Диссертация (1151313), страница 21
Текст из файла (страница 21)
Кошка 2: 1 год. Кот 3: 1.5 года. Поликистоз. Кошка 4: 12 лет. Кошка 5: 14 лет.Липидоз печени. Контрольные измерения проводились на не облучённой крови животных, участвовавшихв эксперименте. В таблице приведены диапазоны полученных результатов измерений и среднее значение.Таблица 15. Примеры диапазонов изменений лейкограмм больных собак (индивидуально) при воздействии УЗинтенсивностью 0.05 Вт/см2 (M ± m, p < 0.05)НейтрофилыЭБ№Время (с)МЛ(p > 0.05)(p > 0.05)ПС—1НормаКонтроль 130 с Лизис.
42–50клеток в мазке45 с. Все клеткив мазке.2Контроль 215 с30 с. Лейкопения,лизис клеток,идентификации неподлежат2–600–15.1 ± 0.33–5< 3.5 >1–57.2 ± 0.22–5< 3.0 >002.5 ± 0.42–3 < 2.5 >—021–4516.5 ± 0.72–75.8 ± 0.27–9 < 8.1 >3–4 < 3.1 >1–3 < 2.4 >6–8 < 7.3 >1–2 < 1.4 >1.1 ± 0.315.6 ± 0.212.4 ± 0.21.75 ± 0.0243–7366 ± 327–30(агрегация)8–19 (агрегаты,лизис ЦПМ,подсчётзатруднён)76 ± 33.9 ± 0.311.7 ± 0.223.5 ± 0.224.8 ± 1.528.2 ± 0.7——фрагментыклеток——Примечание: Собака №1 старая: опухоль мочевого пузыря, метастазы во все органы.
После 45 с:Лизис клеток, лейкоциты деформированы, клетки неправильной формы. Пёс №2: 4 года. Дирофиляриози бабезиоз. После 30-секундной обработки пробы наблюдается лейкопения, клетки лизированы,идентификации не подлежат.91Таблица 16. Примеры диапазонов изменений лейкограмм больных лошадей. УЗ интенсивность 0.05 Вт/см2 (M ± m,p < 0.05)НейтрофилыЭБ№Время (с)МЛ(p > 0.05)(p > 0.05)ПС—12НормаКонтроль 12–61.0 ± 0.20–15.3 ± 0.42–45.6 ± 0.225–449.2 ± 0.33–62.1 ± 0.330 с.
Лейкопения, 39–50 клеток в мазке0–11–31–45–72–345 с. Все клеткив мазке.003–45–71–2Контроль 210.6 ± 0.345–6278 ± 330–34 (агрегаты,лизис ЦПМ,подсчётзатруднён)18–30 (лизис ядери ЦПМ)13.7 ± 0.45 ± 2815 с6.0 ± 0.31.4 ± 0.37.2 ± 0.321.6 ± 1.16.3 ± 0.257 ± 330 с3.7 ± 0.304.1 ± 0.215.9 ± 0.7075 ± 3Примечание: Проба №1.
Конь 3 года. Воспалительные заболевания суставов. Лошадь №2, 10 лет. Острый3.0 ± 0.57.0 ± 0.218.9 ± 1.0ринит.Основываясь на полученных результатах (таблицы 12, 13, 17), в дальнейшей работезначения интенсивности УЗ 0.05 Вт/см2 и экспозиции 30 с были приняты в качестве пороговых.При воздействии ниже этих параметров результаты незначительно отличались от контрольных.Последовательное увеличение интенсивности действующего УЗ до 2.0 Вт/см2 приводилок экспоненциальному уменьшению числа жизнеспособных клеток. При росте экспозицииозвучивания от 1 до 5 мин в поле зрения микроскопа обнаруживали морфологическиповреждённые комплексы клеток и отмечали прогрессивно возрастающий цитоцидный эффект.Изменения в лейкограммах различных животных зависели от интенсивности УЗ волны, времениэкспозиции, состояния здоровья и, в значительно меньшей степени, от вида животного.Этиология заболевания и степень его проявления никак не влияли на особенности клеточногоответа.
Однако стадия развития патологического процесса в ряде случаев (таблица 14, кошка №5;таблица 15, собаки №1, 2) в перспективе может быть выявлена при помощи разрабатываемойметодики.§ 8.5. Направления действия непрерывного ультразвука низкихинтенсивностей на лейкоциты в зависимости от возраста животныхПослеопределенияналейкоцитахздоровыхживотныхпороговогозначениябиологического действия УЗ: интенсивность 0.05 Вт/см2 и время экспозиции 30 с, былапроверенавероятностьцитотоксическоговлиянияминимальнойтерапевтическойУЗинтенсивности на кровь молодых особей и животных старшего возраста.
