Диссертация (1151313), страница 22
Текст из файла (страница 22)
Сегментоядерный нейтрофил.22в. Нормальный моноцит кошки.22г. Единичные тромбоциты.22д. Сегментоядерные нейтрофилы.22е. Палочкоядерный нейтрофил97Лейкоциты мелких домашних животных после воздействия ультразвукаНа фотографиях мазков крови животных после инсонации образцов (рисунок 23) данытипичные, выявленные для непрерывного, модулированного и импульсного УЗ, изменения.Изменённые в УЗ поле лейкоциты кошкиРисунок 23а. Лимфоциты и «свёрнутый»сегментоядерный нейтрофил.
Непрерывный режимвоздействия, 0.4 Вт/см2, 60 с23б. Группа тромбоцитов. Агрегация. Импульсныйрежим, 0.4 Вт/см2, 45 с23в. Деформированные лимфоциты. 0.4 Вт/см2,модуляция 30 Гц, 35 с.23г. Лизис мембраны эозинофила, выход гранулв межклеточное пространство. 0.7 Вт/см2, модуляция800 Гц, 30 с.98Изменённые в непрерывном УЗ поле лейкоциты собаки23д. Лизис ядер лимфоцитов.
Режим воздействия:0.4 Вт/см2, 45 с.23ж. Группа лейкоцитов. Агрегация. 0.4 Вт/см2, 50 с23е. Лизис ядра нейтрофила. Режим воздействия:0.4 Вт/см2, 50 с.23з. Группа тромбоцитов, агрегация. 0.7 Вт/см2, 45 с§ 8.7. Действие импульсного ультразвука на клетки крови лошадейПосле выявления присутствия общих особенностей действия непрерывного УЗ решенобыло провести изучение возможных направлений действия импульсного УЗ на клетки кровиживотных только на пробах лошадей.
Изменения клеток крови после инсонации импульсным УЗинтенсивностью 0.4–1.0 Вт/см2 начинали регистрировать при бо́льших УЗ экспозициях(рисунки 24–25) вследствие уменьшения тепловой компоненты в момент действия излучателя.0.4 Вт/см2, 20 с — дегенеративные изменения нейтрофилов и эозинофилов (рисунок 24а).30 с — лизис цитоплазмы и дегенеративные изменения ядер лейкоцитов всех видов. Тромбоцитыи эритроциты без особенностей (24б).
60 с — полный лизис лейкоцитов, изменение99проницаемости ЦПМ тромбоцитов, деформация ЦПМ эритроцитов (лизис лимфоцита нарисунках 24в, г).Рисунок 24а. 0.4 Вт/см2, 20 с. Дегенеративные изменениянейтрофилов и эозинофилов.24в. 0.4 Вт/см2, 60 с. Лизис лимфоцитов24б. 0.4 Вт/см2, 30 с. Цитолиз сегментоядерногонейтрофила: полностью лизирована ЦПи частично — ядро.24г. Концентрация хроматина в ядрахнейтрофилов после 0.4 Вт/см2, 60 с0.7 Вт/см2, 25 с. Лизис наиболее крупных видов лейкоцитов — дегенеративные изменениянейтрофилов (рисунок 25а), моноцитов и эозинофилов. Обратимые изменения проницаемостиЦПМ тромбоцитов при сохранении их жизнеспособности.
Начало цитоморфологическихизменений эритроцитов: единичные клетки имеют булавовидные утолщения. 60 с. Лизислейкоцитов. Изменение формы эритроцитов. Появление цитоцепочек и теней клеток. Возможенгемолиз.100Рисунок 25а. 0.7 Вт/см2, 25 с. Лизис лейкоцитов,дегенеративные изменения нейтрофилов25б. 1.0 Вт/см2, 20 с. Необратимые изменениялейкоцитов. Вспенивание ЦП и разрыв ядер.Агрегация тромбоцитов.1.0 Вт/см2, при облучении более 20 с идентифицировать клетки сложно (рисунок 25б.).Происходят необратимые изменения лейкоцитов.
30 с — вспенивание цитоплазмы и разрывядер. Агрегация тромбоцитов. 60 с. Лизис ядер и цитоплазмы лейкоцитов.1019. Изучение действия амплитудно-модулированногоультразвука низких интенсивностей на клетки кровидомашних животных§ 9.1. Действие модулированного ультразвука на клетки крови здоровыхмелких домашних животныхМорфологические изменения клеток крови кошек под действиеммодулированного ультразвукаПример клеточного ответа на инсонацию модулированным УЗ приведён по результатамизменений лейкограмм молодых здоровых кошек возраста 2–3 лет, выявленных методомсветовой микроскопии (таблица 22).Таблица 22. Лейкограммы после обработки крови молодых здоровых животных модулированным УЗ приразличных режимах модуляции (M ± m, p < 0.05)Интенсивность,частота модуляцииЭМБЛПСПримечаниеи время обработки8.04.10.7136.08.044КонтрольГруппа кошек10 особей.± 0.2± 0.3± 0.02± 1.1± 0.2±2Лейкопения, относительный0.4 Вт/см24.0536.0305–6—лимфоцитоз, начало лизиса ядер800 Гц, 15 с± 0.5±2± 1.9±2и ЦП (до 10% клеток).Лейкопения, относительный0.4 Вт/см2лимфоцитоз, лизис ядер и ЦП2–43–8—62–6520–26800 Гц, 30 с(67% кл).
