Диссертация (1151313), страница 26
Текст из файла (страница 26)
В большинстве случаев экспозиция, при которой агрегируютнейтрофилы, уже полностью разрушала эозинофилы.Результаты направленного воздействия ультразвука на клетки кровилошадей и мелких домашних животныхПосле определения диапазонов активных частот, позволяющих направленно влиять наразличные клеточные структуры и на каждый вид лейкоцитов в отдельности, с цельюподтверждения объективности полученных результатов был проведён анализ изменения клетоккрови разных видов животных. Кровь лошади смешивали с кровью собаки или кошки 1:1 пообъёму. В таблице 26 представлена часть полученных результатов действия амплитудномодулированного УЗ на клетки крови домашних животных.Необходимо отметить, что в большинстве случаев в смешанной крови видовуюпринадлежность каждого отдельного лейкоцита определить достаточно сложно (это и не входилов задачи эксперимента).
Единственное — эритроциты лошади и собаки заметно отличаются поразмеру. Взаимодействие эритроцитов разных видов животных в УЗ поле запечатлено нафотографиях (рисунок 18 на странице 79).Таблица 26. Действие модулированного УЗ на смесь крови разных видов животных. Объём крови 1.5 мл (1:1)I,ν,t,П2Вт/см Гц с2Лошадь.
Контроль10Собака. Контроль3Кот №1. КонтрольКонтроль смеси №1 8Л+СЛ+С0.210 30 4ЖивСЛМЭБ476266594421232465661—21—2—2Без особенностей.Без особенностей.Без особенностей.474612—У 20 % клеток деформация ядер, у 30 % —разрыв ЦПМ.Деформация ядер. Разрыв ЦПМ. Полностьюразрушенных нет.«Гантели». У 90 % клеток деформированы ядра,много разрушенных клеток.Лейкоциты в группах по 2 клетки.
Разлёт ядер.4543061221601148041—3034148332ПримечанияБез особенностей.117ЖивI,Вт/см20.4ν,Гц10МЭБПримечания68913114671—63253612452285781460—2148—1—304560222282623656567368111——700 30 21969811Изменение лейкоцитов, небольшая деформацияядер у 55 % клеток. Анизоцитоз. Булавовидныеутолщения эритроцитов.70 %лейкоцитовизменены:ядра —деформация, разрыв. Все клетки: в мазке 60 – 66клеток.Единичныеразрывыядернейтрофилови лимфоцитов. У остальных ядра и ЦПМпрактически без изменения.Лейкоцитоз.60–65 %всехлейкоцитовизменены.Присутствуютвсестепениизменения.
Агрегация.Не более 68–71 идентифицируемых клетокв мазке, остальные деформированы, лизис.Изменений практически нет.Разрыв ЦПМ лейкоцитов.«Гантели». Деформация всех клеток, разрывЦПМ.10%лимфоцитовразрушеныилидеформирована ЦПМ.«Гантели»,цепочки.Изменено20%лейкоцитов — от деформации ядер до полноголизиса.5 % лимфоцитов деформированы. Лизис ЦПМ.Большинствоклетокразрушены,ноидентифицируются.Тромбоциты группами.
«Цветочки» из клеток,разрушение ядер лимфоцитов. Разрыв ЦПМи деформация всех нейтрофилов и лимфоцитов.30 % деформированных клеток. «Матрёшки» изэритроцитов собаки и лошади.«Матрёшки». Треть лейкоцитов измененав разной степени тяжести. Лизис ядернейтрофилов и базофилов.Группы тромбоцитов. Лизис базофилов.Лейкоциты разрушены. Разрыв ЦПМ, ядерноймембраны. В общей сложности разрушения до85%; «гантели».Лейкоциты практически не изменены.«Гантели». Анизоцитоз. Агрегация. Изменено30% лимфоцитов: разрежение ядер.Анизоцитоз. «Предгантели».Без особенностей.Тромбоциты огромными группами. 10 %деформация лейкоцитов, разрыв ядер и ЦПМ.5 % деформация ядра.До 90 % клеток деформированы ядра и ЦПМ.Тромбоциты в группах, более сохранны. У 50%лимфоцитов и моноцитов разрушены ЦПМи ядро.Деформация и разрушение ЦПМ и ядер 30 %всех клеток: их невозможно идентифицировать.Разрыв ЦПМ лейкоцитов.Лейкопения.
