилена и оксипропилена. Какпоказали проведенные исследования, на модели крыс данный подход приводитк увеличению биодоступности в 12,9 раз [Киселев В.И., 2011], что открываетперспективы создания лекарственного препарата на основе эпигаллокатехин-3галлата, способного создать необходимую активную концентрацию в тканяхмишенях.Дляцелейнастоящейработынамибылпредложенпрототиплекарственной формы на основе смеси соединений катехинового ряда,содержащейся в субстанции эпигаллокатехин, зарегистрированной в РФ(производстваЗАО«МираксБиоФарма»).Комбинациясубстанцииэпигаллокатехин и блок-сополимера оксиэтилена и оксипропилена «плюроникF127» (производства BASF, Германия) далее была использована длядоклинических экспериментов и клинических исследований в качествепрототипа пероральной лекарственной формы.
Прототип новой пероральнойлекарственной формы катехинов получил условное наименование Каспазол(состав приведен в таблице 4).Таблица 4. Состав прототипа пероральной лекарственной формыкатехинов (Каспазол).КомпонентСодержание на одну капсулуСубстанция «Эпигаллокатехин»112 мгКолифор 407280 мгКрахмал картофельный14 мгНатрия стеарил фумарат4 мг793.2. Токсикологические исследования прототипов лекарственных формОбъем токсикологических исследований определялся необходимостьюпоследующего применения прототипов лекарственных форм в ходе клиническихисследований. Токсикологические исследования при этом предполагаютизучениеобщейостройихроническойтоксичности,репродуктивнойтоксичности и аллергизирующего действия.3.2.1.
Общая токсичность3.2.1.1. Общая токсичность прототипов лекарственных формдииндолилметана3.2.1.1.1.Исследование острой токсичности ИнфеминаИсследованный диапазон доз составил от 100 мг/кг до 5000 мг/кг накрысах, на мышах – до 1000 мг/кг. Высокие дозы достигались повторнымивведениями (с интервалом 15 минут) препарата (см. таблицы 5-6).Таблица 5. Острая токсичность Инфемина при внутрижелудочномвведении мышам (в группах по 6 животных)Доза в пересчете на 1003005001000дииндолилметан,мг/кгПогибло самцов0000Погибло самок000080Таблица 6.
Острая токсичность Инфемина при внутрижелудочномвведении крысам (в группах по 6 животных)Доза в пересчете на 1003005001000150030005000дииндолилметан,мг/кгПогибло самцов0000000Погибло самок0000000Гибели животных от Инфемина в дозах до 5000 мг/кг не отмечалось. Дозысвыше 5000 мг/кг исследовать не планировалось, поскольку отсутствие гибелиживотных при дозе вплоть до 5000 мг/кг означает практически крайне низкуютоксичность.Животные, получавшие Инфемин, не отличались от здоровых поповедению и внешнему виду. Половых различий в ходе исследования незарегистрировано.Изложенное выше демонстрируется таблицами 7-8.Таблица 7.
Изменения массы тела мышей (г) после в/ж введенияИнфемина.Времясамцысамки20 ± 219 ± 1На 2 день20 ± 220 ± 2На 7 день21 ± 120 ± 1На 4 день21 ± 220 ± 2наблюденияФоновые показатели81Таблица 8. Изменения массы тела крыс (г) после в/ж введения ИнфеминаВремясамцысамки210 ± 5201 ± 2На 2 день210 ± 4203 ± 2На 7 день202 ± 4199 ± 4На 4 день197 ± 4195 ± 6наблюденияФоновые показателиПрименение исследуемого препарата также не повлияло на динамикупотребления корма и воды у крыс (таблица 9).Таблица 9. Изменение потребления корма и воды у крыс на фоне введенияИнфемина (г/день)ВремякормводанаблюдениясамцысамкисамцысамкиФоновые11,0±0,310,9±0,822,4±1,822,4±3,3На 2 день12,1±0,912,1±1,421,9±2,322,7±4,1На 7 день11,9±1,611,5±1,620,1±2,122,0±3,1На 4 день11,4±0,510,3±0,520,3±2,520,4±1,8показателиНи в одном случае не было выявлено статистически значимых отличий отфоновых показателей (тестирование при помощи парного критерия Вилкоксона).По данным вскрытия и макроскопического исследования внутреннихорганов выживших и подвергнутых на 14 день эксперимента эвтаназииживотных отклонений не установлено.Данные вскрытия (некропсии), мыши.Телосложениеправильное.Питаниеудовлетворительное.Шерстьопрятная, без очагов облысения.
Выделений из естественных отверстий нет.82Слизистые бледного цвета, блестящие и гладкие.Брюшная, грудная полости не содержат выпотов. Нормальное положениевнутренних органов.Щитовидная железа красноватого цвета, нормальной величины и формы.Тимус беловатого цвета, треугольной формы, плотноватой консистенции.Подчелюстные лимфоузлы и слюнные железы розовато-беловатогоцвета, округлой овальной формы и умеренно плотной консистенции.Величина и форма сердца обычные.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