После указаннойэкспозиции у здоровых животных разного возраста регистрировали уменьшение процентного92содержания гранулоцитов, а число агранулоцитов несколько увеличивалось. Результат повлиянию УЗ выбранного диапазона интенсивностей на клетки крови кошек дан в таблице 17.Таблица 17. Лейкограмма кошек разного возраста после обработки крови УЗ интенсивностью 0.05 Вт/см2 (M ± m,p < 0.05)Нейтрофилы№Время (с)ЭМБЛПС1Контроль 14.0 ± 0.23.0 ± 0.20.5 ± 0.245.0 ± 0.26.0 ± 0.242.0 ± 0.2302.8 ± 0.94.6 ± 0.60.30 ± 0.0443 ± 66.4 ± 1.043 ± 2601.21 ± 0.158.0 ± 0.2046 ± 33.1 ± 0.239.
± 290012.8 ± 0.2053 ± 32.0 ± 0.228 ± 2120 (все клетки09–11024–2700в мазке)Контроль 23.0 ± 0.23.0 ± 0.21.0 ± 0.247.0 ± 0.22.0 ± 0.244.0 ± 0.22301.7 ± 0.73.3 ± 0.50.43 ± 0.0549.1 ± 1.62.3 ± 0.542 ± 260012.3 ± 0.4051.3 ± 1.21.0 ± 0.235 ± 320–29 (агрегаты,90 (все клеткилизис ЦПМ,016 ± 0.2066 ± 41.0 ± 0.5в мазке)подсчётзатруднён)Контроль 36.0 ± 0.21.0 ± 0.2042 ± 26.0 ± 0.245.1 ± 1.73303.7 ± 1.44.7 ± 0.7049 ± 23.0 ± 0.240 ± 26005.5 ± 0.2056 ± 31.7 ± 0.235 ± 21–7 (агрегаты,2–390 (15–20лизис ЦПМ,04–506–10(агрегация,клеток/мазок)подсчётлизис)затруднён)Контроль 43.0 ± 0.21.0 ± 0.21.0 ± 0.241.0 ± 0.26.0 ± 0.248.0 ± 0.24302±14.8 ± 1.21.00 ± 0.0764 ± 2030 ± 221 ± 6 (агрегаты,6006.8 ± 0.2072 ± 40подсчётзатруднён)90 (15кл/маз)0002–401–13 (фрагменты)Норма кошек0–60–11–425–550–335–75Примечание.
Группа 1 — возраст животных до 3 лет; группа 2 — от 3 до 7 лет; группа 3 — от 8 до 13; группа 4 —животные старше 14 лет.Результаты воздействия УЗ более высокой интенсивности (0.2–0.4 Вт/см2) даныв таблицах 18, 19. По действию на гранулоциты старых животных интенсивность 0.2 Вт/см2являлась пороговой: после 15 с инсонации начинался лизис гранулоциов, с повышением времениэкспозиции увеличивалось отклонение опытных данных от контроля и от результатов облученияобразцов более молодых особей.
То же время инсонации — 15 с — инициировало лизис ЦПМгранулоцитов при одновременном разрыхлении их ядер после обработки крови интенсивностью0.4 Вт/см2. В поле зрения мазков появлялось большое количество клеточных агрегатов, клетокс лизированнойцитоплазматическоймембраной,а такжелейкоцитов,непригодныхк идентификации. Увеличение экспозиции приводило к дальнейшей агрегации, появлениюклеточных фрагментов и участков из оформленных белковых масс, а также к деструктивнымизменениям всех видов лейкоцитов (таблица 19; рисунки 21а и б). В некоторых пробах вообщемогло не быть гранулоцитов.93Таблица 18.
Лейкограмма кошек после обработки крови УЗ интенсивностью 0.2 Вт/см2 (M ± m, p < 0.05)Нейтрофилы№Время экспозиции (с)ЭБМЛгруппыПС2430——3–5< 4.2 >69 ± 31–2< 1.0 >60 (все клетки в мазке)——1–333–39 (лизис)—90 (все клетки в мазке)————10–1641.4 ± 1.6—3060 (все клетки в мазке)———1–3< 2.0 >1–26–8 (фрагменты)—(агрегация)—26 ± 38–11(агрегаты,лизис ЦПМ)—57 ± 2(агрегация)0–1Необходимо отметить, что после воздействия на образцы крови УЗ интенсивностью0.4 Вт/см2 и выше в мазках «прокрашивались» тромбоциты (рисунок 21в).
Однако применяемыйнами краситель [121] тромбоциты окрашивать не должен, что подтверждали контрольныеобразцы.Таблица 19. Лейкограмма кошек после обработки крови УЗ интенсивностью 0.4 Вт/см2 (M ± m, p < 0.05)Нейтрофилы№ группыВремя экспозиции (с)ЭБМЛПС13–1–30——60 ± 321 ± 25 < 4.8 >4 < 2.5 >60 (клетки плохо———10–18—6типируемы)4голоядерные4–630——5–9—элементы(лизис)фрагменты60 (видны тромбоциты)————лизисклетокРисунок 21а. Кровь кошки. Интенсивность УЗ0.4 Вт/см2, экспозиция 30 с. Дегенеративные измененияклеток.21б. Кровь кошки. Интенсивность УЗ 0.4 Вт/см2экспозиция 1 мин.