Всего до 19 клеток в мазках. Оченькрупные тромбоциты.Без особенностей.Без особенностей.Группы тромбоцитов. Разрушено 10 % всехклеток разной степени выраженности.200.7t,с10ПСЛ4511860—3045—5–23*71–866–9——6020–30*56–8410–122—45398—4800 30 41.010455404351660322645—6304561240224264724—1—6030442146053792738166231———45601—4418487379————302543473—45601—35—5312972———3033147444439414946465211—Контроль №2 Л+К10.410Л+К10.430Кот №2. КонтрольКонтроль №3 Л+К2Л+К20.4800118I,Вт/см2Живν,Гцt,сСЛ——38295461МЭБ7101———ПримечанияРазрежение ядер.В группахтромбоциты.Деформацияи «растекание»ядерсегментоядерныхнейтрофилов и лимфоцитов.Примечания. В таблице дано M; m < 1% от относительного количества клеток каждого вида.* Агрегация нейтрофилов.
Одинаковая вероятность встретить в поле зрения агрегат на несколько десятков клеток,либо не встретить их вовсе.Таким4560Побразом,выявленыосновныефизиологические,биофизическиеи цитоморфологические эффекты действия модулированного УЗ несущей частоты 0.88 МГци частоты модуляции 10–1000 Гц на эритроциты, лейкоциты и тромбоциты кошек, собаки лошадей. В зависимости от экспозиции, у всех видов животных наблюдали одинаковыеэффекты: лейкопения, цитолиз, деструкция и агрегация клеток, вспенивание цитоплазмыгранулоцитов, разрыв ЦПМ, деформация и взрыв ядер.§ 9.3.
Действие модулированного ультразвука на клетки кровиинвазированных животныхВлияние ультразвука на клетки крови больных дирофиляриозом собакКровь здоровых и больных собак обрабатывали УЗ интенсивностью ISATA 0.4 Вт/см2,частотамодуляции10 Гци 900 Гц,несущаячастота0.88 МГц,продолжительностьвоздействия — 5–60 с, шаг 5 с. Выбор частот модуляции определён поставленной задачей:изучить возможность направленного УЗ воздействия на клетки крови животных примоноинвазиях и смешанной инвазии экспериментально выявленным нами диапазоном частот,действующих, в основном, на нейтрофилы и эритроциты больных и здоровых собак.Дирофиляриоз — гельминтозное заболевание, вызываемое нематодами отряда Spirurida,подотряда Filariata, семейства Filariidae рода Dirofilaria.
На территории РФ распространеныв основном D. immitis, половозрелая особь которой паразитирует в лёгочных артериях и сердце,вызывая сердечно-лёгочную форму заболевания, и D. repens, живущая в подкожной клетчаткеи мышцах хозяина, вызывая кожную форму болезни. Длина взрослых особей доходит до 30–40 см.
Дефинитивным хозяином для дирофилярий чаще всего бывают домашние собаки и другиепсовые;заболеваниерегистрируюттакжеу представителейсемействакошачьих.Промежуточный хозяин — комары семейства Culicidae (роды Aedes, Culex, Anopheles) [34, 35;127; 227].119Изменения гематологических показателей при дирофиляриозе.
При исследованииживотных, заражённых дирофиляриозом и имеющих микрофиляремию, получены результаты,несколько отличные от данных других авторов [20; 127; 227]. Так, количество (p < 0.05)тромбоцитов, эритроцитов, форма клеток крови, а также активность АсАТ, содержаниемочевины и креатинина оставались в пределах нормы. Колебания отмечены в значениях такихпоказателей, как содержание билирубина (3.2–5.5 мкмоль/л), общего белка (75 до 85 г/л),активность АлАТ (100–315 МЕ/л), ЩФ (340 до 980 МЕ/л); СОЭ могла увеличиваться до 24 мм/ч.Содержание гемоглобина и лейкоцитов иногда превышало норму в 1.4 раза или приближалоськ её верхним границам. Изменения в лейкограмме у животных, заражённых дирофиляриозоми имеющих микрофиляремию, показаны в таблице 27.
