Диссертация (1151466), страница 8
Текст из файла (страница 8)
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙРаботавыполненав2011-2017гг.накафедрахфизиологии,фармакологии и токсикологии им. А.Н. Голикова и И.Е. Мозгова и химии им.проф. С.И. Афонского и А.Г. Малахова ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имениК.И. Скрябина. Научно-производственные опыты проводили в 2011-2014 гг. вусловиях ФГУП ППЗ «Птичное», располагающееся по адресу: Московскаяобласть, г.
Троицк, Наро-Фоминский р-н, пос. Птичное, ул. ЦентральнаяУсадьба, д. 1.Инкубационные яйца были получены от кур яичного кросса «Шейвер2000». Для исследований подбирали контрольные и опытные партии яиц попринципу аналогов с учетом возраста родительского стада, сроков хранения,времени снесения и массы. Были определены характер, объекты и объемыисследования. Общая схема экспериментов представлена на рисунке 5.Дезинфекциюинкубационныхяицпроводилиформальдегидомнепосредственно в дезкамере.Качество инкубационных яиц: средняя масса яиц – 61,9 г, индекс белка- 0,08, индекс желтка – 0,47; содержание в желтке каротиноидов – 18,50 мкг/г,содержание в желтке витамина А – 7,21 мкг/г; кислотность желтка – 6,2 мг/гКОН; толщина скорлупы – 0,36 мм.
Показатели качества инкубационных яицсоответствовали нормативным требованиям. Данные были предоставленысотрудниками ФГУП ППЗ «Птичное».Выращивали молодняк в клеточных батареях L-103 и L-102 при принятыхусловиях содержания (с соблюдением ветеринарных и зоотехническихтребований) (см. приложение 2, 3). Кормление кур кросса «Шейвер 2000»осуществлялось по рационам, утвержденным на птицефабрике. Составрационов соответствовал рекомендациям ВНИТИП (см. приложение 4-7).461. Изучение влияния высоких значений основных параметров инкубации:температуры (40 оС) и относительной влажности (80 %) на эмбрионы кур ицыплят кросса «Шейвер 2000»Определение физиолого-биохимических, зоотехнических показателей2.
Поиск оптимальных концентраций йодсодержащей БАД «Кламин» дляорошения инкубационных яиц до и во время искусственной инкубации на19-е сутки2.1 Поиск оптимальнойконцентрации до инкубации, %(0,0001; 0,001; 0,01; 0,1; 1,0)2.2 Поиск оптимальной концентрациина 19-е сутки инкубации, %(0,01; 0,1; 0,5; 1,0; 5,0)3. Влияние оптимальных концентраций БАД «Кламин» на рост иразвитие эмбрионов кур и цыплят в условиях повышенной температурыи относительной влажности во время искусственной инкубацииИзучение физиолого-биохимических, зоотехнических иэкономических показателейВнедрение в производство и учебный процесс результатов исследованийРисунок 5 – Общая схема исследований47Цыплят подвергали иммунизации в соответствии с графиком вакцинациина ФГУП ППЗ «Птичное».Яйца опытных и контрольных партий экспериментов № 3, 4, 5, 6инкубировали при стандартных режимах (см.
приложение 1) в машинах ИУПФ-45, ИУВ-Ф-15, а инкубационные яйца опытных и контрольных группэкспериментов № 1, 2, 7, 8 - в автоматическом инкубаторе R-com Maru-1000.В каждом из экспериментов даны обобщенные данные, которые былиполучены 3-х кратным повторением одного эксперимента.Более подробное описание схемы опытов и условий их проведения даныв соответствующих разделах.При проведении экспериментов учитывали следующие показатели:1) физиолого-биохимические показатели определяли по общепринятымметодикам (Камышников В.С., 2009; Кондрахин И.П., 2004) (табл. 4).Таблица 4 - Способы определения физиолого-биохимических показателей крови исыворотки кровиМетод и принцип определенияПоказатель2112Эритроциты, 10 /л Подсчет эритроцитов в камере Горяева.Гематиновый метод Сали основан на превращениигемоглобина при прибавлении к крови хлористоводороднойкислоты в хлоргемин коричневого цвета, интенсивностьГемоглобин, г/локраскикоторогопропорциональнасодержаниюгемоглобина.По биуретовой реакции.
Белки реагируют в щелочной средеОбщий белок, г/л с меди сульфатом, образуя соединения, окрашенные вфиолетовый цвет.Пореакциисбромкрезоловымзеленым.Привзаимодействии альбумина с бромкрезоловым зеленым вАльбумин, г/лслабокислой среде в присутствии детергента образуетсяокрашенный комплекс синего цвета.Фосфорно-вольфрамовый карбонатный метод. МочеваяМочевая кислота, кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив сммоль/лобразованием соединения голубого цвета. Интенсивностьокраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.По цветной реакции Яффе (метод Лоппера). Креатининреагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде сКреатинин, мкмоль/лобразованием окрашенных соединений.
