Диссертация (1151313), страница 29
Текст из файла (страница 29)
При изменении положения стеклас мазком в квадрат подсчёта попадают разные клетки, в связи с чем погрешность подсчёта можетсоставить в зависимости от вида клеток до 2%, а в случае агрегации клеток — и значительновыше, так как в какой-либо части мазка может наблюдаться скопление клеток; особенно последействия УЗ. Поэтому количество форменных элементов в этом месте резко меняется. Иногданастолько, что подсчёт сильно затруднён или не возможен. Если же оценивать степеньвоздействия факторов по изменению фрактальной размерности в пакете HarFA, то поворотфотографии (а значит, и мазка) влияет на вид гистограммы, а на величину коэффициентафрактальной размерности в комбинациях BW и W+BW, а также на относительное значение+— нет.Отсюда следует, что возможно объективное определение наличия воздействия, как бы нибыла расположена фотография клеток крови.
В том случае, когда лейкограмма в норме, то естьметодом клинического анализа мазка крови воздействие ещё не определено, изменениефрактальной размерности изображения того же самого мазка даёт объективную картинуналичия/отсутствия влияния на целый организм внешних факторов. Лизированные и сильноизменённые клетки мы видим сами при микроскопии и можем оценить влияние на них любогофактора визуально. А целые и на наш взгляд не затронутые воздействием клетки «видит» HarFA.§ 10.2. Определение с помощью пакета HarFA сочетанного действиянескольких физических факторов на кровь животныхОбразцы крови МДЖ помещали в СЭП сразу после УЗ воздействия или без него.
Затем поприведённой методике результаты анализировали программным пакетом HarFA (рисунки 36–38,таблица 30).Slope Analysis of "Black&White Series"45Fractal Dimension Count40353025201510501Fractal Dimension2Рисунок 36. Фотография мазка крови собаки после воздействия СЭП напряжённостью 0.67 кВ/м в течение 50 мин.Уравнения фрактальной регрессии (фрактальный анализ), гистограмма.136Slope Analysis of "Black&White Series"55Fractal Dimension Count50454035302520151050-101Fractal Dimension2Рисунок 37. Фотография и фрактальный анализ мазка крови собаки после воздействия СЭП напряжённостью3.03 кВ/м в течение 35 мин. Уравнения фрактальной регрессии, гистограмма.Slope Analysis of "Black&White Series"90Fractal Dimension Count807060504030201001Fractal Dimension2Рисунок 38.
Фотография мазка крови кошки после сочетанного воздействия УЗ (0.7 Вт/см2, частота модуляции10 Гц, 60 с) и СЭП (напряжённость 3.03 кВ/м в течение 25 мин) и фрактальный анализ. Уравнения регрессии,гистограмма.Таблица 30. Изменение значений фрактальной размерности после сочетанного и раздельного действия физическихфакторов на кровь МДЖ.Объект, см.Рисунок 36Рисунок 37Рисунок 38DBW0.89751.57841.1632DB+BW1.01421.66731.1856DB+BW / DBW1.13001.05631.0193100 мл крови лошади с введённым антикоагулянтом оставляли на 5 мин при низкойтемпературе минус 15○С. Визуально никаких изменений не регистрировали.
Образцы крови,находящиеся при комнатной температуре t = 20○С (контроль), выглядели так же, как и опытные.Затем сразу же делали мазки, окрашивали и фотографировали. Фотографии мазков кровипредставлены на рисунке 39.137а)б)в)г)д)Рисунок 39. Форменные элементы крови лошади: а) контроль. После воздействия температуры нейтрофилыв группах (г, д); после совместного действия температуры и УЗ: тромбоциты (б) и группа лейкоцитов (в)с дегенеративными изменениями.Для объективной оценки наличия (или отсутствия) изменений в клетках крови былиспользован пакет HarFA. Результат обработки данных фотографий при непрерывном вариантеотображения информации представлен на рисунке 40.
Отчётливо видно, что фрактальный спектрграфиков после комбинированного воздействия УЗ и температуры на образцы крови(рисунки 40б и в) существенно отличается как от контрольного препарата (рисунок 40а), так и отмазков крови, обработанных каким-либо одним фактором (рисунки 40г и д). Фрактальный спектрбиологических объектов на изучаемое воздействие выбранных физических факторовпредставляет собой спектр коэффициентов корреляции от логарифма расстояния между точкамифазового пространства. При помощи пакета HarFA по изменению фрактальной размерностибыло установлено, что микроструктура форменных элементов крови лошади, находившихся принизкой температуре фиксировано короткий промежуток времени, значительно отличается отконтрольных образцов, находившихся при 20○С. По степени и характеру изменения амплитудыможно делать выводы о том, какие клетки наиболее сильно реагируют на данный типвоздействия.а)б)г)д)в)Рисунок 40.
Фрактальный анализ мазков крови лошади. Оси OY — фрактальная размерность, OX — ln(r) —логарифм расстояния между точками фазового пространства.138По результатам фрактального анализа было зафиксировано изменение фрактальнойразмерности в цветовых комбинациях BW, B+BW при анализе мазков крови до физическоговоздействия и после него, а также у больных и здоровых животных. Некоторые результатыприведены в таблице 31.Таблица 31.