В центре полностью разрушенныйлейкоцит.9421в. Мазок крови кошки. Лизис лейкоцитов.Интенсивность УЗ 0.4 Вт/см2, экспозиция 1 мин.Отчётливо видны тромбоциты.21г. Кровь собаки. Интенсивность УЗ 0.4 Вт/см2,экспозиция 30 с. Группа лейкоцитов. Посередине,возможно, эозинофил. Признаки начала разрушения,деформации ядер, нарушение границы ядра,растекание его по ЦП.Продолжение экспериментов по изучению влияния УЗ на кровь здоровых мелкихдомашних животных (МДЖ) в зависимости от их возраста позволили сравнить выявленныеизменения в лейкограммах собак и кошек и проследить степень и быстроту трансформациилейкограммы (таблица 20).Таблица 20. Лейкограмма здоровых собак разного возраста после обработки крови УЗ интенсивностью 0.05 Вт/см2в зависимости от времени экспозиции (M ± m)НейтрофилыЭМБЛ№Время, сП(p < 0.05) (p < 0.05) (p > 0.05) (p < 0.05)С (p < 0.05)(p > 0.05)Контроль 1,14.05.10.323.37.161.5± 0.2302.4 ± 0.84.9 ± 0.7 0.30 ± 0.0238 ± 45.6 ± 0.848 ± 46006.1 ± 0.3049 ± 24.0 ± 1.141 ± 39008.4 ± 0.3052 ±3.3 ± 0.537.4 ± 1.1120 (все кл.4–6 (дегенеративные09–11025–300в мазке)изменения)Контроль23.03.11.027.22.164.12, ± 0.2301.6 ± 0.75.4 ± 0.5 0.50 ± 0.0245 ± 42.4 ± 0.541 ± 560010 ± 2051 ± 31.2 ± 0.538 ± 2 (агрегация)20–32 (дегенеративные90 (все клетки)03–5037–400–1изменения)Норма для собак2–61–50–121–452–743–73Примечание: Группа 1 — возраст животных от 2 до 6 лет; группа 2 — животные старше 14 лет.У собак тенденция в динамике изменения сохранялась.
Обработка образцов крови УЗинтенсивностью 0.4 Вт/см2 в течение 25–30 с и дольше также вызывала необратимые измененияв клетках белой крови (таблица 21). Необратимые изменения в лейкограммах здоровых молодыхживотных начинали регистрироваться после 30-секундного озвучивания, а старшего возраста —раньше. Идентификация гранулоцитов в ряде случаев была невозможна (рисунок 21г).95Таблица 21. Лейкограмма здоровых собак разного возраста после обработки крови УЗ интенсивностью 0.4 Вт/см2в зависимости от времени экспозицииНейтрофилы№Время (с)ЭМБЛгруппыПС30—1–4 —54–591–329–36 (агрегация)160 (клетки плохо типируемы)———12–15—2–430 (клетки сложнолизис0–3 (дегенеративные——10–16—идентифицируемы)ЦПМизменения)260——— фрагменты—лизисПримечание: все клетки в мазке.
Группы — как в таблице 20.§ 8.6. Морфологические изменения клеток крови в непрерывномультразвуковом полеКаждаяинтенсивностьи экспозициявносиличто-тосвоёв цепочкуцитоморфологических изменений. Остановимся на тех из них, которые были выявлены послемикроскопии мазков крови. Если бы исследование опиралось лишь на определение измененийв лейкограммах (наиболее удобный и распространённый вид лабораторной диагностикив клиниках), этих данных мы бы не получили. Представляем некоторые параметры облученийи краткие результаты (p < 0.05).Кошка.0.7 Вт/см2,15 с.Началоагрегациилимфоцитов;25 с —тромбоцитови сегментоядерных нейтрофилов. Лейкограммы в пределах референтного ряда.Собака. 0.05 Вт/см2, 45 с.
Лейкограмма без особенностей (при этом у кошки — сдвигвлево). Деформация клеток, у 5% лейкоцитов начало лизиса ЦПМ.0.4 Вт/см2, 30 с. Начало агрегации гранулоцитов.Качественные изменения клеток крови, вызванные непрерывным, импульсными модулированным УЗ, были во многом схожи: в любом случае клетки крови после УЗ выглядятпод микроскопом как после механического воздействия: увеличение площади, деформация,выход гранул гранулоцитов в межклеточное пространство и так далее. Ниже приводятсянаиболее иллюстративные примеры воздействий.96Разные виды лейкоцитов мелких домашних животных без воздействияультразвукаНиже представлены снимки контрольных мазков крови кошек (рисунки 22а–г) и собак(рисунки 22д, е).Рисунок 22а. Эозинофил.22б.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