Нейтрофилы сложноидентифицировать.Лейкопения. Все клеткив мазке; до 90% лизис ядер20.4 Вт/см1–32–4—69–71——и ЦП. «Предгантели»,800 Гц, 45 с«гантели». Анизоцитоз,пойкилоцитоз, разрыв ЦПМ.0.7 Вт/см25.051731Очень хорошо видны4–50–280 Гц, 15 с± 0.5±3±3±2тромбоциты.Лейкоциты «рваные», лизис0.7 Вт/см22.32.046480–2—ядер и ЦП до 15%, тромбоциты80 Гц, 30 с± 0.5± 0.2±2±2в группах.Лейкопения, лизис ядер и ЦП до0.7 Вт/см22.03.0500–2—42–44 28–30%, агрегация80 Гц, 45 с± 0.5± 0.2±2тромбоцитов.0.7 Вт/см21–30–25143Лейкопения, до 15% лизис ядер——80 Гц, 60 с(лизис)(разруш.)±4±4и ЦП, тромбоциты в группах.0.7 Вт/см250% оставшихся лейкоцитовидентификация невозможна, лейкопения80 Гц, 90 сразрушены.50% лимфоцитов почти606.1полностью разрушены,0.05 Вт/см23.70.5263–4±2±умеренная лейкопения.
Лизис800 Гц, 30 с± 0.2± 0.2±20.6ядер. Моноциты — неровнаяокраска ядра, вакуолизация ЦП.1020.05 Вт/см2800 Гц, 45 сидентификация затруднена; в поле зрения деструкцияклеток и клеточные фрагменты6.0±0.32.0±0.50.4 Вт/см230 Гц, 15 с0.4 Вт/см230 Гц, 30 с0.4 Вт/см230 Гц, 45 с70% лимфоцитов почтиполностью разрушены, другиелейкоциты лизированы.6.1± 0.32.0± 0.548±24.0± 0.234±2Выраженная лейкопения, лизислимфоцитов и нейтрофилов.——62±4—36±2Выраженная лейкопения, лизислимфоцитов и агранулопения.1–3—30–34—9–16—Лейкопения, разрушениеклеток.
Все клетки в мазке.Ниже приводится полное описание способа, утверждённого в качестве нашего патента.Способ направленного акустического воздействия на функциональное состояниеклеток тканей представителей семейства кошачьихЗадачей предложенного изобретения является разработка эффективного способанеинвазивного направленного воздействия на клетки ткани животных, безопасного приреализации и не требующего дорогостоящего стационарного оборудования, специальнообученного персонала и специально оборудованного помещения, осуществление способа бездополнительных технических средств и химических реагентов; минимальная затрата времени(10–45 с); полная безопасность метода для медицинского персонала и научных сотрудников примаксимальном эффекте.Целью изобретения является плановое воздействие на клетки разных типов и размеров.Техническимрезультатомэтогоизобретенияявляется:направленноеизменениепроницаемости/структуры цитоплазматической и /или ядерной мембраны; регулированиеглубины эффекта акустического воздействия; торможение или активация транспортных системклеток; выборочное разрушение в одной ткани ядер у клеток определённого, заранее заданногоразмера; направленная супрессия роста клеток, в том числе и ненормированного; нарушениеаппарата межклеточного взаимодействия и клеточных контактов; регуляция активностивнутриклеточныхи мембран-связанныхферментов,чтодаствозможностьпроводитькупирование заболеваний различной этиологии на клеточном уровне, а также индивидуальнооценить репарационную систему клетки.Заявленный технический результат осуществляется тем, что на клеточную суспензиюобъёмом от 1 мл до 1.5 мл, содержащую (6–7) × 106 клеток/мл, помещённую в кювету,воздействуют бегущей импульсно модулированной УЗ волной с несущей частотой 0.88 МГц,диапазонами интенсивности 0.4–0.7 Вт/см2 и частот модуляции 21–50 Гц в течение 15–20 с принаправлении действия на цитоплазматическую мембрану (ЦПМ) безъядерных клеток размера 4–8 мкм и клеток размера 5–17 мкм, содержащих ядро, или интенсивностью 0.05 Вт/см2, частотой103модуляции 700 Гц в течение 30–45 с при выборе в качестве мишени ядер 5–17 мкм-клеток,содержащих ядро, и на ЦПМ безъядерных клеток размера до 4 мкм.Пробы обрабатывают в абсолютно одинаковых условиях, поддерживают постояннуютемпературу образцов в кюветах с проточным охлаждением, а также проводят анализморфологического состояния клеток методами световой микроскопии и пробой с трипановымсиним.
По окраске клетки в синий цвет, началу деформации, состоянию её ЦПМ, поморфологическим изменениям: деформации/изменению структуры ядер, ядерному лизису илиразрушению ядер, изменению структуры цитоплазмы, её вакуолизации, — определяют наличиевоздействия и выбирают необходимое направление.Воздействие УЗ с параметрами:0.05 Вт/см2, 700Гц, 30–45 с — на ядра клеток размера 5–17 мкм, содержащих ядро, и наЦПМ безъядерных клеток размера до 4 мкм;0.4–0.7 Вт/см2, 21–50 Гц, 15–20 с — на ЦПМ безъядерных клеток, размера 4–8 мкм,и клеток размера 5–17 мкм, содержащих ядро.104Морфологические изменения клеток крови собак под действиеммодулированного ультразвукаДля каждой интенсивности УЗ терапевтического диапазона спектры активных частотнайдены индивидуально, и в случае изменения уровня воздействия частоты могут меняться.
Темне менее установлено, что наиболее выраженный клеточный ответ возникает после инсонациивблизи частот модуляции, кратных 10 и далее 100 Гц.0.05 Вт/см2800 Гц, 15 с: разрушение лейкоцитов — от деформации до лизиса. Цитоплазма и ядраизменены (вакуолизация). 20 с: изменения те же, очень однообразны по всему мазку. У всехлейкоцитов вакуолизация ЦПМ и ядра, деформация ядер. 30 с: добавились нарушения границядер и ЦПМ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
