Диссертация (1150381)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

На правах рукописиГладиловичВладимир ДмитриевичРазработка новых металл-аффинных сорбентов, содержащихжелезо(III), для решения задач фосфопротеомикиДиссертация на соискание ученой степеникандидата химических наук02.00.11 − коллоидная химия02.00.02 – аналитическая химияНаучные руководители:к.х.н., в.н.с Подольская Екатерина Петровнак.х.н., доцент Суходолов Николай ГеннадьевичСанкт-Петербург20142СодержаниеВведение ............................................................................................................................... 6Актуальность темы .............................................................................................................. 6Научная новизна работы...................................................................................................... 8Практическая значимость работы .......................................................................................

8Основные положения, выносимые на защиту .................................................................... 8Апробация работы ............................................................................................................... 9Публикации .......................................................................................................................... 9Благодарности ......................................................................................................................

91Обзор литературы .........................................................................................................111.1 Металл-аффинная хроматография.........................................................................111.1.1 Общие сведения и принцип действия метода металл-аффиннойхроматографии ................................................................................................................. 111.1.2 Сорбенты для металл-аффинной хроматографии ............................................... 121.1.3 Использование металл-аффинной хроматографии в протеомных ифосфопротеомных исследованиях ..................................................................................

141.2 Фосфопротеомный масс-спектрометрический анализ .........................................191.3 Пленки Ленгмюра-Блоджетт .................................................................................201.3.1 Основные задачи, решаемые с помощью метода Ленгмюра-Блоджетт ............. 211.3.2 Выбор концентрации соли металла в водной субфазе при получениипленок Ленгмюра-Блоджетт стеариновой кислоты........................................................ 221.3.3 Изотермы сжатия пленок Ленгмюра-Блоджетт, содержащих железо(III) .........

22Цели и задачи исследования...............................................................................................242Материалы и методы ....................................................................................................252.1 Материалы ..............................................................................................................252.2 Получение и структурные свойства сорбентов ....................................................262.2.1 Получение металл-хелатного сорбента (МХС) ...................................................

262.2.2 Определение доли перехода кислоты в соль ....................................................... 272.2.3 Установление структурного звена МХС ............................................................. 282.2.4 Атомно-силовая микроскопия ............................................................................. 282.2.5 Сканирующая электронная микроскопия ............................................................ 282.2.6 Стандартизация МХС ...........................................................................................

292.2.7 Определение влажности МХС ............................................................................. 2932.2.8 Синтез металл-оксидного сорбента (МОС) ......................................................... 292.2.9 Определение фазового состава МОС .................................................................. 292.2.10Исследование сорбции фосфорилированного пептида на МОС .................... 302.3 Электрокинетические исследования сорбентов ...................................................302.3.1 Определение электрокинетического потенциала МХС методомпотенциала течения ......................................................................................................... 302.3.2 Определение электрокинетического потенциала МХС методоммикроэлектрофореза ........................................................................................................

312.3.3 Определение электрокинетического потенциала МХС и МОС ......................... 322.4 Определение удельной поверхности сорбентов ...................................................322.4.1 Определение удельной поверхности МХС.......................................................... 322.4.2 Определение удельной поверхности МОС методом низкотемпературнойадсорбции азота ............................................................................................................... 332.4.3 Определение удельной поверхности МОС методом адсорбции красителей .....

332.5 Исследование изотерм сорбции и сорбционной емкости сорбентов ...................342.5.1 Определение сорбционной емкости сорбентов по белку ................................... 342.5.2 Расчет термодинамических характеристик сорбции белка ................................ 362.5.3 Определение сорбционной емкости сорбентов по пептиду ...............................

362.5.4 Расчет термодинамических характеристик сорбции пептидов .......................... 372.5.5 Определение специфичности сорбции на сорбентах .......................................... 372.6 Металл-аффинная хроматография.........................................................................372.6.1 Металл-аффинная хроматография фосфорилированного пептида дляоптимизации десорбции .................................................................................................. 372.6.2 Металл-аффинная хроматография смеси фосфорилированных инефосфорилированных пептидов .................................................................................... 382.6.3 Металл-аффинная хроматография триптического гидролизата казеина ........... 392.6.4 Металл-аффинная хроматография гидролизата клеточного лизата HeLa ......... 392.6.5 Металл-аффинная хроматография пептидов модифицированного зариномальбумина человека .........................................................................................................

402.7 Масс-спектрометрический и хроматографический анализ ..................................402.7.1 Качественный масс-спектрометрический анализ методом МАЛДИ ................. 402.7.2 Количественный хроматографический анализ методом ВЭЖХ-УФ ................. 412.7.3 Количественный хромато-масс-спектрометрический анализ методомВЭЖХ-МС ........................................................................................................................ 4142.7.4 Качественный хромато-масс-спектрометрический анализ методомнаноВЭЖХ-МС ................................................................................................................

423Результаты и обсуждение .............................................................................................433.1 Разработка металл-аффинного сорбента на основе пленок ЛенгмюраБлоджетт, состоящих из стеарата железа(III) .............................................................433.1.1 Получение пленок Ленгмюра-Блоджетт на основе стеарата железа(III) ........... 433.1.2 Исследование структурных звеньев ПЛБ на основе стеарата железа(III) ..........

463.1.3 Стандартизация ПЛБ на основе стеарата железа(III) .......................................... 473.1.4 Микроскопические исследования ПЛБ на основе стеарата железа(III) ............. 483.1.5 Исследование процесса сорбции фосфорилированного белка на ПЛБ наоснове стеарата железа(III) методом атомно-силовой микроскопии............................. 503.1.6 Определение влажности ПЛБ на основе стеарата железа(III) ............................

533.2 Разработка металл-аффинного сорбента на основе оксида железа(III) ...............543.2.1 Получение оксида железа(III) .............................................................................. 543.2.2 Определение фазового состава оксида железа(III) .............................................

553.2.3 Определение размеров частиц оксида железа(III)............................................... 573.2.4 Исследование сорбции фосфорилированного пептида на оксидежелеза(III) методом МАЛДИ масс-спектрометрии ........................................................ 583.3 Сравнение поверхностных свойств сорбентов .....................................................593.3.1 Определение электрокинетического потенциала МХС ...................................... 593.3.2 Определение электрокинетического потенциала МОС ...................................... 643.3.3 Определение удельной поверхности МХС Fe(III) ..............................................

653.3.4 Определение удельной поверхности МОС Fe(III) методомнизкотемпературной адсорбции азота ............................................................................ 663.3.5 Определение удельной поверхности МОС Fe(III) методом адсорбциикрасителя .......................................................................................................................... 673.4 Сравнение сорбционных свойств сорбентов ........................................................703.4.1 Сорбция белка на МХС Fe(III) ............................................................................. 703.4.2 Сорбция белка на МОС Fe(III) .............................................................................

713.4.3 Термодинамические характеристики сорбции белка .......................................... 723.4.4 Определение сорбционной емкости МХС Fe(III) ............................................... 743.4.5 Определение сорбционной емкости МОС Fe(III) ...............................................

763.4.6 Изучение специфичности сорбции пептидов, фосфорилированных поразличным аминокислотам .............................................................................................. 773.4.7 Термодинамические характеристики сорбции пептидов.................................... 7853.5 Фосфопротеомный анализ с использованием металл-аффиннойхроматографии ..............................................................................................................813.5.1 Оптимизация условий металл-аффинной хроматографии.................................. 813.5.2 Изучение специфичности сорбции на примере смеси различныхфосфорилированных пептидов........................................................................................

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации