Диссертация (1150042), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Схема анализа представлена на рисунке 34.88Рисунок 34 – Общая схема хроматографических методов определения липидного профиляорганов и тканейПервой стадией чаще всего является жидкостная экстракция, причем подавляющеебольшинство исследователей использует один метод [219].
Вторая стадия включает ВЭЖХразделение и масс-спектрометрическое детектирование. Третья - применение методов нецелевой липидомики. Липидомика является разделом метаболомики, занимающимся количественным анализом всего разнообразия липидов (липидома) биологических объектов.
Внаучных исследованиях масс-спектрометрический анализ наиболее часто применяется вкомплексе с высокоэффективной жидкостной хроматографией, позволяющей выполнитьпредварительное разделение веществ анализируемой пробы [220]. Для этого созданы и активно разрабатываются различные базы данных аналитических характеристик, крупнейшими из которых являются LIPID MAPS [221,222], которая содержит масс-спектры, классификации и протоколы анализа 10000 различных липидов и LipidBank [223,224] - японскаябиблиотека, в состав которой входит более 7000 липидов, включая экспериментальные данные и масс-спектры.Примером использования ГХ-МС и предварительного разделения и очистки образцов является работы [225,226].Предложенная процедура совместного определения СЖК и ЭЖК в плазме кровибыла распространена на образцы гомогенатов.
Для этого потребовалось ввести стадию разбавления пробы, поскольку концентрации ЭЖК в гомогенатах существенно выше, чем вкрови. В остальном никаких видоизменений методики не потребовалось. На рисунке 33представлены масс-хроматограммы реконструированные по характеристичным ионамЭЖК в образце печени и головного мозга. Можно заметить, что никаких принципиальныхотличий от результатов подготовки образцов плазмы крови (см. рисунок 15) не наблюдается.89A b u n d a n c eT IC :2 0 .0 2 71 8 0 0 0 0 0E t_ 3 6 _ M .D \ d a ta .m s2 3 .6 4 6ЭЖК образца мозга1 6 0 0 0 0 01 4 0 0 0 0 02 5 .8 2 81 2 0 0 0 0 01 0 0 0 0 0 08 0 0 0 0 06 0 0 0 0 04 0 0 0 0 02 6 .8 1 12 6 .0 2 22 5 .
12563. 5 1 92 1 .6 3 52 0 0 0 0 01 6 .0 9 61 7 .9 4 12 9 .9 7 83 2 .9 2 33 1 .4 7 51 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0 3 0 .0 0 3 2 .0 0 3 4 .0 0AbundanceT im e - - >21600000150000014000001300000120000011000001000000900000800000700000600000500000400000300000200000100000. 016. 01796. 942E3t _. 658. D425\d. 91. 64a0t a. ms224832 354. 124. 32.
