Главная » Просмотр файлов » Диссертация

Диссертация (1151292), страница 35

Файл №1151292 Диссертация (Комплексная оценка морфофункциональных и микробиологических показателей половых клеток быков - производителей) 35 страницаДиссертация (1151292) страница 352019-07-02СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 35)

Ген SUOX кодирует молибдогемопротеинсульфит-оксидазу- конечный фермент при окислении серосодержащих аминокислот, которыйиграет важную роль в остеогенезе.Больныетелята(гомозиготыпомутантномуаллелю)обычномертворожденные или погибают в первые часы после рождения. У животныхрегистрируют изменения в костной системе (череп, позвоночник, конечности),возможны мышечная атрофия и пороки сердца. Поражения конечностейхарактеризуются: удлинением и истончением костей (долихостеномелия, «ногипаука»), их переломами во время отела, что может повредить матку и родовыепути, деформацией суставов, позвонков, что приводит к кифозу и сколиозу.Деформации лицевого отдела черепа включают брахигнатию (недоразвитиенижней челюсти), короткий череп с вмятиной на верхней челюсти («указательголова»).

По данным литературы, частота носителей составляет 3,3%.Проведен анализ нуклеотидной последовательности гена-мишени SOUX попубличнымбазамассоциированныйсданных(GenBank).даннымгенетическимВыявленучастокзаболеванием.генома,Выбраныисинтезированы олигонуклеотидные праймеры, позволяющие амплифицироватьфрагмент (размер 503 п.н.) гена SOUX Bos taurus в области мутации.AS.F5’ – GGTCAGAGTGAGGTAGAGTGAT - 3’AS.R5’ – CCACGTTAGGTACAGGCAAATGA - 3’Проведена оптимизация условий ПЦР. Были выбраны следующие условиятермоциклирования «SАA 60оС»:предварительная денатурация 95оС – 5 мин (1 цикл);95оС – 10 сек60оС – 10 сек35 циклов72оС – 15 секзаключительная элонгация 72оС – 5 мин (1 цикл).225МК-1234567891011 12 13 14•Рис. 61.

Оценка аналитической чувствительности праймеров,используемых для амплификации фрагментов гена SOUXДля определения аналитической чувствительности праймеров использовалираствор плазмидной ДНК c известной концентрацией (2,33x1013 копий/мл),содержащий клонированный фрагмент гена SOUX Bos taurus размером 503 п.н, атакже серию десятикратных разведений растворов плазмидной ДНК в ТЕбуфере, с концентрациями от 2,33х107 до 2,33х10 копий/мл. Результатыпредставлены на рисунке 61 и обобщены в таблице 28.Таблица 28 – Результаты оценки аналитической чувствительностипраймеров, используемых для амплификации фрагментов гена SOUX№образца1234567891011121314Наличие фрагмента генаSOUX, размер 503 п.н.+++++++++++-Наименование образцаДНК гена SOUX, концентрация2,33х107 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х106 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х105 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х104 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х103 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х102 копий/млДНК гена SOUX, концентрация2,33х10 копий/мл226Аналитическая чувствительность праймеров, используемых в методике дляамплификации фрагментов гена SOUX, составила 2,33х103 копий/мл.

В качествеположительного контроля ПЦР (К+) для идентификации мутации «AS» вдальнейшем использовали разведение 2,33х104 копий/мл.Для проверки накопления ПЦР-продукта и оценки его концентрациипроводили электрофорез в агарозном геле (рисунок 62).МК+К-Кв5/11 6/11 7/118/11 9/11Рис. 62. Результаты электрофоретического анализа ПЦР продуктовгена TUBD1 Bos taurus в области мутации «SАA».Образцы № 5/11 - № 9/11 - ДНК, выделенная из спермы животныхПри идентификации мутации SAA результат интерпретировали наосновании вставки одного нуклеотида G (гуанин) в определенном положениигена SOUX: c.

