Диссертация (1151313), страница 31
Текст из файла (страница 31)
Агрегациялизированные и вспенивание тромбоцитов. Бобовидные и веретенообразные эритроциты.а)б)Рисунок 50. Проба № 56, кровь кошки. Режим: 0.4 Вт/см2 — 800 Гц — 60 с; Е = 0.67 кВ/м, 20 мин. а) Потокиэритроцитов изменённой формы. Разливы ЦП, агрегация и изменение площади тромбоцитов. б) Край мазка. В полезрения только мозаично выстроенные эритроциты и неопознаваемые клеточные фрагменты.148Рисунок 51. Проба № 58, кровь кошки. Режим: непрерывный УЗ, 0.7 Вт/см2, 60 с; E = 3.03 кВ/м, 30 мин.«Предгантели», «цепочки» и другие фигуры из эритроцитов.Изменения лейкоцитов происходили больше, глубже и устойчивее, чем измененияэритроцитов.
Регистрировали увеличение размера и яркости зернистости эозинофилов. Посленахождения в СЭП изменения сохранялись.Анализ физиологического состояния клеток крови в СЭП было решено провести отдельноот акустического для выявления особенностей действия. Было обнаружено, что после 25–30 минут воздействия СЭП напряжённостью 3.03 кВ/м также вызывает агрегацию клеток, лизисядери цитолиз,начинаяс лейкоцитов(рисунок 52а),и гиперагрегациютромбоцитов.Эритроциты тоже выстраиваются в «потоки» и другие фигуры, накладываются друг на друга,однако их целостность не уменьшается.
Начиная с 25 мин воздействия в мазках регистрировалиначалоизмененияформыэритроцитов:веретенообразность,каплевидность.Новеретенообразность клеток была выражена меньше, чем после сочетанного действия двух полей.Начиная с 35 мин регистрировали образование теней клеток и «предгантелей», но единичных помазку.
Интересно также, что если в УЗ поле деструктивные изменения происходят постепенно,можно отследить их постадийно от мазка к мазку (образование «гантелей», выход гранули цитоплазмы из клетки, деструкция ядер), то в СЭП похожие изменения происходят149лавинообразно.
В двух последовательно взятых пробах с интервалом 5 мин вслед за отсутствиемизменений сразу регистрировали тотальную клеточную деструкцию. В крови кошек деструкциянаступает заметно ранее, чем в крови других животных, сразу вслед за агрегацией тромбоцитов(рисунок 52б).Агрегацию регистрировали и в УЗ, и в СЭП, причём в обоих случаях in vitro она носиланеобратимый характер, что позволяет предположить, что она может быть вызвана изменениемповерхностного заряда клеток.Рисунок 52а. Кровь собаки. Режим: E = 3.03 кВ/м,35 мин. Лизис клеток, изменение ядер. Тромбоцитыразной площади52б. Кровь кошки. Режим: E = 3.03 кВ/м, 30 мин.Разрыв (по центру) и лизис ядер лейкоцитов.Агрегация и лизис тромбоцитов.Наложение двух видов полей — акустического и электростатического — показало, чтоизменение формы клеток крови и их агрегация может происходить под действием как УЗ, таки СЭП.
Из всех проведённых опытов не было ни одного случая, чтобы клетки, образовавшиеассоциатыв УЗполе,вернулисьбыв нативноеобособленноесостояниев полеэлектростатическом, или будучи освобождены от физических воздействий. Это наблюдениесправедливо и относительно изменённой формы клеток.15011. Изучение изменения ферментативной активности§ 11.1. Направления изменения активности ферментов гомеостаза врезультате непрерывного ультразвукового воздействияИзменение активности ферментов в плазме крови домашних животных определяли послевоздействия на образцы цельной крови непрерывной бегущей ультразвуковой волной. Передопределением активности ферментов в плазме крови, как было указано (§ 4.2. Методикаобработки цельной крови и сыворотки на странице 43), УЗ воздействию подвергали образцыцельной крови, а после отделения клеток проводили биохимический анализ плазмы(§ 5.3.
Биохимические методы на странице 47).Результаты измерений по всем группам животных представлены в таблице 33.Таблица 33. Изменение активности ферментов плазмы крови животных после воздействия непрерывного УЗ(M ± m)ИнтенсивностьАлАТ,АсАТ,КК,ЩФ,ЛДГ,Время обработкиУЗ, Вт/см2МЕ/лМЕ/лмкмоль/лМЕ/лМЕ/лКошки. Группа № 2: здоровые особи 3–7 летНорма—10.6–604.8–4553–1508–7655–164Контроль056 ± 327 ± 3115 ± 519 ± 260 ± 452 ± 326 ± 2112 ± 3*22 ± 271 ± 50.0553 ± 225 ± 2110 ± 5*25 ± 374 ± 50.245–60 c50 ± 423 ± 4106 ± 5*34 ± 3114 ± 5*0.452 ± 427 ± 4103 ± 5*40 ± 4119 ± 6*0.7Собаки. Группа № 3: здоровые особи 7–8 летНорма—10–588–4226–13010–7024–219Контроль040 ± 245 ± 296.2 ± 1.270 ± 5200 ± 637 ± 3115 ± 2*122 ± 2*90 ± 5560 ± 7*0.0545–60 c29 ± 8109 ± 2*164 ± 2*126 ± 7 410 ± 10*0.241 ± 672.3 ± 0.7* 173.1 ± 0.4* 119 ± 3* 550 ± 10*0.4Лошади.
