Диссертация (1150004), страница 15
Текст из файла (страница 15)
После очистки целевого соединения спомощью препаративной ВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 172мг (общий выход 57 %), чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХсоставила 95.7 %. HRMS (ESI+), m/z: 753.3552 ([М+Н]+), 753.3526 рассчитано.Синтез фрагмента 395-400 белка РВ1H-Leu1-Leu2-Val3-Glu4-Gly5-Thr6-OHЦелевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 31.95Таблица 31.
Синтез фрагмента 395-400 белка РВ1№реагенты12-Cl-Trt-смолаDIPEAFmocThr(t-Bu)OHFmocGlyOHDICHOBt*H2OFmocGlu(O-tBu)OHFmocValOHFmocLeuOHFmocLeuOH23456М, г/мольν, ммоль129.2397.4297.4126.2153.1443.5339.4353.4353.42.489.921.923.844.64.63.843.843.843.84m, г/ V,мл1.61.28/1.640.761.140.58/0.720.71.71.31.361.36t, ч2222.533После деблокирования Fmoc-группы смола была промыта дихлорметаном(4х10мл), высушена в вакууме и разделена на 2 равные части.
Одну частьиспользовали для финального деблокирования, вторую - для полученияацетилированного производного, синтез которого описан ниже. Получено: 457мг (75 %). После очистки целевого соединения с помощью препаративнойВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 292 мг (общий выход 48 %),чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 96.9 %. HRMS(ESI+), m/z: 631.3630 ([М+Н]+), 631.3661 рассчитано.Синтез N-ацетилированного фрагмента 395-400 белка РВ1Ac-Leu1-Leu2-Val3-Glu4-Gly5-Thr6-OHСмолу, содержащую 0.96 ммоль защищенного фрагмента 395-400 белкаРВ1 со свободной N-концевой аминогруппой (данные по синтезу приведены втаблице 31) перемешивали в течение 1 часа в растворе 0.63 мл (3.84 ммоль)DIPEA и 0.36 мл (3.84 ммоль) ангидрида уксусной кислоты в 10 мл DMF, послечего смола была отфильтрована и промыта DMF (7х10мл).
Финальноедеблокирование проводили, как было описано ранее. Получено: 458 мг (71 %).После очистки целевого соединения с помощью препаративной ВЭЖХ ипоследующей лиофилизации получено 231 мг (общий выход 36 %), чистотапродукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 98.0 %. HRMS (ESI+),m/z: 673.3737 ([М+Н]+), 673.3767 рассчитано.96Синтез амида фрагмента 395-400 белка РВ1H-Leu1-Leu2-Val3-Glu4-Gly5-Thr6-NH2Целевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 32.Таблица 32. Синтез амида фрагмента 395-400 белка РВ1№123456789реагентыFmoc-Rink-амиднаясмолаDCM20% Et2NH/DMFFmocThr(t-Bu)OHDICHOBt*H2ODIPEAAc2OFmocGlyOHDICHOBt*H2OFmocGlu(O-tBu)OHFmocValOHFmocLeuOHFmocLeuOHМ, г/мольν, ммоль1.6m, г/ V, мл2.510 мл2х10 мл; 5 и 20 мин6.42.547.680.97/1.127.681.186.40.83/1.066.40.65/0.63.20.953.840.48/0.63.840.593.21.423.21.093.21.133.21.13397.4126.2153.1129.2102.1297.4126.2153.1443.5339.4353.4353.4t, ч12123333После деблокирования Fmoc-группы смола была промыта дихлорметаном(4х10мл), высушена в вакууме и разделена на 2 равные части.
Одну частьиспользовали для финального деблокирования, вторую - для полученияацетилированного производного, синтез которого описан ниже. Получено: 451мг (89 %). После очистки целевого соединения с помощью препаративнойВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 356 мг (общий выход 71 %),чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 98.7 %. HRMS(ESI+), m/z: 630.3793 ([М+Н]+), 630.3821 рассчитано.Синтез N-ацетилированного амида фрагмента 395-400 белка РВ1Ac-Leu1-Leu2-Val3-Glu4-Gly5-Thr6-NH2Смолу, содержащую 0.8 ммоль защищенного фрагмента 395-400 белкаРВ1 со свободной N-концевой аминогруппой (данные по синтезу приведены втаблице 32) перемешивали в течение 1 часа в растворе 0.53 мл (3.2 ммоль)97DIPEA и 0.3 мл (3.2 ммоль) ангидрида уксусной кислоты в 10 мл DMF, послечего смола была отфильтрована и промыта DMF (7х10мл).
