Диссертация (1145983), страница 30
Текст из файла (страница 30)
Механизм действия miR-193b может быть связан с подавлениемтрансляции урокиназного активатора плазминогена PLAU [Ikeda et al., 2012], недостаточнаяпродукция которого при беременности может приводить к ингибированию процессовфибринолиза и, соответственно, к повышению коагуляционных свойств крови, что создаетпредпосылки для возникновения гестоза [Buchholz et al., 2003; Lam et al., 2009] (рисунок 21).120Рисунок 21 – Предполагаемя роль микроРНК miR-34c и miR-193b в патогенезе гестоза[согласно Harapan and Yeni, 2015 с модификациями]Примечания - PLAU - урокиназный активатор плазминогена, PAI1 – ингибитор активатораплазминогена 1 типа.Снижение уровня miR-let-7f, выявленное в нашей работе, ранее было обнаруженоисследователями из Китая [Yang et al., 2011].
Связь miR-let-7f и гестоза изучена недостаточноподробно. Известно, что микроРНК семейства let-7 вовлечены практически во все процессы(пролиферация, апоптоз и воспаление), нарушение регуляции которых способствует развитиюгестоза [Zhang et al., 2012].Содержание miR-98 было снижено в плацентарной ткани при гестозе относительнонормы, что проиворечит результатам исследования Ishibashi O. et al. (2012). В работе Li et al.(2014) показано, что в клетках меланомы человека miR-98 участвует в регуляции продукцииинтерлейкина 6, уровень которого повышен в сыворотке крови беременных с гестозом [Tosun etal., 2010].Нами впервые обнаружено, что в плацентах при гестозе повышен уровень miR-4532 иснижен уровень miR-135b.
В плане патогенеза гестоза для этих микроРНК известны несколькопотенциальных генов-мишеней. Биологический эффект miR-135b может реализоваться через еевоздействие на транскрипт позиционного гена-кандидата гестоза ROCK2 (http://mirdb.org/),экспрессия которого повышена в плацентах пациенток с этим осложнением беременности [Arket al., 2005]. MiR-4532 может обуславливать развитие гестоза путем подавления экспрессии генаальфа-1 цепи коллагена I типа COL1A1 (collagen, type I, alpha 1) (http://mirdb.org), являющегосябелком внеклеточного матрикса [He et al., 2014].
Действительно, у пациенток с ранним гестозомснижена экспрессия гена COL1A1 в плаценте [He et al., 2014]. Эти факты свидетельствуют впользу участия miR-135b и miR-4532 в развитии патологического процесса при гестозе.Полученные результаты относительно изменения их содержания в плаценте требуют121дальнейшей валидации с помощью альтернативных молекулярно-генетических методов.Наряду с этим необходимы экспериментальные исследования для верификации мишенейкандидатов.Таким образом, проведенный анализ позволил выделить ряд микроРНК, содержаниекоторых отличается в образцах плаценты пациенток с гестозом от женщин без осложненийбеременности.
Помимо уже известных идентифицированы пять микроРНК (miR-135b, miR4532, miR-518a, miR-527 и miR-518e), для которых изменение уровня в плаценте при гестозепоказано впервые. Анализ данных литературы показал, что для ряда выявленных микроРНКгены-мишени пока не найдены и неизвестно, как они вовлечены в патологический процесс.
В товремя как для других из них установлено, что их действие связано с нарушением основныхпроцессов плацентации, развитием дисфункции эндотелия, повышением свертываемости кровии артериальной гипертензией – важных звеньев патогенеза гестоза. Полученные данныекосвенно указывают на участие в патогенезе гестоза продуктов ранее установленных геновкандидатов (ACVR2A, TIMP3, ITGB3, ROCK2, COL1A1 и PAI1) и позволяют выявить новые(EFNA3, HOXA9, KCMF1, ISCU, HSD17B1 и FIH). Интересно, что значимость гена PAI1подтверждается результатами анализа ДНК и экспрессии микроРНК.
Полученные результатыподтверждают связь гестоза с нарушениями в содержании микроРНК и могут служить основойдля поиска новых диагностических маркеров этого осложнения беременности. Так, 13выявленных нами микроРНК (miR-515-3p, miR-515-5p, miR-518a, miR-518e, miR-527, miR-518c,miR-519e*, miR-524, miR-210, miR-223, let-7f, miR-34c и miR-135b) в работах других авторовбыли обнаружены в крови беременных [Li et al., 2013; Gunel et al., 2011; Xu et al., 2014; Zhang etal., 2012; Yang et al., 2011; Miura et al., 2010; Chim et al., 2008; Gilad et al., 2008], что позволяетрассматривать эти микроРНК в качестве потенциальных молекулярных маркеров гестоза.Принимая во внимание результаты нашего анализа ассоциаций, представляется интереснымпродолжить исследования по анализу содержания микроРНК с привлечением болеемногочисленных групп пациенток, дифференцированных по анамнестическим данным иклиническим проявлениям гестоза, что, вероятно, даст возможность получить новые данные опатогенезе различных форм гестоза, а также о перспективах использования микроРНК вкачестве диагностических и прогностических биомаркеров этого осложнения беременности.122ЗАКЛЮЧЕНИЕВ настоящем исследовании была изучена роль вариантов полиморфных сайтов 20 генов,относящихся к различным функциональным и метаболическим системам, в формированиипредрасположенности к гестозу у женщин, проживающих в Северо-Западном регионе России.Установлено, что варианты rs6046 гена F7 и rs1799768 гена PAI1 вносят вклад в общуюпредрасположенность к гестозу.
Сочетания генотипов полиморфных сайтов генов PAI1rs1799768, AGT rs699, AGTR2 rs11091046 и ADRB2 rs1042714 играют наибольшую роль вформировании общего риска этого осложнения беременности. При разделении группыпациенток в зависимости от клинических вариантов течения гестоза обнаружено, что генотипTT rs1126643 гена ITGA2 является маркером повышенного риска развития тяжелых формгестоза с подъемом АД≥160/110 мм.рт.ст., генотип AA rs4938303 гена APOA1 - маркеромповышенного риска развития раннего гестоза (до 34 недели беременности). Найдены вариантыизученныхполиморфныхсайтов,ассоциированныесразвитиемгестозанафонегипертонической болезни (rs1801133 гена MTHFR), сахарного диабета (rs1126643 гена ITGA2),заболеваний почек (rs11091046 гена AGTR2), заболеваний щитовидной железы (rs328 гена LPL),ожирения (rs5888 гена SCARB1) и варикозной болезни (rs2695121 гена NR1H2).
Приисследовании совместного влияния вариантов полиморфных сайтов на риск развитияклинических форм гестоза установлено, что вариант генотипа PAI1 (rs1799768) 5G5G + MTHFR(rs1801133) CC ассоциирован со сниженным риском гестоза у женщин с гипертоническойболезнью, PAI1 (rs1799768) 5G4G + ITGA2 (rs1126643) CC и PAI1 (rs1799768) 5G4G + LPL(rs328) CC повышают вероятность гестоза у женщин с сахарным диабетом и заболеваниямищитовидной железы, соответственно. Согласно проведенному ROC-анализу, выявленныегенетические маркеры риска раннего гестоза, гестоза на фоне заболеваний почек,гипертонической болезни, заболеваний щитовидной железы и сахарного диабета имеютсреднюю прогностическую ценность (AUC в пределах 0,61-0,65) и могут быть использованы вклинической практике. На важную роль продуктов генов ITGA2, PAI1, REN, AGT, AGTR2,ADRB2, SCARB1, LPL и NR1H2 в развитии гестоза указывают данные о связи их вариантов склинико-лабораторными признаками патологии.
Для полиморфных сайтов генов FGBrs1800790, ITGB3 rs5918, AGTR1 rs5186, BKR2 rs1799722, ADRB2 rs1042713 и NOS3 rs1800779не удалось обнаружить статистически значимых различий в частотах аллелей и генотипов приразличных типах сравнении групп с гестозом и выборки женщин без осложненийбеременности. Однако были продемонстрированы неслучайные ассоциации вариаций этихгенов с изменчивостью некоторых клинически значимых признаков у больных с гестозом. В123целом, выявленные ассоциации расширяют представления о патогенезе гестоза. Ониперспективны для формирования групп риска развития этого осложнения беременности, атакже для оптимизации профилактических и лечебных мероприятий у женщин СевероЗападного региона.ПомимооценкироливариацийпоследовательностиДНКвформированиипредрасположенности к гестозу в рамках настоящей работы с помощью технологииполногеномного секвенирования были изучены особенности содержания микроРНК в плацентепри гестозе у женщин Северо-Западного региона.