Группа № 1: здоровые особи 6–12 летНорма—0–12115–28776.8–174.571–288125–381Контроль06±2175 ± 583.7 ± 0.6182 ± 3199 ± 44 мин**5±2186 ± 2165 ± 5330 ± 5378 ± 50.0530–60 c6±2315 ± 3213.5 ± 1.5276 ± 7391 ± 140.260–90 c4.2 ± 0.9282 ± 19147 ± 7319 ± 4511 ± 90.460 c4.7 ± 1.3246 ± 4172 ± 2395 ± 9370 ± 50.790 c7±2184 ± 472 ± 2213 ± 6210 ± 790 c7±2161 ± 468 ± 3397 ± 6154 ± 21.0Примечания.*p < 0.05**в плазме крови лошадей активность ферментов оставалась в пределах контрольного уровня при УЗобработке от 30 с до 4 мин. Достоверные изменения при данной интенсивности начинали регистрировать от 4 мининсонации.Активность АлАТ плазмы крови домашних животных мало отличалась от активностифермента в контроле при всех режимах УЗ воздействия.
Активность АсАТ в пробах крови кошекменяется мало, в пределах 5 МЕ/л, а активность КК — выше или примерно равна контрольномууровню при всех испытанных режимах. У собак — во всех опытах выше контроля и переходит151верхнюю границу нормы. У лошадей при интенсивности УЗ 0.05–0.7 Вт/см2, 60 с, — вышеконтроля и уменьшается при повышении времени экспозиции и интенсивности УЗ.Активность ЩФ плазмы крови всех животных реагирует повышением на все режимы УЗобработки.
Активность ЛДГ повышалась во всех опытах, иногда очень значительно (например,у собак на интенсивности 0.4 Вт/см2), за исключением понижения у лошадей на интенсивности1.0 Вт/см2.Изменения активности ферментов сыворотки крови лошадей начинали регистрироватьпосле 30 с, то есть чуть раньше, чем в сыворотке крови собак и кошек при той же интенсивностиУЗ. Возможно, это связано с чисто механическим воздействием на раствор.
При инсонациисыворотки крови МДЖ интенсивностью, превышающей 0.7 Вт/см2, наблюдали угнетениеферментативной активности, вызванное, по-видимому, возникновением УЗ кавитации в растворе[74–76]. В сыворотке крови лошадей подавление активности большинства ферментовпроисходило при воздействии УЗ интенсивностью от 1 Вт/см2 и выше.§ 11.2. Изучение активности ферментов крови после действия амплитудномодулированного ультразвукаФерментативную активность определяли после обработки УЗ как цельной, таки сыворотки крови. Это позволило бы приблизиться к пониманию основных механизмовдействия на клетки ткани спектра активных частот модуляции.
Образцы крови взрослыхздоровых животных обрабатывали амплитудно-модулированным УЗ из экспериментальноустановленного диапазона частот модуляции, направленно действующего на клетки белойи красной крови: на ЦПМ, цитоплазму и ядра ядросодержащих клеток. Основные результатысведены в таблицу 34.Таблица 34. Изменение активности ферментов крови после обработки сыворотки крови модулированным УЗв течение 90 с (M ± m, p < 0.05)Интенсивность Частота модуляции, АлАТ, АсАТ,КК,ЩФ,ЛДГ,УЗ, Вт/см2ГцМЕ/лМЕ/л мкмоль/л МЕ/лМЕ/лКошкиКонтроль—56 ± 3 27 ± 3115 ± 519 ± 260 ± 470–8064 ± 2 32 ± 2135 ± 421 ± 387 ± 60.0580098 ± 3 55 ± 2107 ± 427 ± 351 ± 21070 ± 5 40 ± 2118 ± 620 ± 259 ± 30.42017 ± 4 45 ± 3108 ± 430 ± 257 ± 33061 ± 4 48 ± 2110 ± 229 ± 355 ± 480061 ± 2 30 ± 280 ± 325 ± 2 110 ± 510–2069 ± 3 44 ± 3196 ± 616 ± 258 ± 30.780063 ± 2 33 ± 378 ± 435 ± 3 116 ± 7СобакиКонтроль—25 ± 2 29 ± 3 121 ± 11 15 ± 4 106 ± 51022 ± 2 33 ± 2124 ± 518 ± 3 105 ± 50.0590–10027 ± 2 35 ± 2145 ± 520 ± 2 128 ± 6152ИнтенсивностьУЗ, Вт/см2Частота модуляции, АлАТ, АсАТ,КК,ЩФ,ЛДГ,ГцМЕ/лМЕ/л мкмоль/л МЕ/лМЕ/л20030 ± 2 31 ± 4101 ± 516 ± 3 110 ± 650028 ± 2 29 ± 2120 ± 315 ± 2 102 ± 580024 ± 2 30 ± 2113 ± 411 ± 276 ± 310–2020 ± 4 25 ± 6124 ± 919 ± 4 117 ± 110.22005±226 ± 2114 ± 616 ± 4 104 ± 3100026 ± 3 29 ± 4128 ± 511 ± 376 ± 22025 ± 3 23 ± 2150 ± 715 ± 3 119 ± 40.43022 ± 3 28 ± 3120 ± 417 ± 2 122 ± 34017 ± 4 37 ± 4180 ± 616 ± 3 114 ± 55022 ± 3 29 ± 2217 ± 414 ± 3 120 ± 46013 ± 3 21 ± 6123 ± 515 ± 2 107 ± 3804±128 ± 4118 ± 329 ± 3 215 ± 5400–60024 ± 2 27 ± 3119 ± 316 ± 2 244 ± 5800–90076 ± 4 92 ± 3122 ± 417 ± 3 209 ± 6100023 ± 2 24 ± 3117 ± 518 ± 3 118 ± 410–508±226 ± 2129 ± 312 ± 2 120 ± 50.780024 ± 2 30 ± 2110 ± 516 ± 4 120 ± 410–2024 ± 3 19 ± 2145 ± 413 ± 288 ± 21.0Примечание.
