Диссертация (1151292), страница 39
Текст из файла (страница 39)
Чомаева и соавт. (2012), сексированное семя по оплодотворяемости (58%) незначительно уступает обычному семени. Соответственно,показатель оплодотворяющей способности разделенного семени значительноварьирует по отдельным хозяйствам. Некоторые авторы в своих работах низкуюоплодотворяющую способность связывают с повреждением структуры половыхклеток во время сортировки (J.O. Carvalho et.al., 2010).По данным многих авторов, было доказано, что микрофлора своими токсинами в процессе активного метаболизма вызывает гибель или снижение выживаемости сперматозоидов, что приводит к низким коэффициентам оплодотворяемости и рождению нежизнеспособного молодняка.
Активные процессы размножения микрофлоры и накопление токсических продуктов обмена в спермопродукции, приводит к тому, что условно патогенная микрофлора «конкурирует» сосперматозоидами за «питание», вызывает изменение pH среды, снижает активность половой клетки, запуская процесс прилипания (адгезии) микробов к сперматозоидам, что мешает нормальному движению последних. По данным Бору-255новой С.М. (2006), Althouse G.C. et al. (2008) и Bussalleu E.
et al. (2011) присутствие микроорганизмов в сперме связано со снижением подвижности и жизнеспособности гамет. Кроме того, высокая микробная контаминация спермы может вызывать преждевременную акросомную реакцию, нарушая целостность акросомы или агглютинацию сперматозоидов (Monga, M., 1994) Также микроорганизмы могут вызывать выработку антител, направленных против комплексагликокаликса сперматозоидов (Auroux, M.R., 1991; Kurpisz, M., 1995). Было также установленно, что в эякулятах микроорганизмы образуют большие скоплениявокруг сперматозоидов и в зависимости от электростатического напряженияраспределяются на составных частях половой клетки самца в целом.
В местахсоприкосновения микробной клетки с перфораторием происходит его распад,оболочка сперматозоида в местах внедрения микробов прогибается, а затемнабухает и распадается. Таким образом, микроорганизмы оказывают как механическое влияние (нарушение активности сперматозоидов вследствие оседанияна них микробов), так и химическое, ферментативное разрушение спермиев и ихгибель под воздействием продуктов обмена микроорганизмов. В то же время,сперматозоиды сами становятся переносчиками микробов. Из спермы производителей выделяют не только отдельные микроорганизмы, но и микробные ассоциации (Филатов, А.В., 1990), которые оказывают более негативное влияние насперматозоиды.
С этими выводами хорошо ассоцируются и результаты другихисследователей (Haines, M.D., 2013; Malmgren, L., 1998; Sepúlveda, L., 2014),изучающих проблему бактериальной контаминации спермы. Снижение общейрезистентности организма под влиянием внешних или внутренних факторовпредрасполагает к развитию воспалительных процессов.
Неполноценное кормление, нарушения в технологии содержания, несоблюдение санитарногигиенических мероприятий при проведении случной кампании, всё это создаётблагоприятные условия для развития воспалительных процессов в организме.(Сагалов, А.В., 2001). Одним из источников попадания в сперму микроорганизмов и «резервуаром» микрофлоры является препуциальная полость производителей.
В ней полости создаются благоприятные условия для скопления химиче-256ски раздражающих кожу веществ и развития микроорганизмов (Сагалов, А.В.,2001). Все перечисленные факты коррелируют с данными, полученными привыполнении нашего диссертационного исследования.
Полученные результатысвидетельствуют о целесообразности подвергать исследованию спермопродукцию, поступающую от зарубежных предприятий-поставщиков генетическогоматериала, на Pseudomonas aeruginosa, E.coli, Mycoplasma bovigenitalium,Ureaplasma diversum, Streptococcus spp.,Staphylococcus spp.,Campilobacter spp.,.применяя при этом методы «золотого стандарта».Вопрос о роли микоплазм в возникновении акушерско-гинекологическихпатологий, абортов и снижении фертильности производителей продуктивныхживотных, приводящих к экономическим потерям в хозяйствах, в настоящеевремя является краеугольным камнем отечественной зооветеринарной практикив области воспроизводства. Однако, до настоящего времени отсутствуют достоверные научные подтверждения того, что сперма является фактором передачиданного патогена.Особенностью микоплазм является отсутствие клеточной стенки и по клинико-морфологическим признакам микоплазменные патологии сходны с заболеваниями, вызываемыми другими условно-патогенными микроорганизмами, поэтому для их обнаружения и идентификации необходимо применять специальные методы лабораторной диагностики.Идентификация микоплазменных инфекций в генетическом материале проводится с помощью широко распространенного современного метода лабораторной диагностики - полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Появившаяся в последнее время технология ПЦР с детекцией продуктов амплификации в режимереального времени или с использованием флуоресцентно-меченых зондов даетвозможность проводить качественное и количественное определение ДНК возбудителей в клиническом материале (Приложение 11).Но диагностика половых инфекций, в данном случае, определение диагностической чувствительности и диагностической специфичности, с последующейтипизацией микроорганизма, вызывающего патологический процесс, не может257существовать без традиционного подхода, так называемого «золотого стандарта» (Приложение 12, 13). Метод «золотого стандарта», а именно бактериологические посевы на специальные дифференциальные среды по идентификации микоплазм у животных в сперме крупного рогатого скота, влагалищных экссудатах, в молоке и т.д., позволяет доказать активность и жизнедеятельность микроорганизма, что не может выявить метод ПЦР, который, зачастую, проводят в неаккредитованных лабораториях по ИСО 17025 нашей страны (соответствие лаборатории требованиям ИСО/МЭК 17025:2005 означает, что лаборатория соответствует и требованиям к технической компетентности, и требованиям к системе менеджмента.Нами разработана схема по идентификации данного микроорганизма всперме животных-производителей, которая включает использование классической ПЦР, а также «золотой стандарт» - бактериальный посев.
Для получениямаксимально достоверных результатов подтверждения роста микоплазм проводят электронную микроскопию, позволяющую кроме того установить естественную архитектонику исследуемой колонии и морфометрические особенностиданной популяции.В данном случае для установления причинно-следственной связи в вопросепрямого действия микоплазмы, какфактора, вызывающего акушерско-гинекологические патологии (вульвовагинит, эндометриты, сальпингиты, овариты и т.д.), необходимы лабораторные исследования по выявлению возбудителяне только в спермопродукции, но и в пробах патологического материала, полученного от больных животных (смывы с наружных половых органов, влагалищные экссудаты, абортированные плоды, кровь и т.д.) на предмет исключениядругих возбудителей заболеваний из общего числа микроорганизмов, способныхвызывать патологические процессы в репродуктивных органах животных (бруцеллез, хламидиоз, кампилобактериоз, псевдомоноз, эшерихиоз и т.д.) на всехэтапах воспроизводства.Представленный алгоритм идентификации микоплазм в спермопробах быков-доноров в настоящее время является единственным инновационным мето-258дом, применяемым в разрешении спорных вопросов между поставщиками спермопродукции и закупщиками специалистов хозяйств, связанных с выявлениемэтих микроорганизмов в спермопродукции импортного и отечественного производства.
Данная проблема чаще в поле зрения зарубежных коллег (Нum Reprod2000-2007 г.; М.Д. Иглсом, М. М. Гарсия, Р.Б. Стюарт, 1992, JR.Visser, HB Jansen2005г, Бейтс и др., 2015, Х. Хичуги, К. Кавай, 2011; Л.К. Фокс, 2016 г. С. Вагнер2015 г.). Этот процесс объясним тем, что биотехнологическая промышленностьнашей страны в настоящее время не имеет возможности выпускать и производить культуральные микробиологические среды, предназначенные для идентификации микоплазм животного происхождения.Аналогичная работа была проведена по формированию алгоритма идентификации кампилобактерий в спермопродукции крупного рогатого скота, с использованием современных инновационных подходов в данном направлении.Многие зарубежные авторы, такие как Д.
Питер, 1997; RH BonDurant, 2005; P.J.Dekeyser, 1986, C.Morsella ,2003 и отечественные (Савин И.С., 2007, НовиковаО.Б. и соавт., 2008, Госманов Р.Г., Галиулин А.К., 2011, Давыдов А.Г., ИсаевР.Р., 2008) отмечали в своих работах проблему заболевания кампилобактериозомкак одну из актуальных в современном отечественном скотоводстве. Это заболевание приводит к снижению репродуктивного потенциала животных и к серьёзным экономическим потерям.При исследовании образцов спермы бактериологическим методом «Золотойстандарт» с использованием галереи стрипов API и сличительными даннымибиблиотеки микроорганизмов масс-спектрометра MALDI BRUCER, в 6 образцахиз 103 проб семени отечественного происхождения была обнаружена C.
Jejuni,что составило 5,8% от общего количества проб, из 119 проб зарубежной спермыC. Jejuni была обнаружена в 11 образцах (27,0%). Научно-экспериментальнымпутем было доказано, что зарубежная сперма обсеменена патогенными кампилобактерами на 21,2% больше, чем отечественная.Микозы в области репродукции - одна из приоритетных вопросов отечественной ветеринарной микологии. Неуклонно растет их распространенность259среди племенных животных, выявляются новые этиологические агенты. Однаковопросы диагностики, терапии и профилактики грибных инфекций у репродуктивных животных недостаточно изучены. В наших исследованиях представленаметодологическая методика экспертизы половых клеток, которая позволяет объективно идентифицировать в нем грибы, которые выдерживают условия криоконсервации, то есть способность сохранять жизнеспособных при низких температурах. Для проведения микологической экспертизы нами предложено использовать специальные среды для идентификации различных представителей грибов.
Е.П.Кремнев (1974) в 518 пробах спермы быков (81,4%) обнаружил 24 видабактерий и 18 видов грибов, среди которых были и патогенные штаммы:Bact.puogenes, corynebacter puogenes, Staph.puogenes aurus et albus, Diplococcussepticus и грибы рода Candida, Aspergillus и др. Приблизительно такие же данныеприводят А.М.Гаврилов и соавт.(1971), Н.Я. Алиев и А.И. Тараненко (1976) имногие другие авторы. Вся эта микрофлора, как в отдельности, так и в ассоциации может быть причиной абортов и других акушерско-гинекологических заболеваний (П.А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