Определены 22 микроРНК, уровни которыхотличаются в образцах плаценты пациенток с гестозом по сравнению с женщинами безосложнений беременности. При сравнении полученных результатов с данными литературыустановлено, что для 5-и микроРНК связь с развитием гестоза показана впервые, 13 микроРНКранее были обнаружены в крови беременных. Полученные результаты подтверждают связьгестоза с изменениями в содержании микроРНК и могут служить основой для поиска новыхдиагностических маркеров этого тяжелого осложнения беременности.ВЫВОДЫ1. Изученные варианты генов PAI1 и F7, а также сочетания вариантов генов PAI1, AGT, AGTR2и ADRB2 ассоциированы с риском гестоза у женщин Северо-Западного региона России.2. Риск тяжелого гестоза повышен у гомозигот TT (rs1126643) по гену ITGA2, риск раннегогестоза - у гомозигот AA (rs4938303) по гену APOA1.3.
Определенные варианты генов ITGA2, MTHFR, AGTR2, LPL, SCARB1 и NR1H2 относятся кфакторам риска гестоза на фоне различных заболеваний.4. Сочетание аллелей гена PAI1 с аллелями генов ITGA2, MTHFR и LPL усиливает риск гестозапри наличии фоновых заболеваний.5. Показана ассоциация между изученными вариантами генов FGB, ITGB3, REN, AGT, AGTR1,AGTR2, BKR2, ADRB2, NOS3, PAI1, NR1H2, SCARB1, LPL и клинико-лабораторнымипоказателями при гестозе.6. Развитие гестоза сопровождается повышением содержания в плаценте 15-ти микроРНК иснижением 7-и микроРНК.124СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАВРП - активированное время рекальцификации плазмыАГ - артериальная гипертензияАД - артериальное давлениеАЛТ - аланин аминотрансферазаАПТВ - активированное парциальное тромбопластиновое времяАСТ - аспартат аминотрансферазаАТ III - антитромбин IIIГЦ - гомоцистеинДАД - диастолическое артериальное давлениеДИ - доверительный интервал (coincidence interval)ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислотаИМТ - индекс массы телаКА - коэффициент атерогенностимикроРНК - микрорибонуклеиновые кислотыМНО - международное нормализованное отношениемРНК - матричная рибонуклеиновая кислотаОАА - общая антиокислительная активностьОШ – отношение шансов (odds ratio)ОЩФ - общая щелочная фосфатазап.о.
- пар основанийПААГ – полиакриламидный гельПАП - плазмин-α2-антиплазминовый комплексПДРФ – полиморфизм длины рестрикционных фрагментовПОНРП - преждевременная отслойка нормально расположенной плацентыПТИ - протромбиновый индексПЦР – полимеразная цепная реакцияПЩФ - плацентарная щелочная фосфатазаРАС - ренин-ангиотензиновая системаРФМК - фибрин-мономерные комплексыРХВ – равновесие Харди–Вайнберга (Hardy–Weinberg equilibrium)САД - систолическое артериальное давлениеСАС - симпатоадреналовая система125ССЗ – сердечно-сосудистые заболеванияТБЕ – буфер, состоящий из триса, борной кислоты и ЭДТАТВ - тромбиновое времяТЕ – буфер, состоящий из триса и ЭДТАТЕМЕД – N',N',N,N-тетраметилэтилендиаминФН - фибронектинХС - общий холестеринХС-ЛПВП -холестерин липопротеидов высокой плотностиХС-ЛПНП - холестерин липопротеидов низкой плотностиХС-ЛПОНП - холестерин липопротеидов очень низкой плотностиЭДТА – этилендиаминтетраацетат NaЭКО - экстракорпоральное оплодотворениеACVR2A - ген рецептора активина A 2-го типа (activin A receptor, type IIA)ADRB2 - ген адренергического рецептора бета 2 (adrenoceptor beta 2)AGT - ген ангиотензиногена (angiotensinogen)AGTR1 - ген рецептора к ангиотензину 2 типа 1 (angiotensin II receptor, type 1)AGTR2 - ген рецептора к ангиотензину II типа 2 (angiotensin II receptor, type 2)APOA1 - ген аполипопротеина A1 (apolipoprotein A-I)BKR2 - ген