Диссертация (1151313), страница 27
Текст из файла (страница 27)
При обработке УЗ кровибольных животных через 25 с начинался гемолиз эритроцитов. Строение гранулоцитов менялосьв зависимости от экспозиции, вплоть до полного лизиса клеток. У нейтрофилов наблюдалипоследовательную деформацию и «вспенивание» ядра, «вакуолизацию» цитоплазмы. 10–20 Гцмодуляция также приводила к существенному сдвигу лейкограммы влево. При этом клетки былосложно идентифицировать, у 20% из них были лизированы ядра и /или цитоплазма, а их окраскабыла неоднородна и неспецифична. Ядра могли быть «вакуолизированы» или содержатьзернистость, что существенно затрудняло идентификацию.
Во всех пробах выявленытромбоциты разного размера. В большинстве случаев отмечена иктеричность сыворотки крови,возможно, вызванная УЗ гемолизом эритроцитов. Увеличение частоты модуляции до 1000 Гц,терапевтической интенсивности УЗ — до 1.0 Вт/см2 и времени экспозиции до 10 мин показалоотсутствие отрицательной реакции со стороны D. repens на бегущую УЗ волну на фоне полнойдеструкции клеток крови.
Жизнеспособность паразита сохранялась.123а) Микрофилярия(контроль).б) Микрофилярия и группа в). «Вспенивание» ядраг). «Вспенивание»лейкоцитовпалочкоядерного нейтрофилаэритроцитов полес разрушениями разнойи группы эритроцитов послеинсонации.степени выраженностивоздействия УЗ.после действия УЗ.Рисунок 26. Увеличение 1000, иммерсия. Окраска ДИФФ-КВИК. УЗ 0.4 Вт/см2, 10 Гц, 30 с.Бабезиоз собак — протозойная природно-очаговая трансмиссивная болезнь, вызываемаяпростейшими отряда Piroplasmida, семейства Babesiidae, рода Babesia, протекающая сверхостро,остро и хронически. Заболевание широко распространено по всему миру, и широтараспространения определяется ареалом обитания иксодовых клещей, передающих заболеваниечерез укус [18, 106, 378]. Род Babesia включает в себя большое число видов.
Для собак наиболееопасны B. canis и менее распространённая в средней полосе России B. gibsoni. Бабезии являютсявнутриклеточными паразитами, поражающими эритроциты, иногда нейтрофилы. Возбудителивнутри клеток имеют грушевидную, овальную или округлую форму, располагаютсяпреимущественно попарно, но могут быть и одиночные бабезии в эритроцитах. Размер B.
canisсоставляет 3–5 μ, B. gibsoni значительно меньше. У заболевания наблюдается сезонность, чтов свою очередь связано с циклом развития иксодового клеща [18, 36, 37].В последние 10 лет выявлена связь между тяжестью течения бабезиоза и формой,размером, расположением, числом бабезий в клетках крови (эритроците, нейтрофиле) и плазмепериферической крови. Не выявлено породной, половой и возрастной предрасположенностик бабезиозу [18, 37, 260]. Бабезии обнаруживают при микроскопии мазков, окрашенных поРомановскому‒Гимзе [37; 106].Изменения гематологических показателей при бабезиозе.
У собак, больных бабезиозом,биохимические и общеклинические показатели крови отличались от аналогичных показателейсобакс микрофиляремией.В зависимостиотинтенсивностиинвазиипоказателиобщеклинического анализа крови могли колебаться в следующих пределах (p < 0.05):гематокрит — от 8.9% до нормы, содержание эритроцитов — от 1.25 × 1012/л до нормы,тромбоцитов — от 11 × 109/л до нормы, лейкоцитов — 2.3–35 × 109/л, СОЭ — 1–19 мм/ч.Закономерность в сдвиге ядра выявить не удалось.
Характер изменения биохимическихпоказателей также напрямую зависел от степени поражения организма бабезиозом. Содержаниеобщего белка составляло 46–79 г/л, количество общего билирубина в крови колебалось от124нормальных значений до 1260 мкмоль/л (p > 0.05), мочевины (p > 0.05) — от 2.3 до 80 ммоль/л,креатинина (p > 0.05) — от нормальных значений до 1200 мкмоль/л (у животных со вторичной,по отношению к основному заболеванию, острой почечной недостаточностью). Активностьферментов изменялась в диапазоне от нормальных значений до следующих: АсАТ — до360 МЕ/л (p > 0.05), АлАТ — до 510 МЕ/л, ЩФ — до 1340 МЕ/л, ЛДГ — до 847 МЕ/л (p > 0.05).Отмечены следующие изменения гематологических показателей при смешаннойинвазии. Гематокрит понижен в 1.2–1.3 раза; СОЭ составляла 42–45 мм/ч; содержаниегемоглобина, лейкоцитов, эритроцитов — в пределах нормы, тромбоцитов — в 4–5 раз меньшенормы (p < 0.05).
Уровень глюкозы не изменялся. Превышало норму содержание общегобилирубина — в 3 раза, мочевины и активности АлАТ — в 2.7–7.5 раз, содержания креатининаи активности АсАТ — в 1.8–4.8 раза, активности ЩФ — в 3–11 раз. Сыворотка крови иктерична.Лейкограммы характеризовались значительным увеличением (таблица 27 на странице 120) числамоноцитов (в 1.7–5.7 раз), уменьшением количества сегментоядерных нейтрофилов (в 2–4 раза)и лимфоцитов (в 1.7–3.5 раз) по сравнению со здоровыми животными (p > 0.05). Сильныйразброс данных объясняется значительными колебаниями референтного ряда для каждого видаживотных и невозможностью в большинстве случаев сравнить лейкограммы одних и тех жеособей до инвазирования и после лечения: большинство хозяев делают анализ крови питомцамтолько в острый период болезни и после выздоровления.
