Диссертация (1150004), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Финальноедеблокирование проводили, как было описано ранее. Получено: 642 мг (95 %).После очистки целевого соединения с помощью препаративной ВЭЖХ ипоследующей лиофилизации получено 156 мг (общий выход 23 %), чистотапродукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 93.7 %. HRMS (ESI+),m/z: 1173.5728 ([М+Н]+), 1173.5681 рассчитано.1025. ВЫВОДЫ1. Разработан синтез пептидов из областей 1-30, 111-130, 271-290, 381-400, 525540 белка РВ1 РНК-полимеразы вируса гриппа А.
Всего получено 34соединения.2. На основании изучения противовирусной активности синтезированныхсоединений на культуре клеток MDCK в отношении пандемического вирусагриппа A/California/07/2009 (H1N1) pdm09 показано, что пептиды – фрагменты6-13, 6-14, 26-30, 395-400, 531-540 белка РВ1, а также их производныеэффективно подавляют репликацию вируса гриппа.3. Изучение флуоресцентно-меченого фрагмента 6-14 белка РВ1 показало, чтопрепарат проникает через мембрану клетки и действует на ранних стадияхрепликации вируса гриппа.1036.
ЗАКЛЮЧЕНИЕВрезультатепроведенныхисследованийбылиобнаруженыисинтезированы низкотоксичные пептиды – фрагменты белка РВ1, эффективноподавляющиерепликациюпандемическоговирусагриппа(штаммA/California/07/2009 (H1N1) pdm09) в культуре клеток MDCK. Для наиболееактивных соединений – фрагментов 6-13, 6-14, 26-30, 395-400, 531-540 белкаРВ1 были синтезированы N-ацетилированные и C-амидированные аналоги,направленные на увеличение биологической активности базовых соединений.Действительно, в случае фрагментов 6-13, 6-14, 26-30, 531-540 белка РВ1данные модификации в ряде случаев приводили к увеличению индексаселективностиисследуемыхсоединенийприсохранениинизкойихтоксичности для клеток. Для наиболее активного соединения из рядамодифицированных пептидов – N-ацетилированного амида фрагмента 6-14белка РВ1 показано, что оно способно проникать через плазматическуюмембрану клетки, а основной механизм его активности не связан синактивацией внеклеточного вируса, при этом ингибирование репликациивируса происходит на ранних стадиях его жизненного цикла.
Таким образом,пептиды,соответствующиепоаминокислотнойпоследовательностифрагментам белка РВ1, могут служить перспективной основой для дальнейшейразработки средств профилактики и/или терапии гриппа.1047. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙAc ацетилAhx 6-аминогексановая кислотаBос трет-бутилоксикарбонилBzl бензилCTD50 50%-я цитотоксическая дозаDBU 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-енDIC N, N’-диизопропилкарбодиимидDIPEA диизопропилэтиламинDCM дихлорметанDMF диметилформамидED50 50%-я эффективная дозаEDT 1,2-этандитиолFmoc 9-флуоренилметилоксикарбонилHA гемагглютининHOAt 1-гидрокси-7-аза-бензотриазолHOBt 1-гидрокси-бензотриазолHRMS масс-спектрометрия высокого разрешенияМ1 матричный белок 1MDCK клетки Мадин-Дарби почек собакиMTBE метилтретбутиловый эфирNA нейраминидазаNCL нативная химическая лигацияNEP ядерный экспортный белокNMP N-метилпирролидонNP нуклеопротеинNS1 неструктурный белок 1Pbf 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонилPip пиперидинSI индекс селективности105tBu трет-бутилTFA трифторуксусная кислотаTFMS трифторметансульфокислотаTIS триизопропилсиланTrt трифенилметилZ бензилоксикарбонилББВ белок-белковые взаимодействияВИЧ вирус иммунодефицита человекаВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматографияГЭК гидроксиэтилкрахмалДНК дезоксирибонуклеиновая кислотаПЭГ полиэтиленгликольРГА реакция гемагглютинацииРНП рибонуклеопротеинвРНП вирусный РНПРНК рибонуклеиновая кислотавРНК вирионная РНКкРНК комплементарная РНКмРНК матричная РНК1068.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1. http://www.who.int2. Киселев, О. И. Геном пандемического вируса гриппа А/H1N1v-2009 / О.И.Киселев. М.: Изд-во Димитрейд График Групп, 2011. – С. 34–35.3. Киселев, О. И. Химиопрепараты и химиотерапия гриппа / О.И. Киселев.СПб.: Изд-во Росток, 2012. – 272 с.4. Киселев, О. И. Антивирусные препараты для лечения гриппа и ОРЗ. Дизайнпрепаратов на основе полимерных носителей / О.И. Киселев, Э.Г. Деева, А.В.Слита [и др.].