рецептора 2-го типа к брадикинину (bradykinin receptor B2)CЕТР - ген белкового транспортера эфиров холестерина плазмы (cholesterol ester transfer protein)CОМТ - ген катехол-О-метилтрансферазы (catechol-O-methyltransferase)EFNA3 – ген эфрина А3 (ephrin A3)ERAP1 - ген эндоплазматической аминопептидазы 1 (endoplasmic reticulum aminopeptidase 1)ERAP2 - ген эндоплазматической аминопептидазы 2 (endoplasmic reticulum aminopeptidase 2)F2 - ген фактора свертывания крови II (coagulation factor II)F5 - ген фактора свертывания крови V (coagulation factor V)F7 - ген фактора свертывания крови VII (coagulation factor VII)FC – кратность изменения генной экспрессии (fold change)FGB - ген β-субъединицы фибриногена (fibrinogen beta chain)FIH1 – ген ингибитора гипоксия-индуцируемого фактора альфа (hypoxia-inducible factor 1-alphainhibitor)GWAS– полногеномный анализ ассоциаций (Genome-Wide Association Study)HELLP-синдром - Н — hemolysis (гемолиз); ЕL — еlеvated liver enzymes (повышениеактивности ферментов печени); LP — 1оw рlаtelet соunt (тромбоцитопения)HIF-1α - гипоксия — индуцированный фактор 1-альфа (hypoxia-inducible factor 1-alpha)126HOXA9 – ген гомеобоксного белка A9 (homeobox A9)HSD17B1 – ген гидростероид (17ß) дегидрогеназы (hydroxysteroid 17-beta dehydrogenase 1)IL-4 – ген интерлейкина 4 (interleukin 4)INHBB - гена ингибина бета (inhibin beta)ISCU – ген протеина, собирающего железосерный кластер в митохондриях (iron-sulfur clusterassembly enzyme)ITGA2 - ген интегрина альфа 2 тромбоцитов (integrin alpha 2)ITGB3 - ген интегрина бета 3 тромбоцитов (integrin beta 3)KCMF1 – ген модулирующего фактора активности калиевых каналов 1 типа (potassium channelmodulatory factor 1)LOD - логарифм соотношения шансов (правдоподобия) (logarithm of odds ratio)LPL - ген липопротеинлипазы (lipoprotein lipase)MDR - метод снижения размерности (Multifactor Dimensionality Reduction)MMP2 – ген матриксной металлопротеиназы 2 (matrix metalloproteinase 2)MTHFR - ген метилентетрагидрофолатредуктазы (methylenetetrahydrofolate reductase)NCBI - национальный центр биотехнологической информации (National Center forBiotechnological Information)NODAL – ген фактора роста и дифференцировки (nodal growth differentiation factor)NOS3 - ген синтазы оксида азота 3 (nitric oxide synthase 3)NPL - непараметрический анализ сцепления (Non-parametric Linkage)NR1H2 - ген рецептора LXR β (nuclear receptor subfamily 1, group H, member 2)OR– коэффициент соотношения шансов (odds ratio)PAI1 - ген ингибитора тканевого активатора плазминогена тип 1 (plasminogen activator inhibitor1)PLAU – ген урокиназного активатора плазминогена (urokinase-type plasminogen activator)PSG11 - ген трофобластического бета-1-гликопротеина 11 (pregnancy specific beta-1-glycoprotein11)REN - ген ренина (renin)ROCK2 - ген Rho-зависимой протеинкиназы 2 (Rho-associated, coiled-coil containing proteinkinase–2)SCARB1 - ген скэвенджер-рецептора класса В типа I (scavenger receptor class B, member 1)SDS (sodiumdodecylsulfateNa) – додецилсульфат натрияsFlt-1 - растворимый рецептор сосудистого эндотелиального фактора роста 1 (soluble fms-liketyrosine kinase-1)127STAT6 – ген внутриклеточного активатора транскрипции (signal transducer and activator oftranscription 6)TIMP3 – ген тканевого ингибитора металлопротеиназы 3 типа (metallopeptidase inhibitor 3)VEGFA – ген сосудистого эндотелиального фактора роста A (vascular endothelial growth factorA)WF - фактор Виллебранда (Willebrandt factor)128СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