Отмечали также уменьшение в 2–2.5 разачисла тромбоцитов. Значения гематокрита были немного снижены или близки к норме (p > 0.05).120Таблица 27. Изменение лейкограммы инвазированных собак под действием модулированного УЗ интенсивности 0.4 Вт/см2 (p < 0.05)Группы животных /Параметры УЗКонтроль–1. ЗдоровыеживотныеКонтроль–2. Животныесо смешанной инвазиейбабезиози дирофиляриозКонтроль–3. Животныес бабезиозомКонтроль–4. Животныес дирофиляриозомГруппа 2 (смешаннаяинвазия)Частота модуляции10 Гц 15 с10–20 Гц, 25–30 с800 Гц, 15 сНейтрофилыП3–7<3.4>ЭффектЭБМЛ—2–4<3.2>0–2<1.0>2–4<3.1>22–43<29>—16 ± 23.2± 1.09.6± 1.012.3 ± 0.723 ± 214 ± 222.0 ±1.2—4–80–15–712–35—6–842–65—1–21–23–76–85–88–1069–7230–4(лизис)233–6 (сохраненымалочис.группы, лизис)24 (лизис)29 (лизис)9–14 (лизис)00–3(лизис.Идентиф.сложно)2–162–10(лизис ЦПМи ЦП Идентиф.сложно.Включения)5–28(агрегация)6–49(разрыв ЦПМ,ядер, вспениваниеядер и ЦП)0Клетки в группах, лизис ядери клеточных стенок.3–4 (теникл)2–411–20 (тениклеток)14–1621 ± 3 (лизис,агрег.)20–21 (тениклеток)Клетки в группах, в том числев больших,лейкопения;вытягивание эритроцитов.10–20(тениклеток)4 (лизисЦПМ)Клеткив группах,лейкопения.Идентифицировать сложно;у 20% лизис ядра и ЦП.Тромбоциты разного размера.Все клетки в мазке.
Ядрасодержат зернистость или,наоборот,вакуолизир.Окраскаядери ЦПнеоднородна, неспецифична.Гемолиз.0С44–69<57>4–53127(лизис,9–15 (лизис)(лизис)(лизис)деструкция)2–7Все клетки в мазке; гемолиз414 (лизис3–343–25900 Гц, 30 с0(фрагменты0эритроцитов.(лизис ядер)клеток)(агрегация)(ядра разрушены)малых)900 Гц, 45 с (лизис ядер, ЦПМ и ЦП лейкоцитов; изменено почти 100% клеток, тени клеток; гемолиз). Повышение времени инсонации — булавовидные утолщенияэритроцитов, фигуры, «гантели».0.31 ± 0.023.3 ± 0.243 ± 6(началоГруппа 3 (бабезиоз)(начало(начало7.3 ± 0.237 ± 4—4.1 ± 0.2лизиса10 Гц, 15 слизисализисаЦПМ)ЦПМ)ЦПМ)900 Гц, 15 с3(разрыхление ядер)Ю15–22121Группы животных /Параметры УЗЭффектГруппа 3 (бабезиоз)10 Гц 30 сВсе клетки в мазкеГруппа 4(дирофиляриоз) 900 Гц,15 сПроницаемостьЦПМэритроцитов, изменение ядерлейкоцитовГруппа 4(дирофиляриоз) 900 Гц,30 сЛизис ЦПМ эритроцитови ядер лейкоцитовГруппа 4(дирофиляриоз) 10 Гц,15 сВспениваниегранулоцитов,лейкоцитовНорма для собакядердеформацияНейтрофилыПЭБМЛ0–2 (лиз.ЦПМ)—2–37–18(агрегация)—2–5(дегенеративныеизменения)5.1 ± 0.323 ± 517 ± 214.1 ± 0.52–3(лизис)37–4648–55(агрегация)2–5 (лизис)1–3 (лизис)19 ± 215.4 ± 0.535 ± 402–743–731.0 ± 0.5Ю1.0 ± 0.5(началолизисаЦПМ)(началолизисаЦПМ)——1.0 ± 0.51.0 ± 0.54.6 ± 0.22–60–11–524 ± 3(в основномсредниеи малые)21–45С6–11(агрегациякл., разрывЦПМ)39 ± 5(началолизисаЦПМ)Клинические наблюдения за инвазированными собаками показали, что дирофиляриозу большинства животных протекал без видимых симптомов болезни, но с тяжёлымиосложнениями.Действие ультразвука на клетки крови больных дирофиляриозом животных in vitro.После 30 с обработки проб крови больных животных наблюдали лейкопению, лизисклеток, невозможность их идентификации [106].
В представленном исследовании былообнаружено: изменение формы эритроцитов, анизоцитоз, пойкилоцитоз; изменение процентногосостава лейкоцитов, их структуры. Подобную картину наблюдали в пробах крови заражённыхD. repens животных уже после 15-секундной УЗ обработки при I =0.4 Вт/см2, у здоровыхживотных — после 30 и более секунд. При микроскопии окрашенных мазков были выявленыдирофилярии и частичное или полное разрушение всех видов лейкоцитов (рисунок 26).Модуляция 800–1000 Гц в течение 15 с вызывала агрегацию лейкоцитов, лизис их ядери цитоплазматических мембран. Увеличение до 45 с экспозиции приводило к появлениюв мазках теней клеток и полному лизису всех видов лимфоцитов. Лейкограмма в целомпретерпевала значительные изменения. Было обнаружено, что молодые и незрелые формыклеток сохраняются значительно дольше в поле бегущей УЗ волны.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