– СПб.: Изд-во Информационно-аналитического центра «Время»,2000. – 132 с.5. De Clercq, E. Antivirals and antiviral strategies // Nature Rev. Microbiol. – 2004. –Vol. 2. – Р. 704–720.6. Craik, D. J.; Fairlie, D. P.; Liras, S.; Price, D. The future of peptide-based drugs //Chemical Biology & Drug Design. – 2013. – Vol. 81. – № 1. – P. 136–147.7. Lipinski, C. A. Drug-like properties and the causes of poor solubility and poorpermeability // Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. – 2000. –Vol. 44. – № 1.
– P. 235–249.8. Marx, V. Watching peptide drugs grow up // Chem. Eng. News. – 2005. – Vol. 83.– № 11. – P.17–24.9. Vlieghe, P.; Lisowski, V.; Martinez, J.; Khrestchatisky, M. Synthetic therapeuticpeptides: science and market // Drug Discovery Today. – 2010. – Vol. 15. – № 1–2. –P. 40–56.10. Ladner, R. C.; Sato, A. K.; Gorzelany, J.; de Souza, M. Phage display-derivedpeptides as therapeutic alternatives to antibodies // Drug Discovery Today. – 2004.
–Vol. 9. – P. 525–529.11. McGregor, D. P. Discovering and improving novel peptide therapeutics // Curr.Opin. Pharmacol. – 2008. – Vol. 8. – P. 616–61912. Guichard, G. Du peptide a` l'analogue peptidique: stratégies de stabilisation de laconformation active, amélioration du profil pharmacocinétique (cyclisation, acides107aminés non naturels, mimes de repliement, modification du squelette) // Atelier deFormation Inserm . – 2004.
– Vol. 150.13. Pichereau, C.; Allary, C. Therapeutic peptides under the spotlight // Eur.Biopharm. Rev. – 2005. –P. 88–91.14. Bray, B. L. Large-scale manufacture of peptide therapeutics // Nat. Rev. DrugDiscov. – 2003. – Vol. 2. – P. 587–593.15.
Pettit, D. K.; Gombotz, W. R. The development of site-specific drugdeliverysystems for protein and peptide biopharmaceuticals // Trends Biotechnol. – 1998. –Vol. 16. – P. 343–349.16. Pajouhesh, H.; Lenz, G. R. Medicinal chemical properties of successful centralnervous system drugs // NeuroRx. – 2005. – Vol. 2. – P. 541–553.17. Witt, K.
A.; Gillespie, T. J.; Huber, J. D.; Egleton, R. D.; Davis, T. P. Peptidedrug modifications to enhance bioavailability and blood–brain barrier permeability //Peptides. – 2001. – Vol. 22. – P. 2239–2243.18. Witt, K. A.; Davis, T. P. CNS drug delivery: opioid peptides and the blood–brainbarrier // The AAPS journal. – 2006. – Vol. 8. – P. E76–E88.19. Hummel, G.; Reineke, U.; Reimer, U. Translating peptides into small molecules //Mol. Biosyst. – 2006. – Vol.
2. – P. 499–508.20. Hruby, V. J. Designing peptide receptor agonists and antagonists // Nat. Rev.Drug Discov. – 2002. – Vol. 1. – P. 847–858.21. Verena, M. A.; Bellmann-Sickert, K.; Beck-Sickinger, A. G. Peptides and peptideconjugates: therapeutics on the upward path // Future Medicinal Chemistry. – 2012. –Vol.
4. – № 12. – P. 1567–1586.22. Pasut, G.; Veronese, F. M. PEG conjugates in clinical development or use asanticancer agents: an overview // Adv. Drug Deliv. Rev. – 2009. – Vol. 61. – № 13. –P. 1177–1188.23. Abuchowski, A.; van Es, T.; Palczuk, N. C.; Davis, F. F. Alteration ofimmunological properties of bovine serum albumin by covalent attachment ofpolyethylene glycol // J.
Biol. Chem. – 1977. – Vol. 252. – № 11. – P. 3578–3581.10824. Abuchowski, A.; McCoy, J. R.; Palczuk N. C.; van Es, T. Davis F.F. Effect ofcovalent attachment of polyethylene glycol on immunogenicity and circulating life ofbovine liver catalase // J. Biol. Chem. – 1977. – Vol. 252. – № 11. – P. 3582–3586.25. Alconcel, S. N. S.; Baas, A. S.; Maynard, H. D. FDA-aproved poly(ethyleneglycol)-protein conjugate drugs // Polymer Chem. – 2011. – Vol. 2. – № 7. – P.1442–1448.26. Binder, U.; Skerra, A. Half-life extension of therapeutic proteins via geneticfusion to recombinant PEG mimetics // Therapeutic Proteins: Strategies to ModulateTheir Plasma Half-Lives.
– 2012. – P. 63–80.27. Larsen, B. D.; Jensen, L. H.; Mork, N. E. “Structural inducing probes (SIP) –blows new hope into the general use of peptides as drugs.” 26th European PeptideSymposium. Montpellier, France. 10–15 September 2001.28. Milton, R. C.; Milton, S. C.; Kent, S. B. Total chemical synthesis of a D-enzyme:the enantiomers of HIV-1 protease show reciprocal chiral substrate specificity //Science. – 1992. – Vol. 256. – № 5062. – P. 1445–1448.29.
Tugyi, R.; Uray, K.; Ivan, D. Partial d-amino acid substitution: Improvedenzymatic stability and preserved Ab recognition of a MUC2 epitope peptide // Proc.Natl Acad. Sci. USA. – 2005. – Vol. 102. – № 2. – P. 413–418.30. Rennert, R.; Wespe, C.; Beck-Sickinger, A. G.; Neundorf, I. Developing novelhCT derived cell-penetrating peptides with improved metabolic stability // Biochim.Biophys. Acta.
– 2006. – Vol. 1758. – № 3. – P. 347–354.31. Bläuenstein, P.; Garayoa, E. G.; Ruegg, D. Improving the tumor uptake of99mTc-labeled neuropeptides using stabilized peptide analogues // Cancer Biother.Radiopharm. – 2004. – Vol. 19. –№ 2. – P. 181–188.32. Wiegand, H.; Wirz, B.; Schweitzer, A.; Camenisch, G. P.; Rodriguez Perez, M. I.;Gross, G.; Woessner, R. et al. The outstanding metabolic stability of a 14C-labeled bnonapeptide in rats – in vitro and in vivo pharmacokinetic studies // Biopharm. DrugDispos. – 2002.
– Vol. 23. – № 6. – P. 251–262.33. Skerra, A.; Theobald, I.; Schlapschy, M. “Biological active proteins havingincreased in vivo and/or in vitro stability.” European Patent 2173890. Apr. 2008.10934. Zander, N.; Eichner, W.; Conradt, H. S. “Conjugates of hydroxalkyl starch and aprotein, prepared by reductive amination.” European Patent 2336192. June 2011.35. Eichner, W.; Knoller, H.; Lutterbeck, K. “Conjugates of hydroxyalkyl starch andG-CSF.” European Patent 1660134. March 2010.36. XL-protein GmbH. www.xl-protein.com/technology.html37. Rink, R.; Arkema-Meter, A.; Baudoin, I.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