Финальноедеблокирование проводили, как было описано ранее. Получено: 475 мг (88 %).После очистки целевого соединения с помощью препаративной ВЭЖХ ипоследующей лиофилизации получено 373 мг (общий выход 69 %), чистотапродукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 97.3 %. HRMS (ESI+), m/z:672.3916 ([М+Н]+), 672.3927 рассчитано.Синтез фрагмента 411-420 белка РВ1H-Met1-Phe2-Asn3-Met4-Leu5-Ser6-Thr7-Val8-Leu9-Gly10-OHЦелевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 33.Таблица 33.
Синтез фрагмента 411-420 белка РВ1№реагенты12-Cl-Trt-смолаDIPEAFmocGlyOHFmocLeuOHDICHOBt*H2OFmocValOHFmocThr(t-Bu)OHFmocSer(t-Bu)OHFmocLeuOHFmocMetOHFmocAsn(Trt)OHFmocPheOHFmocMetOH2345678910М, г/мольν, ммоль129.2297.4353.4126.2153.1339.4397.4383.4353.4371.5596.7387.4371.50.7753.10.350.70.840.840.70.70.70.70.70.70.70.7m, мг/ V,мкл500401/512104247106/131129238278268247260418271260t, ч2222232435Финальное деблокирование осуществляли описанным ранее способом.Получено: 327 мг (84 %).
После очистки целевого соединения с помощьюпрепаративной ВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 145 мг (общийвыход 37 %), чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила94.9 %. HRMS (ESI+), m/z: 1112.5447 ([М+Н]+), 1112.5479 рассчитано.98Синтез фрагмента 525-530 белка РВ1H-Ile1-Gly2-Val3-Thr4-Val5-Ile6-OHЦелевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 34.Таблица 34.
Синтез фрагмента 525-530 белка РВ1№реагенты12-Cl-Trt-смолаDIPEAFmocIleOHFmocValOHDICHOBt*H2OFmocThr(t-Bu)OHFmocValOHFmocGlyOHFmocIleOH23456М, г/мольν, ммоль129.2353.4339.4126.2153.1397.4339.4297.4353.41.325.270.851.72.042.041.71.71.71.7m, мг/ V,мкл850681/871300577257/318312676577506601t, ч2223314Финальное деблокирование осуществляли описанным ранее способом.Получено: 470 мг (92 %). После очистки целевого соединения с помощьюпрепаративной ВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 150 мг (общийвыход 29 %), чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила95.3 %.
HRMS (ESI+), m/z: 601.3901 ([М+Н]+), 601.3919 рассчитано.Синтез фрагмента 525-535 белка РВ1H-Ile1-Gly2-Val3-Thr4-Val5-Ile6-Lys7-Asn8-Asn9-Met10-Ile11-OHЦелевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 35.Таблица 35. Синтез фрагмента 525-535 белка РВ1№реагенты12-Cl-Trt-смолаDIPEAFmocIleOHFmocMetOHDICHOBt*H2OFmocAsn(Trt)OHFmocAsn(Trt)OHFmocLys(Boc)OH2345М, г/мольν, ммоль129.2353.4371.5126.2153.1596.7596.7468.50.7753.10.511.21.211199m, мг/ V,мкл500401/512177372151/187184597597469t, ч2223367891011FmocIleOHFmocValOHFmocThr(t-Bu)OHFmocValOHFmocGlyOHFmocIleOH353.4339.4397.4339.4297.4353.411111135333939733929735323155424Финальное деблокирование, обработку водным раствором аммиака ипоследующеевосстановлениепроводилиописаннымранееспособом.Получено: 350 мг (58 %).
После очистки целевого соединения с помощьюпрепаративной ВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 165 мг (общийвыход 27 %), чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила94.7 %. HRMS (ESI+), m/z: 1201.6929 ([М+Н]+), 1201.6973 рассчитано.Синтез фрагмента 531-540 белка РВ1H-Lys1-Asn2-Asn3-Met4-Ile5-Asn6-Asn7-Asp8-Leu9-Gly10-OHЦелевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 36.Таблица 36. Синтез фрагмента 531-540 белка РВ1№реагенты12-Cl-Trt-смолаDIPEAFmocGlyOHFmocLeuOHDICHOBt*H2OFmocAsp(O-t-Bu)OHFmocAsn(Trt)OHFmocAsn(Trt)OHFmocIleOHFmocMetOHFmocAsn(Trt)OHFmocAsn(Trt)OHFmocLys(Boc)OH2345678910М,г/моль129.2297.4353.4126.2153.1411.5596.7596.7353.4371.5596.7596.7468.5ν,ммоль1.556.21.22.42.882.882.42.42.42.42.42.42.42.4m, г/ V, млt, ч10.8/1.020.360.850.36/0.450.440.991.431.430.850.891.431.431.122223332.51716;325После деблокирования Fmoc-группы смола была промыта дихлорметаном(4х10мл), высушена в вакууме и разделена на 2 равные части.