Интенсивностьокраски пропорциональна концентрации креатинина.481АлАт, Е/лАсАт, Е/лα-Амилаза, Е/лГлюкоза, ммоль/лКальций (общий),ммоль/лФосфор(неорганический),ммоль/лЙод, мкг/лЛипаза, Е/л2Принцип методов определения АлАТ И АсАТ заключается втом, что в результате переаминирования, происходящего поддействием аминотрансфераз образуются щавелевоуксусная ипировиноградная кислоты. При добавлении 2,4 –динитрофенилгидразина в щелочной среде образуютсяокрашенныегидразоныпировинограднойищавелевоуксусной кислот.Метод Каравея. α-Амилаза гидролизует крахмал собразованием конечных продуктов, не дающих цветнойреакции с йодом.
При взаимодействии крахмала с йодомобразуется окрашенный комплекс, оптическая плотностькоторого при 640 нм пропорциональна концентрациинегидролизованного крахмала. Активности α-амилазыоценивают по уменьшению интенсивности окраски.Глюкозооксидазный метод определения глюкозы в кровиоснован на реакции окисления глюкозы в присутствиифермента глюкозооксидазы с образованием перекисиводорода, которая в свою очередь в присутствиипероксидазы окисляет ортотолидин с образованиемокрашенных продуктов.С индикатором мурексидом. Мурексид в щелочной средеобразует с кальцием непрочное соединение розового цвета.При добавлении к раствору трилона Б образуется стойкоекомплексное соединение, розовый цвет переходит вфиолетовый.С ванадат-молибденовым реактивом (по Пулсу, вмодификации Г.Ф.
Коромыслова и др.). Фосфор вбезбелковом фильтрате дает лимонно-желтое окрашивание сванадат-молибденовым реактивом. Степень окраскиизмеряют на фотоэлектроколориметре.Метод иммуноферментного анализа.Колориметрический метод. Метод основывается нарасщеплении липазой специфического хромогенногосубстрата, приготовленного в виде мелкодисперснойэмульсии (эфир 1,2-о-дилаурил-рак-глицеро-3-глутаровойкислоты с 6 -метил резоруфином).
В присутствии колипазы,ионов кальция и желчных кислот, которые являютсяспецифическими активаторами панкреатической липазы,субстрат превращается в 1 ,2-о-дилаурил-рак-глицерин иэфир глутаровой кислоты с 6-метилрезоруфином, причемпоследний самопроизвольно расщепляется на глутаровуюкислоту и метилрезоруфин. Оптическая плотность при 580нм,обусловленнаяобразованиемметилрезоруфина,пропорциональна активности липазы в пробе.492Метод Бодански. Принцип метода определения основан натом, что под действием щелочной фосфатазы происходитЩелочнаягидролизбета-глицерофосфатасосвобождениемфосфатаза, Е/лнеорганическогофосфора.Активностьферментапропорциональнаколичествувыделившегосянеорганического фосфора.Определения триглицеридов по цветной реакции сацетилацетоном(HANTZSCH).Освобожденныйврезультате щелочного гидролиза триглицеридов глицеринТриглицериды,ммоль/локисляют до формальдегида метапериодатом натрия.Формальдегид образует с ацетилацетоном окрашенноесоединение.Метод основан на регистрации торможения окисления Одианизидинадихлоргидратарадикаломгидроксила,АОА, %образующегося в системе Фентона сывороткой крови.Спектрометрический метод.
При высокой температуре вкислой среде МДА реагирует с 2-тиобарбитуровой кислотойМДА, мкмоль/лс образованием окрашенного триметинового комплекса,имеющего максимум поглощения при 532 нм.Колориметрический метод. Метод основан на установленииИДС, ед.опт.пл./мл содержания продуктов ПОЛ в крови по поглощениюлипидным экстратом монохроматического светового потокаДК, ед.опт.пл./мл в ультрафиолетовой области спектра. Количество продуктовПОЛ экстрагируются в гептан-изопропанольных фракциях.ТК, ед.опт.пл./мл Так в гептане экстрагируются в основном нейтральныелипиды, а в изопропаноле – фосфолипиды.ОДК, ед.опт.пл./мл Замероптическихплотностейпроизводятнаспектрофотометре.
Каждая фаза оценивается противсоответствующего контроля при длинах волн 220 нмОШ, ед.опт.пл./мл (поглощение изолированных двойных связей), 233 нм(поглощение ДК), 278 нм (поглощение ТК), 278 нм(поглощение ОДК) и 400 нм (поглощение ОШ).ИФА. Метод основан на ферментном иммуноанализе, воснове которого лежит конкуренция немеченных имеченных ферментом антигенов за определенное числоантигенсвязывающих участков антител. КоличествоТ3 общий, нмоль/л фермент-меченых антигенов, связавшихся с антителами,обратно пропорционально концентрации немеченыхантигенов исследуемого образца.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