363–364 insG p.Ala124Gly.Для идентификации мутации «SАA» было проанализировано 19 образцовспермы и крови от разных животных. Животных – носителей данной мутациивыявлено не было.Генетические аномалии, обнаруженные у бурой швицкой породы, отраженыв таблице 29.227Таблица 29 - Генетические аномалии, обнаруженныеу бурой швицкой породы крупного рогатого скотаSDMСпинальнаяДемиелинизациявсего носитель1503SMAСпинальнаямышечнаяатрофиявсего носитель1507WBH2SAAДегенеративная Гаплотип 2Синдроммиелоэнцефалобуройарахномиелиипатияшвицкойвсегоноси- всего носит всего носительельтель150215021500Установлено, что у бурой швицкой породы наиболее часто встречаетсятакая генетическая аномалия, как SMA (спинальная мышечная атрофия),встречаемость которой у зарубежных племенных быков составляет 4,7%,спинальная демиелинизация выявлена у 2% быков.С использованием данной методики в 2017 г в рамках оценкираспространениягенетическиханомалийукрупногорогатогоскотаголштинской породы были получены данные, представленные в табл.

30.Таблица 30 - Генетические аномалии, обнаруженныеу голштинской породы крупного рогатого скотаBYБрахиспинальныйсинлромCVMBLADDUMPSCITFXIDКомНедостат Недостат ЦитрулДефицитплексококлинемиифактораныйсвертыадгезииУридинпороклейкацитмонования XIпозвоночовфосфатникасинтетазывсе но все но все но все но все но все но болгосит госит госит госит госит госи еетельельельельельтель151 2 191 4 213 1 203 0 218 0 231 11CDHДефицитхолестеринавсего238носитель10Как следует из данных таблиц 29 и 30, генетические аномалии у буройшвицкой и голштинской пород различаются по своей природе.У голштинов наиболее часто обнаруживаются такие генетические228аномалии, как дефицит холестерина (4,2%) и комплексный порок позвоночника(2,1%).Разработанные молекулярно-генетические методы идентификации мутаций,ассоциированных с наиболее распространенными наследственными патологиями у крупного рогатого скота, позволили выявить в сперме быковпроизводителей, поступающей в РФ из-за рубежа, такие генетические аномалии,как брахиспинальный синдром, комплексный порок позвоночника, недостатокадгезии лейкоцитов, недостаток уридинмонофосфатсинтетазы, цитруллинемию,дефицит фактора свертывания крови XI, дефицит холестерина.На основании проведенных исследований разработаны и утверждены вустановленном порядке методические рекомендации «Идентификация мутаций,ассоциированныхснаиболеераспространенныминаследственнымипатологиями крупного рогатого скота голштинской породы, молекулярногенетическими методами» (№ МЭ 1/0029 от 3 февраля 2017 года).4.2.

Оценка качества спермы Бельгийской бело-голубой породы крупногорогатого скотаБельгийская бело-голубая порода крупного рогатого скота (ВВВ) – это мясная порода, выведенная животноводами Бельгии.Разведение чистопородной Бельгийской бело-голубой породы в Россиивозможно, но в ближайшем будущем, так как этот проект требует высоко технологичного ветеринарно-зоотехнического сопровождения (Рис. 63).Рис. 63. Племенные быки Бельгийской бело-голубой породы229Оптимально реализуемым проектом в РФ является технология кроссбридинга, основанная на искусственном осеменении спермой ВВВ местных молочных и мясных пород скота и ветеринарно-санитарный контроль при искусственном осеменении этих животных.