Одну частьиспользовали для финального деблокирования, вторую - для полученияацетилированного производного, синтез которого описан ниже. Получено: 495100мг (73 %). После очистки целевого соединения с помощью препаративнойВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 205 мг (общий выход 41 %),чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 94.5 %. HRMS(ESI+), m/z: 1132.5457 ([М+Н]+), 1132.5415 рассчитано.Синтез N-ацетилированного фрагмента 531-540 белка РВ1Ac-Lys1-Asn2-Asn3-Met4-Ile5-Asn6-Asn7-Asp8-Leu9-Gly10-OHСмолу, содержащую 0.6 ммоль защищенного фрагмента 395-400 белкаРВ1 со свободной N-концевой аминогруппой (данные по синтезу приведены втаблице 36) перемешивали в течение 1 часа в растворе 0.4 мл (2.4 ммоль)DIPEA и 0.23 мл (2.4 ммоль) ангидрида уксусной кислоты в 10 мл DMF, послечего смола была отфильтрована и промыта DMF (7х10мл).
Финальноедеблокирование проводили, как было описано ранее. Получено: 504 мг (71 %).После очистки целевого соединения с помощью препаративной ВЭЖХ ипоследующей лиофилизации получено 205 мг (общий выход 29 %), чистотапродукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 93.5 %. HRMS (ESI+),m/z: 1174.5553 ([М+Н]+), 1174.5521 рассчитано.Синтез амида фрагмента 531-540 белка РВ1H-Lys1-Asn2-Asn3-Met4-Ile5-Asn6-Asn7-Asp8-Leu9-Gly10-NH2Целевое соединение было получено по описанной ранее общей методике,количество реагентов, использованных на каждой стадии, приведено в таблице 37.Таблица 37.
Синтез амида фрагмента 531-540 белка РВ1№реагенты1Fmoc-Rink-амиднаясмолаDCM20% Et2NH/DMFFmocGlyOHDICHOBt*H2ODIPEAAc2OFmocLeuOHDIC2345М,г/мольν, ммоль1.15297.4126.2153.1129.2102.1353.4126.2101m, г/ V,мл1.810 мл2х10 мл; 5 и 20 мин3.461.034.150.52/0.654.150.644.60.59/0.764.60.47/0.432.30.812.760.35/0.43t, ч1212678910111213HOBt*H2OFmocAsp(O-t-Bu)OHFmocAsn(Trt)OHFmocAsn(Trt)OHFmocIleOHFmocMetOHFmocAsn(Trt)OHFmocAsn(Trt)OHFmocLys(Boc)OH153.1411.5596.7596.7353.4371.5596.7596.7468.52.762.32.32.32.32.32.32.32.30.420.951.371.370.810.861.371.371.082.5162.532.516255После деблокирования Fmoc-группы смола была промыта дихлорметаном(4х10мл), высушена в вакууме и разделена на 2 равные части. Одну частьиспользовали для финального деблокирования, вторую - для полученияацетилированного производного, синтез которого описан ниже. Получено: 605мг (93 %). После очистки целевого соединения с помощью препаративнойВЭЖХ и последующей лиофилизации получено 220 мг (общий выход 34 %),чистота продукта по данным аналитической ВЭЖХ составила 95.4 %.
HRMS(ESI+), m/z: 1131.5541 ([М+Н]+), 1131.5575 рассчитано.Синтез N-ацетилированного амида фрагмента 531-540 белка РВ1Ac-Lys1-Asn2-Asn3-Met4-Ile5-Asn6-Asn7-Asp8-Leu9-Gly10-NH2Смолу, содержащую 0.576 ммоль защищенного фрагмента 531-540 белкаРВ1 со свободной N-концевой аминогруппой (данные по синтезу приведены втаблице 37) перемешивали в течение 1.5 часов в растворе 0.38 мл (2.3 ммоль)DIPEA и 0.22 мл (2.3 ммоль) ангидрида уксусной кислоты в 10 мл DMF, послечего смола была отфильтрована и промыта DMF (7х10мл).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