1. 6782151 267 6.. 90. 411e:01i mI C3ЭЖК образца печени2TT56. 00191 893298. 070. 32404. 923. 10202 31. 0020. 0022. 0024976. 818722 66 . .35 41 9929. 974. 97 27 03 32 2. 525.234. 31.05629708299. .5931222 2666. 42. 70 09 4 229..3860. 0026. 0028. 0030. 0032. 0034. 0170- - >Рисунок 33 - Масс-хроматограммы реконструированные по характеристичным ионамЭЖК в образце печени и мозгаВ таблицах 26 и 27 представлены результаты определения СЖК и ЭЖК в гомогенатах головного мозга и печени интактных крыс. Результаты приведены в виде медиана (персентиль 5% и 95%).90Таблица 26 – Содержание ЭЖК в тканях печени и головного мозга интактных крысСодержание ЭЖК, мкг/г органаЖКПеченьМозгМедиана 5%195%2Медиана 5%195%2Ундециловая кислота0,30,20,40,40,30,5Лауриновая кислота1,71,42,01,31,11,6Тридекановая кислота1,20,91,30,70,60,9Миристолеиновая2,92,15,30,00,00,0кислотаМиристиновая кислота124,670,2136,1154,8140,0170,8цис-10-пентадекановаяПентадекановая кислота 197,3115,7208,192,686,4118,4Пальмитолеиновая658,6408,4898,8687,0477,9929,0кислотаПальмитиновая кислота 20325,316949,3 23279,1 30917,420784,4 40258,2цис-10-гептадекановаяМаргариновая кислота601,2440,4701,8388,8243,1426,6Гамма-линоленат293,0254,0344,48,28,013,4Линолевая кислота98,775,4148,0185,6140,2243,0Олеиновая кислота5837,34093,27734,7 33019,820906,4 38563,5ЛинолелаидатЛиноленовая кислота165,4136,7229,015,714,121,8Элаидиновая кислота2714,11716,63107,2 8247,74898,18911,9Стеариновая кислота14122,011501,2 16360,4 25459,717919,4 32885,5Арахидоновая кислота23596,022286,0 25365,5 20810,915651,6 29451,9цис-5,8,11,14,17эйкозапентаеновая358,0338,4474,2221,4206,0247,7кислотацис-8,11,14735,0587,3834,7573,8419,0687,6Эйкозатриеноваяцис-11,14327,2258,1438,1383,1259,2414,1эйкозадиеновая кислотаГондоиновая(цис-11158,3127,3185,84131,02841,65764,4эйкозеновая кислота)цис-11,14,17Эйкозатриеновая13,44,414,9кислотаАрахиновая кислота58,949,863,2479,1335,4583,5Генэйкозановая кислота 2,11,82,273,665,848879,1цис-4,7,10,13,16,19докозагексаеновая3541,93349,14043,3 20806,315910,9 28241,4кислотацис-13,16-докозеновая6,05,76,362,460,370,6кислотаЭру́ковая кислота11,29,612,9380,5305,0512,7Бегеновая кислота13,512,415,6389,5313,2465,7Трикозановая кислота4,73,34,8293,5209,1351,8Нервоновая кислота7,55,58,5331,6258,0396,1Лигноцериновая25,618,031,6425,8332,2528,3кислотаПримечание: 1 – персентиль 5%, 2 – персентиль 95%91Таблица 27 – Содержание СЖК в тканях печени и головного мозга крысСодержание СЖК, мкг/г органаЖКПеченьПеченьМедиана5%195%2Медиана5%1Ундециловая кислота0,00,00,00,40,3Лауриновая кислота1,00,72,02,01,6Тридекановая кислота0,40,30,80,70,6Миристолеат0,00,00,00,00,0Миристиновая кислота 3,31,15,611,45,2цис-10-пентадеценоат0,00,00,00,00,0Пентадекановая3,11,16,74,12,3кислотаПальмитолеиновая12,64,221,127,922,2кислотаПальмитиновая кислота 290,8130,6492,3828,2641,5цис-10-гептадеценоат0,00,00,00,00,0Маргариновая кислота 8,23,317,111,17,8Гамма-линоленат5,92,210,40,90,7Линолевая кислота1,70,92,83,83,5Олеиновая кислота104,637,0184,4875,4790,3линоленлаидат0,00,00,00,00,0Линоленовая кислота3,41,64,70,00,0Элаидиновая кислота43,514,375,6211,5181,0Стеариновая кислота197,987,7320,5554,2485,2Арахидоновая кислота 492,3193,6885,3767,3718,5цис-5,8,11,14,17эйкозапентаеновая4,52,417,94,43,9кислотацис-8,11,1413,64,525,415,214,8Эйкозатриеноваяцис-11,146,62,510,98,78,2эйкозадиеновая кислотаГондоиновая (цис-112,61,14,2101,377,5эйкозеновая кислота)цис-11,14,17Эйкозатриеновая0,00,00,00,00,0кислотаАрахиновая кислота1,10,51,710,76,6Генэйкозановая кислота 0,50,30,91,71,3цис-4,7,10,13,16,19докозагексаеновая116,146,2207,21104,31047,8кислотацис-13,16-докозеновая0,00,00,00,00,0кислотаЭру́ковая кислота0,60,51,29,47,8Бегеновая кислота1,00,81,910,08,6Трикозановая кислота0,00,00,05,95,1Нервоновая кислота0,60,51,49,87,8Лигноцериновая0,90,72,19,88,1кислотаПримечание: 1 – персентиль 5%, 2 – персентиль 95%9295%20,52,70,90,011,90,04,230,8923,90,011,61,24,1970,60,00,0256,9628,6825,25,115,410,2140,90,011,71,91197,40,012,912,76,911,112,0Нарушения редокс-гомеостаза сопровождают многие патологические состояния иимеют особое значение при острых химических отравлениях [227,228].