В связи с малым изменением активности ЩФ в сыворотке крови лошадей при воздействии активныхчастот модуляции из экспериментально выявленного диапазона активность фосфатазы в таблице не приводится.Таблица 34 (продолжение).Интенсивность Частота модуляции,УЗ, Вт/см2ГцЛошадиКонтроль—100.0590100200500800100.22001000100.420–3050–60808001000100.750100800101.01000АлАТ,МЕ/лАсАТ,МЕ/лКК,мкмоль/лЛДГ,МЕ/л.8±28±210 ± 211 ± 315 ± 311 ± 314 ± 212 ± 33.0 ± 1.59±29±25.3 ± 1.713 ± 22.0 ± 1.09±29±212 ± 25.1 ± 1.95.1 ± 1.98±28±210 ± 2320 ± 5317 ± 5329 ± 4359 ± 8323 ± 4319 ± 4319 ± 4307 ± 6397 ± 11307 ± 5334 ± 6316 ± 9304 ± 6316 ± 9312 ± 11327 ± 6317 ± 5318 ± 4265 ± 7326 ± 7320 ± 6313 ± 6173 ± 6180 ± 4184 ± 5191 ± 4148 ± 5164 ± 5163 ± 5178 ± 5267 ± 8162 ± 7118 ± 5175 ± 7168 ± 7181 ± 6166 ± 5205 ± 5199 ± 7193 ± 5196 ± 4199 ± 5191 ± 5198 ± 4143 ± 4254 ± 7269 ± 6315 ± 7256 ± 6276 ± 11232 ± 9277 ± 11246 ± 9219 ± 8233 ± 7258 ± 11267 ± 8268 ± 5243 ± 8261 ± 3282 ± 6300 ± 15221 ± 9277 ± 11216 ± 9285 ± 12Активность АлАТ сыворотки крови кошек и собак при воздействии модулированным УЗв основном увеличивалась или примерно была равна контролю, за исключением отдельныхзначений (падение у кошек — 0.4 Вт/см2, 20 Гц; у собак — 0.2 Вт/см2, 200 Гц; 0.4 Вт/см2, 40 Гц,60 Гц и 80 Гц; 0.7 Вт/см2, 10–50 Гц).
В сыворотке крови лошадей также активность уменьшалась153лишь при некоторых режимах обработки, в основном оставаясь на уровне, соответствующем илипревышающем контрольный.Активность АсАТ кошек на всех режимах воздействия также в основном возрастала.У собак отмечали колебания активности, часто на уровне контрольных величин. Ферментативнаяактивность значительно увеличивалась при воздействии УЗ с параметрами 0.4 Вт/см2, 800–900 Гц; незначительно — при воздействии с параметрами 0.4 Вт/см2, 40 Гц; 0.05 Вт/см2, 90–100 Гц.
У лошадей отмечали как сохранение активности на уровне, близком к контролю, таки понижение и повышение в части опытов (наиболее значимое — при воздействии в режиме0.2 Вт/см2, 200 Гц).Активность КК у кошек была значительно выше контроля при воздействии 0.7 Вт/см2, 10–20 Гц и выше контрольной при 0.05 Вт/см2, 70–80 Гц, понижаясь либо соответствуя контролюв остальных случаях. У собак, как правило, уровень активности КК тоже был близокк контрольному (121 мкмоль/л) или несколько ниже, значительно повышаясь при интенсивности0.4 Вт/см2 в области низких частот модуляции, а также на интенсивностях 0.05 Вт/см2 (90–100 Гц) и 1.0 Вт/см2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