Результаты фрактального анализа мазков крови до и после УЗ воздействияЖивотноеКошка, больнаяКошка, 7 лет,здороваЛошадь, 7 лет,здороваПараметры УЗ:интенсивность, частота модуляции, времяКонтрольКонтроль0.05 Вт/см2, 30 с, импульсный режимнепрерывный режим, 0.4 Вт/см2, 60 сКошка, 7 лет,здорова0.2 Вт/см2, 10 Гц, 30 с0.4 Вт/см2, 800 Гц, 45 сСобака, 7 лет,здорова0.4 Вт/см2, 30 Гц, 45 с0.7 Вт/см2, 800 Гц, 45 с0.7 Вт/см2, 30 Гц, 45 сDB+BWDBWСВФ1.23041.68541.35220.98430.86811.91911.67411.66431.64261.97031.97241.79751.83161.7761.69491.21011.20851.05510.8990.86651.63391.61771.62861.60821.71221.68551.79241.82031.71941.6461.01681.39461.28161.09491.00181.17461.03491.02191.02141.15071.17021.00281.00621.03291.0297После анализа всех данных, полученных в экспериментах, обратила на себя вниманиевозможность присутствия закономерности в изменении фрактальной размерности до и послевоздействия физического фактора.
Более того, решено было провести анализ изменениясоотношения фрактальной размерности в цветовой комбинации BW и в комбинации B+BW, таккак линия регрессии этих графиков существенно изменяется после воздействия физическогофактора.Отношение фрактальной размерности DB+BW к DBW решено было назвать степеньювлияния физического фактора:СВФ =где+СВФ —,интегральныйдиагностическийиндексстепенивлияния факторав относительных единицах; D — угловой коэффициент в уравнениях регрессии графикови диаграмм при максимальном значении дисперсии R, или фрактальная размерность; DBWи DB+BW — фрактальная размерность в цветовой комбинации BW и B+BW, соответственно.Интегральный диагностический индекс степени влияния фактора у больных и здоровыхживотных менялся по-разному. Иногда — разнонаправленно.139§ 10.3.
Самостоятельное действие температуры на клетки крови животныхМикроскопия мазков крови всех животных показала морфологические измененияэритроцитов под влиянием как непрерывного, так и модулированного УЗ (§ 7.1. Особенностивоздействия ультразвука на тромбоциты на страницы 74).В литературных источниках есть данные о том, что до 10 мин обработки клеток тканей УЗ1 МГц терапевтических интенсивностей 0.05–0.7 Вт/см2 может не оказывать термальноговоздействия, которое регистрировали в мышечной ткани лишь после облучения 1.0 Вт/см2 [301,403]. Анализируя образцы мазков крови разных видов животных, нами была обнаруженавозможность появления «гантелей» в мазках крови животных в острой стадии заболевания,сопровождающейся значительным повышением температуры.
Нормальная температура кровиу МДЖ — 37.5–39°C [104]. Из всех проб (45 собачьих, 29 лошадей, 46 кошачьих, а такжелабораторных животных — кроликов, крыс) только в одном мазке были выявлены «гантели»в количестве 4 образований.Были поставлены опыты с кровью от того же животного в стадии ремиссии и со всемидругими образцами.Нагревая образцы на водяной бане до температуры от 30 до 85°C в течение 5 мин,последовательно отбирая пробы на мазок через каждые 30 с, было обнаружено, что эритроцитыначинают видоизменяться, как в УЗ поле, а затем образуются «гантели» (3–5 на мазок), и всё этопри температуре, соответствующей повышенной температуре тела больного животного.
Попреодоленииопределённоготемпературногопорога41.5–42.5°C,формаэритроцитовпродолжала вытягиваться до веретенообразной (рисунок 41), затем наступал гемолиз и лизис.Вся кровь меняла цвет и консистенцию («лаковая кровь», рисунок 6 на странице 54). Такимобразом, нельзя уверенно утверждать, что УЗ низких интенсивностей, действуя на клетки кровиin vitro, не несёт термального воздействия.140Рисунок 41. Фотография мазка крови кошки. Слева: Температура образца 41°C. Несколько булавовидныхутолщений эритроцитов и эритроциты бобовидной формы. Справа: 44°C. Каплевидная и бобовидная формаэритроцитов.
Анизоцитоз.§ 10.4. Статическое электрическое полеОбразцы крови после воздействия УЗ помещали в СЭП, с целью определить ведущиемеханизмы клеточной агрегации: будет ли изменяться конфигурация клеточных комплексоввследствие восстановления (либо дальнейшего изменения) поверхностного заряда ЦПМ клетоккрови. Распад клеточных комплексов или повышение агрегации свидетельствовали бы обизменении клеточного заряда в ходе УЗ инсонации как об основном ведущем механизмеагрегации.Опыты проводили на образцах крови кошек, собак и лошадей, действуя экспериментальноустановленными диапазонами УЗ интенсивностей и частот модуляции. Каждый опыт былвыполнен в трёх повторностях. Опыт прекращали после 60 мин нахождения в СЭП каждогообразца крови.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