Многие ксенобиотики индуцируют образование активных форм кислорода (АФК), которые могут участвовать в их биотрансформации. В то же время, некоторые метаболиты обладают свойствамисвободных радикалов и оказывают повреждающее действие на клетки организма [229].Углеводороды не способны сами по себе образовывать свободные радикалы, однакомогут быть вовлечены в механизм возникновения оксидативного стресса опосредованно.Так, показано, что экспонирование гексаном [181,182,230] приводит к избыточному образованию пероксида водорода и МДА – одного из основных продуктов перекисного окисления липидов.Воздействие свободных радикалов на ПНЖК и состав ЖК вызывает изменения вмембранах клеток [231].
В частности, ПНЖК играют важную роль в качестве компонентафосфолипидов в биологической мембране, они существенно менее устойчивы к окислительному стрессу, по сравнению с насыщенными ЖК или мононенасыщенными ЖК [232].Изменения профилей ЖК, в особенности увеличение транс-ЖК и уменьшение цис-ЖК,наблюдалось в печени крыс, пораженной арсенатом натрия [233].Головной мозгСреди химических компонентов головного мозга особое место занимают липиды,высокое содержание и специфическая природа которых придают мозговой ткани характерные особенности.
Значительную часть липидной фракции составляют эфиры холестерола.Любые нарушения метаболизма холестерола могут вызывать нейротоксичность [234]. Точное соответствие между ингибированием стерологенеза и развитием периферическойнейропатии неизвестно. Однако описано ингибирование биосинтеза стерола 2,5-гексанодионом [235]. Холестерол это липидный компонент нейрофиламентов который считается основным липидом свободных от миелина аксонов [236]. Уменьшение содержания холестерола в нервной ткани может изменять текучесть мембран нервов и изменять влияниеАТФаз.Помимо эфиров холестерола в группу липидов головного мозга входят фосфоглицериды, холестерин, сфингомиелины, цереброзиды, ганглиозиды и очень небольшое количество нейтрального жира, как показано в таблице 28.Многие липиды нервной ткани находятся в тесной взаимосвязи с белками, образуясложные системы протеолипидов.
В сером веществе головного мозга фосфоглицериды составляют более 60% от всех липидов, а в белом веществе – около 40%. В белом веществесодержание холестерина, сфингомиелинов и особенно цереброзидов больше, чем в серомвеществе.93Таблица 28 – Липидный состав нервной ткани [237]Общее содержание липидов % от сухой массыВ % от общих липидовХолестеринЦереброзидыГанглиозидыФосфатидилэтаноламиныФосфатидилхолиныФосфатидилсериныФосфатидилинозитолыПлазмалогеныСфингомиелиныСерое вещество32,7Белое вещество54,9Миелин70,022,05,41,722,726,78,72,78,86,927,519,85,414,912,87,90,911,27,727,722,73,815,611,24,80,612,37,9Далее представлены результаты определения СЖК и ЭЖК в гомогенатах головногомозга и печени крыс экспонированных малыми дозами УВ. В мозге крыс обнаружено снижение суммарного содержания ЭЖК, в среднем в 2 раза.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