Контроль будет включать в себя изучение биологического, эпизоотического и генетического профиля.Сперму ВВВ начала завозят в Российскую Федерацию из Бельгии в 2017 ги, как новый для нашей страны генетический материал, подвергают всестороннему исследованию.От ООО «Мировет», имеющей лицензию на ввоз спермы ВВВ в Россиюю,было получено по 5 спермодоз от 5 быков-производителей по кличкам LONI-M,SACHARA JACOB, SОTTI-M, PERSAN DE PETIT ROSIERE И FELS-M.Мониторинг качества спермы Бельгийкой бело-голубой породы был изученнами и представлен в виде протоколов чек-листов.Экспертизу генетического материала этой породы проводили стандартизированными современными методиками, согласно требованиям ГОСТ 260302015.Изучены морфологические свойства сперматозоидов этой породы с цельюопределения размеров, наличия мертвых форм спермиев, определения количества с анормальной структурой, изучена подвижность спермиев, исследованацелостность их акросомы, определен индекс фрагментации ДНК спермиев вспермопробе после ее размораживания, а также микробная загрязненность наразные виды бактерий и грибов.В работе использовали разработанные и усовершенствованные нами методы.Для определения содержания спермиев изменённой формой и наличием посторонних включений применяли методику подготовки и окрашивания согласнометодическим рекомендациям «Биологическое качество криоконсервированнойспермы КРС», а также систему прибора AndroVision®: CASA программноеобеспечение с ПК (рис.

64).230Рис. 64. Система AndroVision®На рис. 65-71 представлены чек-листы с результатами исследований спермыВВВ.Рис. 65. Результаты определения подвижности сперматозоидов быка FELSM231Рис. 66. Морфология сперматозоидов быка FELS-MРис. 67. Результаты определения подвижности сперматозоидов быка LONIM232Рис.

68. Морфология сперматозоидов быка LONI-MРис. 69. Результаты определения подвижности сперматозоидов быкаPERSAN DE PETIT ROSIERE233Рис. 70. Результаты определения подвижности сперматозоидов быка SОTTIMНаоснованииполученныхчек-листковипротоколовприбораAndroVision®: CASA был проведен анализ образцов спермопроб ВВВ по показателям подвижности и концентрации, который показал, что все подвергнутыеэкспертизе спермопробы породы Бельгийской бело-голубой соответствовалинормам ГОСТ.Концентрация сперматозоидов после размораживания была выше по сравнению с показателями этого параметра других пород крупного рогатого скота исоставила от 85 до 103 миллионов спермиев в миллитре спермодозы.Диаграмма скорости сперматозоидов после размораживания, которая увеличивалась в геометрической прогрессии, является одним из факторов, подтверждающих высокую биологическую активность, оплодотворяющую эффективность и жизнеспособность спермы породы Бельгийской бело-голубой (рис.

70).234Согласно полученным протоколам морфофункционального профиля, количество неповрежденных сперматозоидов составило 50-60%, что выше среднихзначений по сравнению с аналогичными данными этого параметра у других пород (рис. 71).Рис. 71. Морфологические осоенности сперматозоидов быка SACHARA JACOBКоличество спермиев с отделившимися головками составило у всех изучаемых образцов спермопроб ВВВ - 3%, столько же сперматозоидов с закрученными хвостами, количество спермией с согнутыми хвостами - 8,3 %, анормальныехвосты выявлены у 28%, что соответствует параметрам ГОСТ для спермы высокого качества.При изучении акросомальной реакции у спермиев ВВВ было установлено,что акросома сперматозоидов расположена в виде шапочки на переднем полюсеполовой клетки. Разработанный метод окрашивания акросомы позволил выявитьцелостность акросомы у сперматозоидов животных породы ВВВ.235Данные электронно-микроскопического исследования акросомы сперматозоидов быков Бельгийской бело-голубой в мазке из изучаемых спермодоз свидетельствут о высоком качестве ферментного аппарата и постакросомного сегмента, участвующего в прикреплении сперматозоида к яйцеклетке.Следовательно, все показатели соответствуют нормам регламента ГОСТ26030-2015.В результате изучения фрагментации ДНК сперматозоидов, генетическиханомалий не выявлено.При микробиологическом исследовании спермопроб от Бельгийской белоголубой породы, бактерии, вирусы и грибы не были обнаружены ни в одной изпроб.4.3.

Характеристики

Список файлов диссертации

Комплексная оценка морфофункциональных и микробиологических показателей половых клеток быков - производителей
Свежие статьи
Популярно сейчас
Как Вы думаете, сколько людей до Вас делали точно такое же задание? 99% студентов выполняют точно такие же задания, как и их предшественники год назад. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6418
Авторов
на СтудИзбе
307
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее