Диссертация (1150303), страница 15
Текст из файла (страница 15)
(сигналы протонов блочных метиленовых групп); 2,19; 2,4 м.д.(сигналы протонов альтернантных метиленовых групп); 1,37 м.д.; 3,11 м.д.III.6.10. Перевод N,N-диэтилкарбамидных групп сополимера ФП-COONEt2в N,N-диэтиламино группы с использованием BF3*Et2O/NaBH4Раствор BF3*Et2O (0,2 ммоль) в ТГФ (15 мл) медленно прикапывали при комнатнойтемпературе к раствору боргидрида натрия (0,2 мМ) и фторполимера с терминальнымиамидными группами ФП-COONEt2 (0,049 мМ в пересчете наамидные группысополимера) в 25 мл ТГФ в инертной атмосфере. Смесь кипятили с обратнымхолодильником в течение 1,5 часов, затем охлаждали до 0°С и прикапывали 6 мл 3 нраствора соляной кислоты, держа температуру не более 10°С. Затем опять кипятили втечение одного часа. Растворитель отгоняли в вакууме и выделенный полимер промывали0,1 М раствором NaOH три раза, сушили на фарфоровой чашке при температуре 400С втермостате [242].Получено 1 г сополимера с терминальными N,N-диэтиламино- группами (выход80%) (ФП-NEt2).
Продукт охарактеризован 19F и 1H ЯМР спектрами и ИКС (исчезновение85сигналов валентных колебаний –С=О N,N-диэтилкарбамидной группы (1688 см-1))(Прилож.3).45F 2C7CFF 3CCF3СН2 СН2CF2 CFCF321O CF2 CF2 CF3O6CF28CF29CF210O11CF CF3Н2СNEt 219F: -73,2 (F6), -74,0 (F4), -80,5 (F1), -82,3(F3), -120,28 (F9), -128 (F2), -147,0 (F11), -177,0 (F5), -181,2 (F7) м.д.1Н: 1,23; 1,72 м.д. (сигналы протонов блочных метиленовых групп); 2,19; 2,4 м.д.(сигналы протонов альтернантных метиленовых групп);1,39 м.д.; 2,1 м.д.; 3,37 м.д.(сигналы протонов этильных групп)III.7.
Оценка возможных взаимодействий синтезированныхфторполимеров с органическими соединениями методом газовойхроматографииIII.7.1. Приготовление насадочных колонок на основе фторсодержащихполимеровНасадочные колонки, содержащие синтезированные сополимеры с терминальными –SO2F, -SO2NH2, - SO3-N(Et)4+, - COONEt2, группами в качестве стационарных фаз: готовилиследующим образом: к 3,29 г носителя «Хроматон N-AW-DMCS» (0,125 – 0,160 мм)добавляли 0,329 г сополимера (10% , масс.), растворенного в ацетоне, и при интенсивномперемешивании выпаривали растворитель на электрической плитке. Затем высушиваниепродолжали еще 2 ч при 80 ºС и давлении 10 мм рт.
ст. Подготовленным сорбентомзаполняли стальную колонку (182 х 0,25). Перед использованием колонку выдерживали втермостате хроматографа 16 ч при температуре 120 ºС.86III.7.2. Условия газохроматографического разделения органическихсоединенийКонстанты Мак-Рейнольдса и индексы удерживания Ковача для органическихсоединений различных классов определяли при температуре термостата колонки 100 ºC,испарителя 150 ºC, расходе газа-носителя гелия 20 мл/мин; детектор – катарометр ( 200 ºС;120 В).III.8.
Условия разделения модельных смесей водорастворимыхвитаминов группы В, аминокислот и стероидных гормонов методомвысокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ) сучастием высокофторированных соединенийОпределение витаминов и аминокислот проводилось в нормально-фазовом режиме,как описано в [243]. Стационарная фаза – силикагель (хроматографические пластинки«Sorbfil» ПТСХ-АФ-В-УФ), элюент – ацетонитрил-муравьиная кислота, 4:1 (объемн.).Растворыаналитовврабочихконцентрацияхнаносилинапластинымикрошприцом (0,5 мкл) на нагревательном столике (300C). Детектирование аминокислотпроводили опрыскиванием 0,5%-ным раствором нингидрина в этиловом спирте споследующим выдерживанием пластин в течение 3 мин при температуре 100 °С допоявления окрашенных пятен.
Детектирование витаминов и стероидов проводили в УФсвете (254 нм и 365 нм).Для ввода в состав подвижной фазы полимерных высокофторированныхмодификаторов навески сополимеров с различной функциональностью (8 – 100 мг)растворяли в 10 мл элюента (ацетонитрил-муравьиная кислота, 4:1 (объемн.)). Рабочиеконцентрации высокофторированных сополимеров варьировались в диапазоне от 0,8 до 10мг/мл.III.9. Эксперименты в условиях капиллярного электрофореза имицеллярной электрокинетической хроматографии c применениемсинтезированных высокофторированных полимеровПеред началом проведения электрофоретических экспериментов кварцевыйкапилляр промывали по 3 мин дистиллированной водой, 0,1М раствором HCl, затем опятьводой, 0,1 М раствором NaOH, водой и фоновым электролитом.
При проведенииэкспериментов с фторсодержащими полимерами в составе фонового электролита междуанализами капилляр промывали аналогичным образом, но в течение 7 мин растворамищелочи и кислотой, что обусловлено сорбцией полимеров на стенках капилляра.87Работа выполнялась на системе капиллярного электрофореза «Капель 105М»(«Люмэкс»)Lэфф/Lобщсоспектрофотометрическимдетектором.Капилляр:= 50/60 см, внутренний диаметр = 75 мкм. Водное термостатированиекапилляра при 20 °С.Составы используемых фоновых электролитов: 30 мМ и 15 мМ боратный буферный раствор (pH 9,2; рН 10,2), ацетонитрил15% (объемн); 30 мМ и 15 мМ фосфатный буферный раствор (рН 2; рН 2,5; рН 3; рН 4),ацетонитрил 15% (объемн.); 30 мМ и 15 мМ боратный буферный раствор (pH 9,2; рН 10,2), ацетонитрил15, 20, 25 % (объемн), с добавкой высокофторированных полимеров ссульфонатными (ФП-SO3-N(Et)4+)и карбоксилатными (ФП-COONa)группами в диапазоне концентраций 1,5 – 10 мг/мл; 100, 30 мМ и 15 мМ фосфатный буферный раствор (рН 2; рН 2,5; рН 3; рН4), ацетонитрил 15, 20, 25 % (объемн.), сополимеры с терминальнымисульфонатными(ФП-SO3-N(Et)4+),сульфамидными(ФП-SO2NH2),карбамидными (ФП-COONEt2), карбоксилатными (ФП-COONa) и аминогруппами (ФП-NEt2) в диапазоне концентраций 1,5 – 10 мг/мл.Гидродинамический ввод пробы 60 мбар, 2 с; УФ-детектирование (254 нм);напряжение ±20 кВ.
Маркер электроосмотического потока – ДМФА.Стероидные гормоны разделяли методом МЭКХ при рН фонового электролита 2;2,5; 9,2; 10,2 с добавкой 15-25% ацетонитрила и высокофторированных полимеров вразличных концентрациях (Табл.9.1). Гидродинамический ввод пробы 30 мбар, 2 с. УФдетектирование (254 нм). Напряжение + 20 кВ.БелкиразделяливусловияхКЗЭнакапиллярах,модифицированныхвысокофторированными полимерами с терминальными амино- и сульфамиднымигруппами в 100 мМ фосфатном буферном растворе (рН 2). Гидродинамический вводпробы 2 с 30 мбар, УФ-детектирование (214 нм), напряжение +20 кВ.Таблица 9.1.
Поиск условий разделения стероидных гормонов с применениемфторполимера ФП-СОО-К+ФоновыйПолимерныйУсловияэлектролитмодификатор15 и 30 мМ боратныйГидродинамический- +буферный растворФП-СОО Кввод пробы 60 мбар,(рН = 9,0),(2 мг/мл)1 с. Капилляр: Lэфф/L15% СН3СNобщ = 50/60 см,88Разделение стероидныхгормонов-30 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 9,0),15% СН3СNФП-СОО-К(4 мг/мл)30 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 9,0),15% СН3СNФП-СОО-К( 8 мг/мл)15 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 9,0),15% СН3СNФП-СОО-К( 4 мг/мл)30 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 9,0),15% СН3СNФП-СОО-К( 12 мг/мл)30 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 10,0),15% СН3СNФП-СОО-К(12 мг/мл)30 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 10,0),15% СН3СNФП-СОО-К(24 мг/мл)внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с.
Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.89Два пика (совмещают всеаналиты)4 пика (F, E+B, S, Doc)tF = 9,0 c., NF = 19300 т.т.ts = 10,0 c., Ns = 20000 т.тtDOC = 13,0 c.,NDOC = 14600 т.т3 пика (F+E, B+S, DOC)4 пика (F+E, B, S, DOC)tB = 8,6 c., NB = 44290 т.тtS = 9,4 c., NS = 37930 т.т.tDOC = 10,6 c.,NDOC = 89600 т.т..Полное разделение, нонизкая эффективностьПолное разделение, нонизкая эффективность (I =100 мкА)15 мМ боратныйбуферный раствор(рН = 10,0),15% СН3СN30 мМ фосфатныйбуферный раствор(рН = 2,0),15% CH3CNФП-СОО-К(24 мг/мл)ФП-СОО-К(8 мг/мл)Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с.
Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Гидродинамическийввод пробы 60 мбар,2 с. Капилляр: Lэфф/Lобщ = 50/60 см,внутренний диаметр= 75 мкм.Напряжение +20 кВ.Полное разделениеtF = 9,1 c., NF = 163 100 т.т.tE = 9,9 c., NE = 100500 т.т.tB = 10,8 с., NB = 111000 т.т.tS = 11,2 с., NS = 118000 т.т.tDOC = 12,3 с., NDOC = 12300т.т.Разделение 4 из 5 (F+E, B, S,Doc)III.10. Электрофоретическое разделение катехоламинов и белковметодом КЭ на капиллярах, модифицированныхсверхразветвленными полимерамиIII.10.1. Создание покрытий стенок капилляра сверхразветвленнымиполимерамиДо проведения экспериментов по созданию физически-адсорбированных покрытийна внутренней поверхности кварцевого капилляра осуществляли предварительнуюактивацию поверхности кварца путем его промывки 5 мин водой, 1.0 M раствором HCl ,затем10 мин.
водой, 2 часа 2M раствором NaOH и опять водой. В качествемодификаторов испытаны СРП на основе полиэтиленимина с различной степеньюзамещенности терминальных амино-групп (структуры А,В и С) олигосахариднымиостатками (мальтоза Mal, лактоза Lac). Процедура модификации активированнойповерхности внутренних стенок капилляра заключалась в промывке капилляра (10, 30 и60 минут) растворами модификатора в различных концентрациях и при различных рН: 10, 20, 30, 40, 50 мг/мл PEI-Mal-A, B или C в 20 мМ фсфатном буферномрастворе (рН 7); 10, 20, 30, 40, 50 мг/мл PEI-Mal-A, B или C в 50 мМ ацетатном буферномрастворе (рН 4); 10, 20, 30, 40, 50 мг/мл PEI-Mal-A, B или C в 5 мМ NaOH (рН 12).После модификации капилляр промывали 15 мин водой для удаления избыткаполимера и 15 мин фоновым электролитом перед анализом.
Формирование физическиадсорбированного покрытия контролировали по величине ЭОП (маркер – ДМФА).90Модификация внутренней поверхности стенок капилляра комплексами «Cu2+ - PEIMal» проводилась аналогичным образом (промывка капилляра в течение 30 минсоответствующим раствором модификатора). Для приготовления модифицирующегораствора 300 мг полимеров структуры А с мальтозной оболочкой (Mw = 28 600 Да), B (Mw= 21 500 Да) и C (Mw = 13 500 Да) были растворены в 0.5, 1.5, 2.4, 2.5, 2.6, 3.0 мМ CuSO4.III.10.2.Условия электрофоретического разделения катехоламинов ибелков на модифицированных капиллярахЭлектрофоретический анализ смеси катехоламиновЭлектрофоретическое разделение катехоламинов проводили в 50 мМ ацетатномбуферном растворе (УФ детектирование (254 нм), гидродинамический ввод пробы 2 с 30мбар) непосредственно после модифицирования капилляра СРП.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
