Диссертация (1150381), страница 6
Текст из файла (страница 6)
Полученные частицы шпателем собирали с поверхностираствора в микропробирку. Для получения нескольких монослоев процедуру повторялис той же субфазой. После приготовления 10 монослоев водный раствор соли железазаменяли на новый.2.2.2Определение доли перехода кислоты в сольа) Определение содержания железа в раствореСодержание железа(III) определяли фотометрически по методике [10] сиспользованием сульфосалициловой кислоты. Метод основан на образованииокрашенныхвкрасныйсульфосалициловойцветкислотойкомплексныхвслабокислойсоединенийсреде.солейДиапазонжелеза(III)сопределяемыхконцентраций: от 0.1 мкг/мл до 10 мкг/мл.
Для построения калибровочного графика вколбу на 50 мл вносили: 0.5; 1.0; 2.5; 5.0; 7.5; 10.0 мл стандартного раствора солижелеза(III) с концентрацией 10 мкг/мл, приливали примерно 30 мл дистиллированнойводы, раствором соляной кислоты доводили до рН 3-5 по индикаторной бумаге. Затемдобавляли 2 мл 20 %-ного раствора сульфосалициловой кислоты, доводили до меткидистиллированной водой, перемешивали и оставляли на пять минут до развитияокраски. Оптическую плотность полученного раствора измеряли при длине волны 500нм в кювете с длиной поглощающего слоя 50 мм по отношению к холостому раствору.28б) Вычисление доли переходаДолю перехода С высчитывали как степень прохождения реакции образованиястеарата с учётом стехиометрических коэффициентов:C3n Fe 3nC17H 35COOH 3n Fe 3,(1)где nFe3+ – число моль ионов Fe3+, nC17H35COOH – число моль стеариновой кислоты.2.2.3Установление структурного звена МХСВ микропробирку перенесли 20 дм2 МХС Fe(III), с помощью дозаторамаксимально удалили избыток жидкой фазы, затем к пленкам добавили 100 мклацетонитрила и оставили на сутки.
Для масс-спектрометрического анализа по методуМАЛДИ на мишень нанесли смесь твердой и жидкой фаз из получившейся смеси.Методика МАЛДИ-масс-спектрометрического анализа представлена в п. 2.7.1.2.2.4Атомно-силовая микроскопияИсследованиясиспользованиемметодаатомно-силовоймикроскопиипроизводили на АСМ Ntegra Aura (NT MDT, Россия).Пленки стеарата железа(III) были получены на описанной в п. 2.2.1 установкеЛенгмюра-Блоджетт, снабженной дополнительно весами Ленгмюра и кронштейном длязакрепления подложки.Твёрдуюподложку(кремниевуюпластину)закрепилинаопускаемомкронштейне, который последовательно погружали в раствор с сформированным наповерхности монослоем стеарата железа(III) и поднимали.
Монослой переносился придвижении подложки вниз, таким образом на поверхности оказывались карбоксильныегруппы с ионами железа. Контроль переноса осуществляли по изменению площади,занимаемой монослоем, при автоматическом поддержании давления в монослое.2.2.5Сканирующая электронная микроскопияИсследования проводили на растровом электронном микроскопе Inspect S (FEI,США), позволяющем получать изображение поверхности исследуемых объектов сразрешением 3 нм.
В качестве источника для формирования электронного пучка былиспользован вольфрамовый катод, ускоряющие напряжения были выбраны из29диапазона 1 – 10 кВ, при этом диаметр сфокусированного электронного пучка лежал вдиапазоне 1-3 нм.2.2.6Стандартизация МХС1000 дм2 МХС Fe(III) с минимальными потерями перенесли в предварительновзвешенныемикропробиркиобъемомфильтровальной бумаги максимально1.5мл.Припереносеспомощьюудаляли излишек жидкой фазы. Затеммикропробирки помещали в вакуумный эксикатор на три дня (давление 15 мм.рт.ст.).После чего микропробирки повторно взвешивали и по разнице масс определяли массусорбента. Процедуру повторяли трижды.2.2.7Определение влажности МХСВ предварительно взвешенную спиновую колонку поместили 300 дм2 МХСFe(III) и с помощью центрифуги (15 сек, 3000 об/мин) отделили лишнюю жидкость.Затем колонку взвесили и по разности масс установили массу влажного сорбента.Далее на колонку нанесли ацетон в таком количестве, чтобы сорбент был погружен внего полностью (200 мкл).
С помощью центрифуги (15 сек, 5000 об/мин) ацетонотделили и колонку с сорбентом выдерживали в вакуумном эксикаторе в течение 30минут (давление 15 мм.рт.ст.) до полного высыхания сорбента. Затем колонку взвесилии установили массу сухого сорбента.2.2.8Синтез металл-оксидного сорбента (МОС)20 г нитрата железа(III) и 4.5 г карбамида были помещены в стеклянный стаканна 500 мл и растворены в 200 мл дистиллированной воды. Полученный раствор былподвергнуттермообработкевбытовоймикроволновойпечипримощностимикроволнового излучения 700 Ватт и частоте 2.45 ГГц в течение 25 минут доудаления газообразных продуктов.
Выход оксида железа – 10.4 мг.2.2.9Определение фазового состава МОСПолученные препараты МОС Fe(III) были подвергнуты рентгенофазовомуанализу на дифрактометре Дифрей 401 (Научные приборы, Россия) с использованиемCoKα-излучения (λ=1.789 нм). Образец МОС Fe(III) был запрессован в кювету,30уплотненную стеклом,излишкибылиубраны скраякюветы.Регистрациядифракционных спектров была выполнена при различных угловых диапазонах 2θ – 2020°, 30-30°, 40-40°, 50-50°. Далее вся полученная информация была обработана впрограмме Difract. Рентгенометрическое определение фазового состава производилипутем сопоставления данных эксперимента dhkl с такими же данными из картотекиPowder Diffraction File (PDF).2.2.10Исследование сорбции фосфорилированного пептида на МОСВ микропробирку было помещено 5,8 мг НРС Fe(III), промыто 200 мклацетонитрила, микропробирка была центрифугирована 5 минут при 16000 об/мин,супернатант был отброшен.
Затем сорбент был промыт 200 мкл 0,1% водного растворатрифторуксусной кислоты, супернатант после центрифугирования 5 минут при 16000об/мин также был отброшен. После этого в микропробирку с сорбентом былодобавлено 200 мкл раствора пептида SSNGHV(pY)EKLSSI (концентрация 25 мкг/мл) в0,1% водном растворе трифторуксусной кислоты и оставлен на 15 минут, после чегомикропробирка была центрифугирована 5 минут при 16000 об/мин, затем супернатантбыл отброшен.
К сорбенту было добавлено 200 мкл 0,1% водного растворатрифторуксусной кислоты для промывки, оставили на 10 минут, затем супернатант былудален. Элюирование было проведено 200 мкл 0,1 М раствора аммиака, фракция послецентрифугирования 5 минут при 16000 об/мин была отобрана в чистую микропробиркудля последующего масс-спектрометрического анализа.2.3 Электрокинетические исследования сорбентов2.3.1ОпределениеэлектрокинетическогопотенциалаМХСметодомпотенциала течения40 монослоев (400 дм2) стеарата кадмия (синтез аналогичен методике п. 2.2.1 сиспользованием хлорида кадмия(II) в концентрации 50 мкМ) перенесли по методуЛенгмюра-Блоджетт на плоские поверхности одновременно двух полуцилиндрическихпризм, из которых затем формировался плоскопараллельный капилляр с ширинойзазора 20-50 мкм и длиной 6 см, определение ζ-потенциала осуществляли вразбавленных (10-6-10-2 М) растворах электролитов методами потенциала и токатечения.
Измерения проводили в воздушном термостате 20±1º С с помощью31электрометра ИТН-7, относительная ошибка определения электрокинетическогопотенциала (с учетом поправки на поверхностную проводимость) составляла в среднем6%. Пленки стеариновой кислоты получали с раствораЭлектрокинетическийпотенциалрассчитывалипоHCl при pH 2.5.уравнениюГельмгольца-Смолуховского с учетом поправки на поверхностную проводимость:ζ=Es(ǽv+ ǽs)η/εε0P,(2)где Р – приложенное давление на капилляр [Па], ǽv – объемная удельнаяэлектропроводность [Ом-1см-1], ǽs – поверхностная удельная электропроводность [Ом1см-1], Е – измеренный потенциал на концах капилляра [мВ], ζ – электрокинетическийпотенциал [мВ], ε, ε0 – диэлектрические проницаемости среды и в вакуумесоответственно.2.3.2ОпределениеэлектрокинетическогопотенциалаМХСметодоммикроэлектрофорезаВ колбу на 50 мл поместили 150 дм2 МХС Fe(III) и добавили 50 мл раствора KClс заданным значением рН.
Регуляторами рН во всех случаях служили растворы HCl иKOH. Снятые мономолекулярные слои (по 5 в каждом опыте) обрабатывали вультразвуковом диспергаторе УЗДН-1 при частоте 22 МГц в течении 3 мин, затемизмеряли электропроводность и электрофоретическую подвижность полученнойсуспензии. Измерения проводили в плоской электрофоретической ячейке (1.25 x 10.3 x150 мм) с ортогональной подсветкой и наблюдением в оптический микроскоп «БиоламР2» с калиброванной сеткой, одно деление которой соответствовало 25 мкм.Напряженность электрического поля составляла от 2.5 до 3.5 В/см, измерения скоростидвижения частиц проводили на двух стационарных уровнях глубины ячейки.Искажения параболичности профиля наблюдаемых скоростей по глубине ячейкивследствие седиментации исследуемых частиц не наблюдалось.Электрокинетический потенциал рассчитывали по формулам 2 и 3:ζ = K·ǽ·l/t,(3)K = ηA/εε0,(4)где l – путь [м], пройденный частицей за время t [сек], ǽ – удельнаяэлектропроводность растворов [Ом-1см-1], η – кинетическая вязкость [пз], ε, ε0 –32диэлектрические проницаемости среды и в вакууме соответственно, А – площадьпоперечного сечения капилляра [м2].2.3.3Определение электрокинетического потенциала МХС и МОСВ колбу на 50 мл помещали 150 дм2 МХС Fe(III) или 10 мг МОС Fe(III) идобавили 50 мл раствора KCl с концентрацией 10-3 или 10-4 моль/л.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
