Диссертация (1151292), страница 40
Текст из файла (страница 40)
Волосков, 1965, Н.Г. Балошов,1980), грибы рода Candida, Aspergillus, что тождественно результатам, полученным нами при экспертизе, исследуемой спермопродукции.Микологическая экспертиза спермы как отечественного, так и зарубежногопроизводства содержит в основе методологический процесс микробиологического анализа на наличие грибов.Существующий микробиологический анализ на наличие/отсутствие грибов, проводимый высевом на МПА, не предназначен для выявления грибов, приспособленных к развитию в условиях низких температур и дифференциации выявляемых грибов.
В настоящее время в ходе выполнения работы было предложено для применения ветеринарно-санитарной экспертизы современные питательные среды, позволяющие проводить более полное выявление и дифференциацию патогенных и условно-патогенных грибов.Метод основан на способности микромицетов, которые потенциально могутконтаминировать сперму, расти на специальных наборах питательных сред: (Са-260буро с глюкозой, Картофельно-глюкозный агар, среда с дихлораном и бенгальским розовым (DRBC), хромогенная среда для дифференциации грибов родаCandida) с дальнейшим культивированием микроскопических грибов и их идентификацией.В работе были даны ответы еще на одну из актуальных проблем в ветеринарной медицине в целом и биотехнике репродукции животных, в частности, касающейся сложности преодоления существующей антибиотикорезистентностибольшинства возбудителей инфекционных заболеваний, обсеменяющих спермуживотных.
ВОЗ открыто заявляет о необходимости дополнительных инвестицийв разработку новых противомикробных препаратов, но настоятельно подчеркивает, что только эффективных новых средств лечения инфекций уже недостаточно и призывает страны улучшить профилактические меры в секторе ветеринарного здравоохранения, а главное - работать над информативностью населения по вопросам рационального использования антибиотиков. Данные исследованной нами спермопродукции показали, что произошел серьезный дрейфштаммов микроорганизмов в сторону развития у них множественной резистентности к антибиотикам, применяемых при разбавлении эякулятов для длительного хранения при криоконсервации. Лечение инфекций в связи с этим можетстать проблемой развития резистентности к антибиотикам что приводит к формированию мутаций в популяции бактерий и появлению устойчивости у отдельных их представителей. На первый план должно выходить исследование антибиотикорезистентности биопленок, которые образуют бактерии (бактерии образуют на любой поверхности сложные сообщества, отличающиеся устойчивостьюодновременно к нескольким антибиотикам).Полученные данные по изучению динамики уровня антибиотикочувствительности P.aeruginosa, выделенной из спермопроб к препарату гентамицин,свидетельствуют о том, что разбавители, содержащие гентамицин можно будетприменять для санации спермы животных, обсемененной синегнойной палочкой.Нерациональное использование нового антибиотика энрофлона в составе разбавителей спермы животных явилось следствием приобретения P.aeruginosa мно-261жественной лекарственной устойчивости (Войтов Б.В., 1980; Железнев, A.B.1966, Палий Г.К., Непорада В.П., Волянский Ю.А., Корпан А.И.
,1975; С.В. Советкин, В.Н. Родина, В.Т. Смирнов, М.Е. Евсюков, 1998; Рыбалтовский В.О., Седов Н.К., 1981; Савицкая К.И., Левина Е.Н., Акатова Н.С. ,1981; СтрагунскийJI.,1998).Анализ уровня выделения P.aeruginosa, устойчивых к препарату энроген,при исследовани в 2006 г спермы быков-производителей выявил 39% антибиотикоустойчивых культур псевдомонад, к 2007 г уровень снизился на 1% . Однако в 2008 и 2009 г выделение антибиотикоустойчивых штаммов возросло до42%. К 2010 уровень устойчивости псевдомонад к энрогену вновь снизился на3%, а к 2011 году вырос на 1%.На современном этапе важную роль играет использование методов генодиагностики, включенной в перечень критических технологий Российской Федерации и отраженных в задачах Государственной Программы от 28 ноября 2018 г.№ 680 «О развитии генетических технологий в Российской Федерации», нацеленных на высокотехнологичное развитие сельского хозяйства.Назрела острая необходимость пересмотра действующих в РФ требований ккачеству генетического материала.
Генетические технологии в основе, которыхлежит генодиагностика – ДНК-диагностика, позволяют исследовать нуклеотидную последовательность гена, проводить идентификацию отдельных генов и выявлять механизмы их действия на проявление признаков. Идентификация генетических маркеров локусов количественных признаков сельскохозяйственныхживотных делает не только возможным достоверную экспертизу потенциальныхвозможностей генетического материала животных, но и выявление приоритетных с точки зрения селекции вариантов генов. (A.Barbat с соавт., 2010, Ю.А.Столповский, 2010; Н.С.
Марзанов с соавт, 2012)Активное использование в искусственном осеменении ограниченного контингента выдающихся быков-производителей на протяжении от 40 лет и выше, атакже строгие рамки селекционных нужд по одному желаемому признаку, привело к возрастанию негативного влияния вышеуказанного локуса-мутаций на262фертильность животных.
В последние пять лет гаплотипы фертильности былиидентифицированы практически во всех основных породах крупного рогатогоскота: голштинской (P.M. VanRaden, 2011; S. Fritz, 2013; T.A. Cooper, 2013),джерсейской (T.S. Sonstegard с соавт., 2013), бурой швицкой (P.M. VanRaden,2011, T.A. Cooper, 2013, M. McClure с соавт., 2013), айширской (T.A. Cooper,2013) симментальской (H.Pausch с соавт., 2015). Повышение использования ресурсов на одном участке (высокая молочная продуктивность) неизбежно приводит к их недостатку на других (иммунная защита, фертильность, способностьпротивостоять стрессу и т.д.) (Beilharz R.G., Luxford B.G.
and Wilkinson J.L,1993;. Rauw W.M., Kanis E., Noordhuizen-Stassen E.N. and Grommers F.J, 1998;White J.K., Gerdin A.K., Karp N.A., Ryder E., Buljan M., 2013). Накопление и передача генетических мутаций в последующих поколениях может привести к значительным экономическим потерям в агропромышленном комплексе. В результате проведения работы разработаны методики для своевременного выявления ивыбраковывания спермопродукции со скрытыми дефектами от воспроизводства,которые позволили выявить в спермопробах у быков разных пород различныенаследственные заболевания: дефицит уридинмонофосфатсинтеазы (deficiencyof uridine monophosphate syntyhase, DUMS) при этом из 203 исследуемых двабыка-донора носители данной аномалии (Shanks R.D.,1984), дефецит лейкацитарной адгезии (BLAD) из 231 один бык являлся носителем данной аномалии(Shuster D.E., 1992), выявлено четыре быка с аномалией - комплексный порокпозвоночника (CVM) (Agerholm J.S., 2001), брахиспинальный синдром (BY)был выявлен у 4 носителей (Agerholm J.S., 2006), десять быков из 238 исследуемых с пароком –дифицит холестерина CDH, 1 бык-донор был выявлен с дефицитом фактора свертывания крови 11 (FXID), в бурой швицкой породе проявление LoF – мутаций мы связываем с синдромом Вивера (Georges M., Dietz A.B.,Mishra A., Womack J.E..
PNAS USA,1993) спинальная димиелинизация SDM из150 проб была обнаружена у трёх быков-доноров; спинальная мышечная атрофия SMA у 7 быков-доноров носителей, 2 быка –донора из 150 исследуемыхимели генетическую аберрацию W-дегенеративную миеллоэнцефаллопатию,263BH2 - гаплотип бурой швицкой породы из 150 исследуемых два быка донорабыли носителем этого заболевания.Для снижения генетически обусловленных эмбриональных и ранних постэмбриональных потерь необходимо установить контроль за распространениемгаплотипов фертильности в популяции скота на территории России. Скрининг наналичие вышеперечисленных генетических дефектов среди отечественного и зарубежного крупного рогатого скота показал, что они встречаются с относительно высокой частотой в спермопродукции заруежных быков-производителей приввозе генетического материала в Российскую Федерацию.Внедрение инновационных методов идентификации мутаций в спермопродукции крупного рогатого скота, обуславливающих наследственные дефектыпозволяет контролировать распространение его в популяции и постепенно ихэлиминировать (Приложение 18).Принимая во внимание экспоненциальный рост числа исследований в области структурной и функциональной геномики животных, в частности крупногорогатого скота, в ближайшее время следует ожидать открытия новых генетических дефектов (Н.А.
Зиновьева, 2016). В ходе выполнения научной работы былаформирована, валидирована, стандартизирована и представлена методика«Идентификация мутаций, ассоциированных с наиболее распространенныминаследственными патологиями крупного рогатого скота голштинской породы,молекулярно-генетическими методами», которая станет действенным инструментом в вопросах контроля и управления рисками, обусловленными распространением генетических аномалий в спермопропродукции отечественного и зарубежного производства в популяции племенных животных на территории Российской Федерации.Национальныестандартыитребованияктестированиюбыков-производителей и контролю качества спермопродукции, как правило, разрабатывают на основе комплексной оценки, учитывающей статус страны по заболеванию и анализ здоровья поголовья животных.
Требования и правила контроля имониторинга должны постоянно совершенствоваться и обновляться по мере по-264ступления новой информации о патогенезе заболеваний, о циркулирующихштаммах известных возбудителей, используемых средствах специфическойпрофилактики и методах диагностики, а также с учетом обнаружения новыхвозбудителей и/или появления информации об изменении роли ранее выявлявшихся и малоизученных патогенов. В настоящее время существующие в РФ требования нормативной документации к контролю генетического материала(сперма и ранние эмбрионы) недостаточны и не содержат в полном объеме весьспектр необходимых требований, предъявляемых к данной продукции.Спермопродукция, поступившая извне на территорию страны, в рамкахдобровольной сертификации исследуют по показателям, указанным в ГОСТ26030 и ГОСТ 54633.
Необходимо еще раз подчеркнуть, что данные регламентирующие документы, по большей части, были ориентированы только для использования внутри страны, не были рассчитаны на массовый импорт такой продукции и требуют актуализации.Согласно данным научных источников, а также полученным нашим данным, в сперме крупного рогатого скота может быть обнаружен многочесленноепредставительство инфекционных агентов, генетических дефектов, морфофункциональные отклонения, репродуктивные аномалии.По утвержденным правилам для ввоза спермопродукции на территориюТаможенного союза быки-доноры по меньшей мере раз в год должны проходитьисследование с негативным результатом на наличие паратуберкулеза, бруцеллеза, лейкоза, трихомоноза, кампилобактериоза, инфекционного ринотрахеита,блутанга и вирусной диареи. Известно, что Международный Ветеринарный сертификат, согласованный с ЕС или США с РФ, обязывает поставлять сперму изплеменных станций, свободных от вышеупомянутых заболеваний, при этом правила, по которым хозяйство признают свободным от конкретных заболеваний,могут отличаться в странах-экспортерах.
Кроме того, свидетельством отсутствияданных инфекций являются результаты исследований, полученные в лабораториях страны-экспортера теми методами и с использованием тех диагностическихнаборов, которые приняты в данной стране. При рассмотрении результатов ис-265следования на отсутствие возбудителей инфекций животных, представляемыхпри ввозе спермы, необходимо учитывать следующие факторы:- скрытое инфицирование животных, например, в случае серопозитивныхбыков, перенесших острую инфекцию во время полового созревания, что приводит к периодическому выделению инфекционного агента в сперме;- вакцинацию живыми вакцинами;- применение различающихся по чувствительности и специфичности лабораторных методов исследований.Согласно действующим Ветеринарным требованиям, предъявляемым приввозе на таможенную территорию Евразийского экономического союза и (или)перемещении между государствами-членами спермы быков-производителей, вовремя содержания в центре по отбору спермы перед её взятием у быковпроизводителей исследуют, в том числе, на инфекционный ринотрахеит, вирусную диарею, кампилобактериоз (Campylobacter fetus venerealis), однако полученные результаты демонстрируют необходимость дополнительного контроляпоставляемой спермопродукции.В связи с тем, что в последние годы против Российской Федерации в области животноводства ведется скрытая биологическая диверсия, учитывая этообъстоятельство, мы рекомендуем проводить экспертизу генетического материла по морфологическим, репродуктивным, генетическим и микробиологическимпоказателям, что позволит обеспечить биологическую и продовольственнуюбезопасность нашей страны.266ЗАКЛЮЧЕНИЕ1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