У всех наблюдаемых ранее животныхс бабезиозом или дирофиляриозом не выявлено такого выраженного сдвига ядра влево (юныхформ нейтрофилов в лейкограмме более 25%), как у собак со смешанной инвазией. Присмешанной инвазии в крови обнаружено большое число юных форм нейтрофилов; лизислейкоцитов начинался на 10-й секунде УЗ воздействия. При микрофиляремии у больныхживотных наблюдали сдвиг ядра влево, но не так сильно выраженный.Изменения цитологических показателей после УЗ обработки крови при бабезиозе,дирофиляриозе и смешанной инвазии. Применяемый авторами метод окраски ДИФФ-КВИКпозволил выявить наличие возбудителей как дирофиляриоза D.
repens, так и бабезиоза B. canisв крови животных. Поэтому необходимость использования более длительного метода окраски поРомановскому–Гимзе отпала, и мы во всех исследованиях пользовались набором для быстрогодифференцированного окрашивания мазков крови.
После УЗ обработки в течение 10 с пробкрови животных со смешанной инвазией могли наблюдать изменения формы эритроцитов(рисунок 27г) и их структуры. Гемолиз эритроцитов при УЗ обработке крови животныхс дирофиляриозом наступал через 25 с; бабезиозом — через 30 с, со смешанной инвазией —через 18–20 с. Отмечено начало лизиса клеток белой крови уже на 10-й секунде обработкиультразвуком, что осложняло их идентификацию. Похожую картину наблюдали в пробах кровиживотных с моноинвазиями (D. repens или B. canis) после 15-секундной УЗ обработки.125(в контроле — после 30 с и дольше.) При микроскопии окрашенных мазков были выявленыдирофилярии, бабезии и частичное или полное разрушение всех видов лейкоцитов (рисунок 27а).У нейтрофилов происходили последовательно «вакуолизация» цитоплазмы, деформацияи разрыв ядер и цитоплазмы.
Так же, как и в крови собак с моноинвазиями, молодые формыклеток сохранялись дольше на фоне нарушения целостности ЦПМ и ядер.УЗ волна с интенсивностью 0.4 Вт/см2 и частотой модуляции 10 Гц и 900 Гц вызывалаклеточную агрегацию, изменяла форму эритроцитов, лейкограмму и структуру лейкоцитовживотных с паразитемией (таблица 27 на странице 120). Цитологические изменения в клеткахкрови собак со смешанной инвазией наступали значительно раньше, чем у животныхс моноинвазиями — микрофиляремией или бабезиозом.При действии на кровь животных со смешанной инвазией (бабезиоз и дирофиляриоз)модуляция УЗ 900 Гц в течение 15 с вызывала агрегацию лейкоцитов, разрыхление их ядери лизис цитоплазматических мембран. Увеличение экспозиции до 45 с приводило к появлениюв мазках теней клеток и почти полному (более 97%) лизису всех видов лимфоцитов.
Лейкограммав целом претерпевала значительные изменения. После 15 с действия модулированного УЗс частотой 900 Гц количество сегментоядерных нейтрофилов по сравнению с контролемсокращалось в 1.5–2.4 раза, а число юных и палочкоядерных нейтрофилов составляло до 50% отобщего числа лейкоцитов. Молодые и незрелые клетки разрушались последними (таблица 27).Строение гранулоцитов менялось в зависимости от экспозиции, вплоть до полного лизиса клеток.У нейтрофилов наблюдали деформацию и «вспенивание» ядра, вакуолизацию цитоплазмы.Разрушение начиналось с клеток, содержащих внутриклеточных паразитов. Частота модуляции10 Гц также приводила к существенному сдвигу лейкограммы влево. При этом клетки былосложно идентифицировать, у более, чем 20% из них, были лизированы или разорваны ядра и /илицитоплазма, а их окраска была неоднородна и неспецифична. Ядра могли быть вакуолизированыили содержали зернистость.
Во всех случаях отмечена иктеричность сыворотки крови, вызваннаяУЗ гемолизом эритроцитов. Во всех мазках крови, обработанной УЗ, в поле зрения микроскопаобнаружено большое количество тромбоцитов разного размера (рисунок 27в). По нашемумнению, это следствие более глубокой окраски клеток крови после УЗ воздействия, но,возможно, и влияние процесса двойной инвазии. После действия на пробы кровимодулированным УЗ активность ЩФ, АсАТ и АлАТ возрастала в 3 и более раз, что, повидимому, вызвано разрушением клеток.На рисунках 27а–з представлены фотографии мазков крови собак со смешанной инвазиейпосле воздействия модулированным УЗ интенсивностью 0.4 Вт/см2.126Рисунок 27а.
Клетки крови собаки после 15 с обработки УЗ,частота модуляции 900 Гц: нейтрофил юный (1, 2)и сегментоядерный (3).27б. Клетки крови собаки после 15 с обработкиУЗ, частота модуляции 10 Гц: лизис юныхи сегментоядерных нейтрофилов, деформациялимфоцита.27в. Клетки крови собаки после 15 с обработки УЗ, частотамодуляции 10 Гц: тромбоциты разного размера.27г. Клетки крови собаки после 30 с обработкиУЗ, частота модуляции 10 Гц: разрыхление ядернейтрофилов: юного (1) и сегментоядерного (2).27д.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
